阴道微生态环境在人乳头瘤病毒感染中介作用的研究

金丹丹，孙艺秀，葛运生，谢洁琼

1.厦门大学附属妇女儿童医院（厦门市妇幼保健院）中心实验室,福建厦门 361000；2.中国人民解放军陆军第七十三集团军医院检验科,福建厦门 361000

目前,宫颈癌已成为威胁女性生殖健康最常见的恶性肿瘤[1],在中国,每年约14万女性患有宫颈癌,而高危型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)的持续感染是导致宫颈病变的危险因素,据统计每年约15.71%的孕龄期女性曾感染过HPV,大部分都可以自行清除,只有少数人最终发生了宫颈病变[2]。由于宫颈癌的发生是一个漫长的、多因素导致的,对于危险因素的预防及阻断可以及时有效的减少宫颈癌变的发生。目前认为HPV的感染与清除不仅与个体的免疫防御功能有关,还与阴道微生态环境平衡相关[3],重视阴道微环境,及时进行干预是防治宫颈癌变的一个新思路。该研究选取2019年5月—2020年5月该院就诊患者4 459例,通过对患者阴道分泌物的微生态指标进行评价,探讨阴道微生态平衡的改变在HPV感染中扮演的角色。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取某集团军医院就诊患者共4 459例,年龄18～60周岁,平均年龄(42.15±9.47)岁,经患者同意自愿接受HPV基因型检测以及阴道病原学检查,该研究所选病例经过伦理委员会批准。纳入标准:①非月经期,非妊娠期;②两周内未曾接受抗生素治疗的患者;③无宫颈相关手术史；④检查前72 h无性生活史。排除标准:妊娠期或哺乳期妇女；患有各种自身免疫性疾病、其他器官恶性肿瘤、使用免疫抑制剂患者或其他疾病导致免疫功能低下的患者。

1.2 方法

1.2.1 阴道分泌物检测 使用无菌窥阴器充分暴露阴道子宫颈,用2支无菌棉拭子采集阴道壁中上1/3处的分泌物,1支棉拭子加生理盐水涂片后在显微镜下观察清洁度、滴虫、菌群、白细胞等,另外1支棉拭子分泌物检测pH值、过氧化氢酶（H2O2）、唾液酸苷酶、白细胞酯酶、淋球菌、沙眼衣原体等。

1.2.2 阴道微生态实验室检查评价 革兰氏染色后镜

检:①菌群密度:在10×100倍的浸油显微镜下,观察菌群密度,按每个视野细菌平均数记录为I～IV级(记为+～++++)。②多样性:根据细菌的种类数,结果被划分为I～IV级(表示为+至++++)。

1.2.3 HPV基因型检测 采用窥阴器暴露子宫颈,用宫颈刷在子宫颈口按照顺时针方向轻轻旋转3～5圈,将宫颈刷存放在细胞保存液中,采用多重聚合酶链式（polymerase chain reaction,PCR）进行HPV基因分型检测。

1.3 观察指标

主要观察HPV感染基因分型及阴道微生物功能指标:阴道菌群密度及多样性、pH值、乳酸菌、过氧化氢酶、白细胞酯酶、唾液酸苷酶,阴道病原微生物:沙眼衣原体、淋球菌、白假丝酵母菌。

1.4 统计方法

选择SPSS 20.0统计学软件进行数据对比分析,其中计数数据采用例数与百分比（%）表示,比较采用χ2检验,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV基因型检出情况

HPV基因型检测结果如下图显示,其中感染最常见的基因型是HPV16,其次是HPV52、HPV18,检出情况见表1。

表2 HPV感染与阴道微环境比较[n(%)]

2.2 HPV与阴道微生态环境

HPV阳性组中细菌密度、多样性、乳酸杆菌异常在HPV阳性组中所占比例较高,分别为24.16%、16.54%、14.42%,在HPV阴性组分别为8.32%、6.02%、8.40%,两组相比差异有统计学意义（P＜0.05)。pH＞4.5、清洁度异常、沙眼衣原体感染、H2O2、唾液酸苷酶、白细胞酯酶异常同样在HPV阳性组感染较高,在HPV阳性组中异常率分别为12.56%、10.64%、8.47%、9.13%、11.3%、14.22%,在HPV阴性组中异常率分别为6.34%、3.96%、4.32%、5.94%、7.63%、4.81%,两组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,且相关系数r＞0,具有相关性。在HPV阳性组淋球菌、滴虫、白假丝酵母菌感染率分别为7.92%、5.50%、9.03%,在HPV阴性组异常率分别为6.42%、4.52%、7.43%,两组相比差异无统计学意义（P＞0.05）,虽然r＞0但考虑为偶然因素造成,说明淋球菌、TV、白假丝酵母菌感染与HPV无相关性,结果见表2所示。

表1 HPV基因型检出情况

3 讨论

宫颈癌在我国呈逐年增高且低龄化的趋势[4],高危型人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）的持续感染是宫颈癌变的危险因素,随着人们对微生态平衡的研究深入,微生态平衡在维持人类生殖健康中的作用越来越受到重视[5],宫颈微生态环境的改变是否会影响HPV的感染、致病、癌变等已成为目前研究的热点[6]。该研究通过分析4 459例患者阴道微生态指标,探讨微生态环境在HPV感染中所起到的作用。

3.1 菌群密度、多样性、乳酸杆菌与HPV感染相关性

Kyrgiou[7]研究表明在乳酸杆菌缺乏组HPV阳性且具有菌群密度、多样性改变的妇女发生发生癌变的风险显著高于HPV阴性组(OR:34.1,95%CI:4.95～284.5)。该研究HPV感染阳性组中,菌群密度、多样性、乳酸杆菌异常率最高,分别占24.16%、16.54%、14.42%,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,说明菌群密度、多样性改变及乳酸杆菌异常能够促进HPV感染。

3.2 pH值与清洁度与与HPV感染的相关性

研究指出[8]阴道的pH值升高是CIN发生的危险因素（P＜0.01,OR值为4.77）,该研究中pH值异常、清洁度下降在HPV阳性组所占比例分别为12.56%、10.64%,在HPV阴性对照组中异常率为6.34%、3.96%,两组相比差异有统计学意义(P＜0.05),相关系数r＞0,说明pH值与清洁度异常在HPV感染中发挥促进作用,两者具有相关性。

3.3 阴道毛滴虫、白假丝酵母菌与HPV感染的相关性

Ruei-Yu[9]发现滴虫病与宫颈病变具有相关性（AOR 2.656,95%CI=1.411～5.353,P=0.003）。而孟龄婷[10]认为VVC与HPV感染无关。该研究滴虫与白假丝酵母菌在HPV感染阳性组中的感染率为5.50%与9.03%,与HPV阴性对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05),由于样本量有限,需要进一步观察研究。

3.4 沙眼衣原体、淋球菌与HPV感染的相关性

研究表明[11]血清沙眼衣原体抗体与CIN风险增加显著相关(OR=7.3,95%CI:1.5～35.2）,万彬等[12]发现HPV和淋球菌合并感染会提高发生HSIL(RR=4.970,95%CI:2.174～11.358,P＜0.01)的风险。该研究中衣原体在HPV阳性组中感染率为8.47%,显著高于HPV阴性对照组(4.32%)（P＜0.05)。而淋球菌在HPV阳性组中感染率为7.92%,在HPV阴性对照组中感染率为6.42%,两组相比差异无统计学意义(P＞0.05),在该研究中沙眼衣原体会增加HPV感染的风险,而淋球菌与HPV感染无相关性。

3.5 唾液酸苷酶、白细胞酯酶、过氧化氢酶与HPV感染的相关性

朱若熙等[13]发现唾液酸苷酶阳性与H2O2阳性是CIN发生的风险因素,该实验中唾液酸苷酶在HPV阳性组感染率显著高于HPV阴性对照组（11.3%、7.63%),两组相比差异有统计学意义(r＞0,P＜0.05),H2O2在HPV阳性组中感染率为9.13%,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,说明唾液酸苷酶和H2O2在HPV感染中起协同促进作用。

张晓芳等[14]发现,白细胞酯酶阳性可以促进HPV感染,两者具有相关性（r=0.64,P＜0.01),该次实验在HPV阳性组中,白细胞酯酶阳性率达14.22%,在对照组中异常率为4.81%,两组相比差异有统计学意义(r=0.160,P＜0.05),说明白细胞酯酶在HPV感染及宫颈病变中起着促进作用。

综上所述,阴道微生态环境失衡不仅会导致HPV感染率增加,也会提高宫颈癌变的风险。因此,临床中通过对阴道微生态环境进行监控,进而规范治疗阴道中存在的各类疾病,通过这种简单的干预手段,对降低HPV感染的风险提供重要的临床应用价值。