苗药血人参中黄酮类化学成分研究

张云封，昝妮利，朱枝祥，王文萱，刘 莉，张仕林，宋月林，霍会霞，屠鹏飞，赵云芳*，李 军*

1.北京中医药大学中药学院 中药现代研究中心，北京 100029

2.贵州汉方药业有限公司，贵州 贵阳 550081

血人参为豆科蝶形花亚科（Papilionoideae）木蓝属植物茸毛木蓝Indigofera stachyodesLindl.的干燥根，主要分布于我国湖北、广西、贵州、云南等地，其为贵州苗族常用药，味甘、微苦，性温，具有滋阴补虚、调经摄血、活血舒筋等功效，主治崩漏、体虚久痢、肠风下血、溃疡不敛、风湿痹痛、跌打损伤、疳积等症[1]。文献报道，血人参主要含有黄酮类和甾醇类等成分，具有抗炎、抗菌和抗氧化等药理活性[2-4]。课题组前期发现，血人参乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位能够抑制脂多糖（LPS）诱导RAW 264.7 巨噬细胞释放一氧化氮（NO），半数抑制浓度（IC50）值为58.9 μg/mL。为阐明其药效物质，本研究对血人参乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位进行了系统的化学成分研究，共分离鉴定了24 个黄酮类成分，分别鉴定为芒柄花素（formononetin，1）、7-羟基-3′,4′-二甲氧基异黄酮（7-hydroxy-3′,4′-dimethoxy-isoflavone，2）、染料木素（genistein，3）、毛蕊异黄酮（calycosin，4）、大豆素（daidzein，5）、farnisin（6）、3′,4′,7-三羟基黄酮（3′,4′,7-trihydroxyflavone，7）、木犀草素（luteolin，8）、漆黄素（fisetin，9）、甘草素（liquiritigenin，10）、erycibenin D（11）、3,4′,7-三羟基二氢黄酮（3,4′,7-trihydroxyflavanone，12）、二氢山柰酚（dihydrokaempferol，13）、黄颜木素（fustin，14）、6,4′-二羟基-3′-甲氧基橙酮（6,4′-dihydroxy-3′-methoxyaurone，15）、硫黄菊素（sulfuretin，16）、(–)-3,4′,7-三羟基-3′-甲氧基黄烷[(–)-3,4′,7-trihydroxy-3′-methoxyflavan，17]、儿茶素（catechin，18）、表儿茶素（epicatechin，19）、(-)-epicatechin-3-O-p-hydroxybenzoate（20）、美迪紫檀素-3-O-β-D-葡萄糖苷（medicarpin-3-O-β-D-glucoside，21）、2′,4′-二甲氧基-3′-羟基异黄烷-6-O-β-D-葡萄糖苷（2′,4′-dimethoxy-3′-hydroxy-isoflavan-6-O-β-D-glucoside，22）、7-羟基色原酮（7-hydroxychromone，23）和5,7-二羟基色原酮（5,7-dihydroxychromone，24）。其中，化合物2、5～7、11～15、17、20～24 均为首次从木蓝属植物中分离得到，化合物1、10 和16为首次从血人参中分离得到。化合物3、7、8、10、15 和16 能够抑制LPS 诱导巨噬细胞RAW 264.7 释放NO，其IC50在7.3～27.3 μmol/L。

1 仪器与材料

1.1 仪器与试剂

高效液相-离子阱-飞行时间质谱仪（日本岛津公司）；Varian Inova-500 型核磁共振仪（美国Varian公司）；岛津LC-20AT 半制备型高效液相（日本岛津公司）；半制备HPLC 色谱柱（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm；SPOLAR C18S5，250 mm×10 mm，5 μm）；硅胶GF254预制薄层色谱板（青岛海洋化工厂）；柱色谱硅胶（200～300 目，青岛海洋化工厂）；ODS（40～63 μm，德国Merck 公司）；SephadexTMLH-20（瑞典GE Healthcare Bio-Sciences AB 公司）；色谱甲醇和乙腈（美国Fisher 公司）；提取分离所用石油醚、正己烷、醋酸乙酯、二氯甲烷和甲醇均为天津市致远化学试剂有限公司的分析纯试剂；吲哚美辛和脂多糖（Sigma-Aldrich 公司）；NO 检测试剂盒（北京普利莱基因技术有限公司）。

1.2 细胞株

小鼠巨噬细胞系RAW 264.7购自北京协和医学院基础医学研究所细胞中心。

1.3 药材

血人参于2017年2月采自贵州省六枝特区，经北京大学药学院屠鹏飞教授鉴定为茸毛木蓝I.stachyodesLindl.的干燥根。药材标本（ZY17020807）存放于北京中医药大学中药学院中药现代研究中心。

2 方法

2.1 提取与分离

血人参药材（20 kg）干燥、粉碎后，依次用95%、70%、50%乙醇回流提取（每次溶剂120 L，回流2 h），提取液减压回收溶剂，得到总浸膏（3.2 kg）。总浸膏用50%甲醇-水分散后，依次用正己烷、醋酸乙酯萃取，得到正己烷部位（20.2 g）、醋酸乙酯部位（945.4 g）和水部位（1628.0 g）。

醋酸乙酯部位（418.4 g）经硅胶（200～300 目）柱色谱分离，正己烷-醋酸乙酯（1∶0→0∶1）梯度洗脱得到10 个流分（Fr.A～J）。Fr.B（8.57 g）经硅胶柱色谱，正己烷-醋酸乙酯（1∶0→0∶1）梯度洗脱得到11 个流分（Fr.B1～B11）。Fr.B9 经Sephadex LH-20 柱色谱，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱得到9 个流分（Fr.B9a～B9i）。Fr.B9d 经半制备液相[乙腈-水（35∶65）]分离纯化得到化合物1（tR＝27.0 min，4.0 mg）；Fr.B9g 经半制备液相[乙腈-水（25∶75）]分离纯化得到化合物10（tR＝23.0 min，43.2 mg）；Fr.B9h 经半制备液相[甲醇-水（65∶35）]分离纯化得到化合物3（tR＝16.0 min，1.5 mg）。Fr.B10 经Sephadex LH-20 柱色谱，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱得到9 个流分（Fr.B10a～B10i）。Fr.B10d 经半制备液相[乙腈-水（35∶65）]分离纯化得到化合物2（tR＝20.0 min，2.5 mg）；Fr.B10g 经半制备液相[乙腈-水（5∶95→55∶45）]分离得到化合物23（tR＝15.0 min，26.5 mg）和4 个流分（Fr.B10gb～B10ge），Fr.B10gb 经半制备液相[甲醇-水（35∶65）]分离纯化得到化合物17（tR＝17.0 min，5.2 mg）和11（tR＝25.0 min，30.1 mg）；Fr.B10gc 经半制备液相[乙腈-水（27∶73）]分离纯化得到化合物4（tR＝23.0 min，2.9 mg）；Fr.B10gd经半制备液相[乙腈-水（35∶65）]分离纯化得到化合物15（tR＝17.0 min，7.3 mg）。Fr.C（1.85 g）经Sephadex LH-20 柱色谱，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱得到3 个流分（Fr.C1～C3）。Fr.C2（1.60 g）经ODS 分离，甲醇-水（20∶80～100∶0）梯度洗脱，TLC 检测，合并得8 个流分（Fr.C2a～C2h）。Fr.C2e经半制备液相[乙腈-水（38∶62）]分离纯化得到化合物6（tR＝10.0 min，2.8 mg）；Fr.C2e 再经半制备液相[甲醇-水（66∶34）]分离纯化得到化合物5（tR＝9.0 min，2.8 mg）；Fr.C2c 经半制备液相[乙腈-水（22∶78）]分离纯化得到化合物12（tR＝19.0 min，9.0 mg）、24（tR＝23.0 min，1.2 mg）和13（tR＝27.0 min，2.7 mg）。Fr.G（7.25 g）经ODS 柱色谱，甲醇-水（10∶90→100∶0）梯度洗脱得到9 个流分（Fr.G1～G9）。Fr.G6 出现白色沉淀，经纯化后得到化合物21（14.7 mg），母液经Sephadex LH-20 柱色谱，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脱得到5 个流分（Fr.G6a～G6e）。Fr.G6c 经半制备液相[乙腈-水（42∶58）]分离纯化得到化合物7（tR＝9.0 min，4.3 mg）和16（tR＝11.0 min，64.4 mg）；Fr.G6c 再经半制备液相[甲醇-水（50∶50）]分离纯化得到化合物8（tR＝31.0 min，1.4 mg）。Fr.G7（1.1 g）经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇洗脱得到5 个流分（Fr.G7a～G7e），Fr.G7c 经半制备液相[甲醇-水（65∶35）]分离纯化得到化合物22（tR＝25.0 min，1.2 mg）。Fr.G5（1.2 g）经Sephadex LH-20 柱色谱，甲醇-水（80∶20）洗脱得到6 个流分（Fr.G5a～G5f）。Fr.G5b 经半制备液相[甲醇-水（33∶67）]分离纯化得到化合物14（tR＝20.0 min，48.6 mg）。Fr.G5e 经半制备液相[乙腈-水（30∶70）]分离纯化得到化合物20（tR＝15.0 min，4.2 mg）；Fr.G5e 再经半制备液相[乙腈-水（35∶65）]分离纯化得到化合物9（tR＝11.0 min，4.8 mg）。Fr.G4（1.2 g）经Sephadex LH-20 柱色谱，甲醇洗脱得到5 个流分（Fr.G4a～G4e），Fr.G4d经半制备液相[甲醇-水（22∶78）]分离纯化得到化合物18（tR＝20.0 min，67.4 mg）；Fr.G4d 再经半制备液相[乙腈-水（27∶73）]分离纯化得到化合物19（tR＝22.0 min，42.5 mg）。

2.2 细胞活力实验和抗炎活性实验[5]

取对数期生长的RAW 264.7细胞制备细胞数量为2×105个/mL 细胞悬浮液，加入96 孔板，每孔100 μL，于37 ℃在5% CO2的培养箱中培养24 h。吸出培养基，加入浓度为100 μmol/L 的待测化合物或阳性对照药（吲哚美辛），孵育24 h 后弃去培养基，加入0.5 mg/mL MTT，37 ℃孵育4 h，弃去MTT，每孔加入150 μL DMSO，置摇床上震荡10 min，待结晶充分溶解后测定570 nm 吸光度（A），并计算化合物对RAW 264.7 细胞生长的抑制率。

细胞生长抑制率=(A空白－A给药)/A空白

抗炎活性采用抑制NO 生成实验，以LPS 诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7 细胞为检测模型，利用Griess 法测定细胞培养上清中NO 浓度。取对数期生长的RAW 264.7 细胞以2×105个/mL的浓度接种于96 孔板，于37 ℃、5% CO2的培养箱中培养24 h。弃去培养基，将待测化合物用培养基稀释成不同浓度的工作液，每个浓度设3 个复孔。作用于RAW 264.7 细胞1 h 后，加入终质量浓度0.5 mg/mL 的LPS刺激RAW 264.7 细胞，37 ℃孵育4 h 后，采用Griess试剂盒测定细胞上清液中的NO 浓度。

3 结果

3.1 结构鉴定

化合物1：黄色粉末，ESI-MSm/z:267[M－H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:3.82(3H,s,4′-OCH3),6.58(1H,brs,H-8),6.76(1H,dd,J=8.9,2.3 Hz,H-6),6.97(2H,d,J=8.9 Hz,H-3′,5′),7.45(2H,d,J=8.9 Hz,H-2′,6′),7.91(1H,d,J=8.9 Hz,H-5),8.03(1H,s,H-2)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:55.7(4′-OCH3),104.0(C-8),114.7(C-6,3′,5′),120.5(C-10),125.1(C-3),126.2(C-1′),127.5(C-5),131.4(C-2′,6′),154.0(C-2),159.0(C-9),160.9(C-4′),161.0(C-7),178.1(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[6]，故鉴定化合物1 为芒柄花素。

化合物2：淡黄色粉末，ESI-MSm/z:297[MH]-。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ:3.78(6H,s,3′,4′-OCH3),6.87(1H,d,J=1.5 Hz,H-8),6.94(1H,dd,J=9.0,1.5 Hz,H-6),6.99(1H,d,J=8.3 Hz,H-5′),7.12(1H,dd,J=8.3,2.0 Hz,H-6′),7.19(1H,brs,H-2′),7.98(1H,d,J=8.8 Hz,H-5),8.36(1H,s,H-2),10.80(1H,s,7-OH)；13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δ:55.5(3′,4′-OCH3),102.1(C-8),111.5(C-5′),112.8(C-2′),115.2(C-6),116.6(C-10),121.2(C-6′),123.3(C-3),124.6(C-1′),127.3(C-5),148.3(C-3′),148.6(C-4′),153.3(C-2),157.4(C-9),162.6(C-7),174.6(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[7]，故鉴定化合物2 为7-羟基-3′,4′-二甲氧基异黄酮。

化合物3：灰白色粉末，ESI-MSm/z:269[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.22(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),6.34(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.84(2H,d,J=8.1 Hz,H-3′,5′),7.37(2H,d,J=8.1 Hz,H-2′,6′),8.06(1H,s,H-2)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:94.8(C-8),100.1(C-6),106.3(C-10),116.2(C-3′,5′),123.3(C-3),124.7(C-1′),131.0(C-2′,6′),154.8(C-2),158.8(C-4′),159.7(C-9),163.9(C-5),166.0(C-7),182.3(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[8]，故鉴定化合物3 为染料木素。

化合物4：白色粉末，ESI-MSm/z:283[M－H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:3.89(3H,s,4′-OCH3),6.84(1H,d,J=2.2 Hz,H-8),6.85(1H,d,J=8.2 Hz,H-5′),6.93(1H,dd,J=8.7,2.2 Hz,H-6),6.96(1H,dd,J=8.2,1.9 Hz,H-6′),7.16(1H,d,J=1.9 Hz,H-2′),8.05(1H,d,J=8.7 Hz,H-5),8.16(1H,s,H-2)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:56.4(4′-OCH3),103.3(C-8),114.0(C-5′),116.2(C-6),116.7(C-2′),118.0(C-10),122.9(C-6′),124.8(C-3),125.9(C-1′),128.5(C-5),147.8(C-3′),148.8(C-4′),154.8(C-2),159.8(C-9),165.1(C-7),178.1(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[9]，故鉴定化合物4 为毛蕊异黄酮。

化合物5：白色粉末，ESI-MSm/z:253[M－H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.84(1H,d,J=2.4 Hz,H-8),6.85(2H,d,J=8.6 Hz,H-3′,5′),6.93(1H,dd,J=8.8,2.4 Hz,H-6),7.37(2H,d,J=8.6 Hz,H-2′,6′),8.05(1H,d,J=8.8 Hz,H-5),8.13(1H,s,H-2)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:103.2(C-8),116.2(C-3′,5′),116.6(C-6),118.1(C-10),124.3(C-3),125.9(C-1′),128.5(C-5),131.4(C-2′,6′),154.6(C-2),158.7(C-9),159.8(C-4′),164.9(C-7),178.2(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[10]，故鉴定化合物5 为大豆素。

化合物6：黄色粉末，ESI-MSm/z:283[M－H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:3.98(3H,s,4′-OCH3),6.71(1H,s,H-3),6.93(1H,dd,J=8.8,2.2 Hz,H-6),6.95(1H,d,J=8.3 Hz,H-5′),6.99(1H,d,J=2.2 Hz,H-8),7.51(1H,d,J=2.1 Hz,H-2′),7.54(1H,dd,J=8.3,2.1 Hz,H-6′),7.97(1H,d,J=8.8 Hz,H-5)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:56.6(4′-OCH3),103.5(C-8),105.5(C-3),110.6(C-2′),116.3(C-6),116.8(C-5′),117.2(C-10),121.6(C-6′),124.0(C-1′),127.7(C-5),149.5(C-3′),151.9(C-4′),159.7(C-9),165.1(C-7),165.9(C-2),180.3(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[11]，故鉴定化合物6 为farnisin。

化合物7：黄色粉末，ESI-MSm/z:269[M－H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.63(1H,s,H-3),6.91～6.97(3H,m,H-6,8,5′),7.39～7.42(2H,m,H-2′,6′),7.96(1H,d,J=8.6 Hz,H-5)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:103.4(C-8),105.1(C-3),114.1(C-2′),116.2(C-6),116.8(C-5′),117.2(C-10),120.2(C-6′),124.0(C-1′),127.7(C-5),147.0(C-3′),150.8(C-4′),159.6(C-9),164.9(C-7),166.0(C-2),180.3(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[12]，故鉴定化合物7 为3′,4′,7-三羟基黄酮。

化合物8：黄色粉末，ESI-MSm/z:285[M－H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.21(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),6.44(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.55(1H,s,H-3),6.90(1H,d,J=8.2 Hz,H-5′),7.37～7.40(2H,m,H-2′,6′)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:95.0(C-8),100.1(C-6),103.8(C-3),105.3(C-10),114.1(C-2′),116.8(C-5′),120.3(C-1′),123.7(C-6′),147.1(C-3′),151.0(C-4′),159.4(C-9),163.2(C-5),166.1(C-2),166.3(C-7),183.9(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[12]，故鉴定化合物8 为木犀草素。

化合物9：黄色粉末，ESI-MSm/z:285[M－H]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.89(1H,d,J=8.0 Hz,H-5′),6.90(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.91(1H,dd,J=9.5,2.0 Hz,H-6),7.67(1H,dd,J=8.0,1.5 Hz,H-6′),7.77(1H,d,J=1.5 Hz,H-2′),7.98(1H,d,J=9.5 Hz,H-5)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:103.0(C-8),115.4(C-10),115.9(C-2′),116.0(C-6),116.2(C-5′),121.6(C-6′),124.4(C-1′),127.5(C-5),138.7(C-3),146.2(C-2),147.5(C-3′),148.6(C-4′),158.5(C-9),164.4(C-7),174.5(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[13]，故鉴定化合物9 为漆黄素。

化合物10：白色粉末，ESI-MSm/z:255[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:2.64(1H,dd,J=16.9,2.9 Hz,H-3b),2.99(1H,dd,J=16.9,13.2 Hz,H-3a),5.30(1H,dd,J=13.2,2.9 Hz,H-2),6.33(1H,d,J=2.3 Hz,H-8),6.47(1H,dd,J=8.7,2.3 Hz,H-6),6.81(2H,d,J=8.6 Hz,H-3′,5′),7.28(2H,d,J=8.6 Hz,H-2′,6′),7.70(1H,d,J=8.7 Hz,H-5)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:44.8(C-3),80.9(C-2),103.8(C-8),111.8(C-6),114.8(C-10),116.3(C-3′,5′),129.0(C-2′,6′),129.8(C-5),131.2(C-1′),158.8(C-4′),165.5(C-9),166.8(C-7),193.5(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[14]，故鉴定化合物10为甘草素。

化合物11：黄色粉末，ESI-MSm/z:301[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:3.87(3H,s,3′-OCH3),4.54(1H,d,J=11.9 Hz,H-3),4.98(1H,d,J=11.9 Hz,H-2),6.33(1H,d,J=2.2 Hz,H-8),6.52(1H,dd,J=8.7,2.2 Hz,H-6),6.84(1H,d,J=8.2 Hz,H-5′),6.98(1H,dd,J=8.2,1.9 Hz,H-6′),7.12(1H,d,J=1.9 Hz,H-2′),7.71(1H,d,J=8.7 Hz,H-5)；13CNMR(125 MHz,CD3OD)δ:56.4(3′-OCH3),74.5(C-3),85.6(C-2),103.7(C-8),112.1(C-6),112.4(C-2′),113.4(C-10),115.9(C-5′),122.2(C-6′),130.0(C-5),130.1(C-1′),148.2(C-4′),148.8(C-3′),165.0(C-9),166.9(C-7),194.4(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[15]，故鉴定化合物11 为erycibenin D。

化合物12：白色粉末，ESI-MSm/z:273[M＋H]+。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:4.52(1H,d,J=12.0 Hz,H-3),5.00(1H,d,J=12.0 Hz,H-2),6.33(1H,d,J=2.2 Hz,H-8),6.53(1H,dd,J=8.7,2.2 Hz,H-6),6.84(2H,d,J=8.2 Hz,H-3′,5′),7.37(2H,d,J=8.2 Hz,H-2′,6′),7.73(1H,d,J=8.7 Hz,H-5)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:74.5(C-3),85.5(C-2),103.7(C-8),112.1(C-6),113.4(C-10),116.1(C-3′,5′),129.5(C-1′),130.1(C-5),130.4(C-2′,6′),159.2(C-4′),165.1(C-9),166.8(C-7),194.5(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[16]，故鉴定化合物12为3,4′,7-三羟基二氢黄酮。

化合物13：黄色粉末，ESI-MSm/z:287[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:4.55(1H,d,J=11.6 Hz,H-3),4.98(1H,d,J=11.6 Hz,H-2),5.88(1H,brs,H-6),5.93(1H,d,J=1.8 Hz,H-8),6.83(2H,d,J=8.2 Hz,H-3′,5′),7.35(2H,d,J=8.2 Hz,H-2′,6′)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:73.6(C-3),85.0(C-2),96.3(C-8),97.3(C-6),101.8(C-10),116.1(C-3′,5′),129.3(C-1′),130.4(C-2′,6′),159.2(C-4′),164.5(C-9),165.3(C-7),168.7(C-5),198.5(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[17]，故鉴定化合物13为二氢山柰酚。

化合物14：黄色粉末，ESI-MSm/z:287[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:4.49(1H,d,J=11.5 Hz,H-3),4.93(1H,d,J=11.5 Hz,H-2),6.32(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.52(1H,dd,J=8.7,2.0 Hz,H-6),6.81(1H,d,J=8.2 Hz,H-5′),6.86(1H,dd,J=8.2,1.5 Hz,H-6′),7.00(1H,brs,H-2′),7.70(1H,d,J=8.7 Hz,H-5)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:74.5(C-3),85.5(C-2),103.6(C-8),112.1(C-6),113.3(C-10),115.8(C-2′),116.0(C-5′),120.9(C-6′),130.0(C-5),130.1(C-1′),146.1(C-4′),147.0(C-3′),165.0(C-9),166.7(C-7),194.5(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[18]，故鉴定化合物14 为黄颜木素。

化合物15：黄色粉末，ESI-MSm/z:283[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:3.94(3H,s,3′-OCH3),6.70(1H,dd,J=8.4,2.0 Hz,H-5),6.71(1H,d,J=2.0 Hz,H-7),6.74(1H,s,H-10),6.88(1H,d,J=8.3 Hz,H-5′),7.42(1H,dd,J=8.3,1.5 Hz,H-6′),7.52(1H,d,J=1.5 Hz,H-2′),7.60(1H,d,J=8.4 Hz,H-4)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:56.4(3′-OCH3),99.4(C-7),114.1(C-9),114.5(C-5′),114.8(C-10),115.5(C-2′),116.7(C-5),125.5(C-1′),126.8(C-6′),127.4(C-4),147.8(C-2),149.2(C-3′),150.4(C-4′),168.3(C-8),169.8(C-6),184.4(C-3)。以上数据与文献报道基本一致[19]，故鉴定化合物15为6,4′-二羟基-3′-甲氧基橙酮。

化合物16：橙色粉末，ESI-MSm/z:269[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.65～6.69(3H,m,H-5,7,10),6.82(1H,dd,J=8.2,2.0 Hz,H-5′),7.20(1H,d,J=8.2 Hz,H-6′),7.50(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),7.57(1H,d,J=8.4 Hz,H-4)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:99.3(C-7),114.1(C-2′),114.7(C-9),114.8(C-10),116.6(C-5),118.9(C-5′),125.5(C-1′),126.4(C-6′),126.8(C-4),146.6(C-3′),147.6(C-2),149.3(C-4′),168.3(C-8),169.7(C-6),184.4(C-3)。以上数据与文献报道基本一致[20]，故鉴定化合物16 为硫黄菊素。

化合物17：白色粉末，ESI-MSm/z:287[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:2.72(1H,dd,J=15.6,5.5 Hz,H-4b),2.90(1H,dd,J=15.6,8.5 Hz,H-4a),3.84(3H,s,3′-OCH3),4.03(1H,m,H-3),4.66(1H,d,J=7.5 Hz,H-2),6.29(1H,d,J=2.4 Hz,H-8),6.35(1H,dd,J=8.2,2.4 Hz,H-6),6.80(1H,d,J=8.2 Hz,H-5′),6.85(1H,dd,J=8.2,2.0,Hz,H-6′),6.87(1H,d,J=8.2 Hz,H-5),6.96(1H,d,J=2.0 Hz,H-2′)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:33.6(C-4),56.4(3′-OCH3),68.8(C-3),83.2(C-2),103.6(C-8),109.6(C-6),111.8(C-2′),112.7(C-10),116.0(C-5′),121.2(C-6′),131.3(C-1′),132.1(C-5),147.5(C-4′),148.9(C-3′),156.2(C-9),157.9(C-7)。以上数据与文献报道基本一致[21]，故鉴定化合物17 为(–)-3,4′,7-三羟基-3′-甲氧基黄烷。

化合物18：白色粉末，ESI-MSm/z:289[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:2.53(1H,dd,J=16.2,8.1 Hz,H-4b),2.86(1H,dd,J=16.2,5.4 Hz,H-4a),4.01(1H,m,H-3),4.59(1H,d,J=7.5 Hz,H-2),5.88(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),5.95(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.72(1H,dd,J=8.1,1.6 Hz,H-6′),6.78(1H,d,J=8.1 Hz,H-5′),6.85(1H,d,J=1.6 Hz,H-2′)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:28.3(C-4),68.6(C-3),82.6(C-2),95.4(C-8),96.2(C-6),100.7(C-10),115.1(C-2′),116.1(C-5′),120.0(C-6′),132.0(C-1′),146.0(C-3′),146.1(C-4′),156.7(C-9),157.4(C-7),157.6(C-5)。以上数据与文献报道基本一致[22]，故鉴定化合物18 为儿茶素。

化合物19：白色粉末，ESI-MSm/z:289[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:2.75(1H,dd,J=16.8,1.5 Hz,H-4b),2.87(1H,dd,J=16.8,4.3 Hz,H-4a),4.16(1H,m,H-3),4.80(1H,s,H-2),5.94(1H,d,J=1.5 Hz,H-6),5.97(1H,d,J=1.5 Hz,H-8),6.77(1H,d,J=8.2 Hz,H-5′),6.80(1H,dd,J=8.2,1.0 Hz,H-6′),6.99(1H,brs,H-2′)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:29.2(C-4),67.3(C-3),79.7(C-2),95.8(C-6),96.3(C-8),100.0(C-10),115.2(C-2′),115.9(C-5′),119.4(C-6′),132.1(C-1′),145.6(C-4′),145.7(C-3′),157.2(C-9),157.4(C-7),157.8(C-5)。以上数据与文献报道基本一致[23]，故鉴定化合物19为表儿茶素。

化合物20：白色粉末，ESI-MSm/z:409[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:2.87(1H,dd,J=17.4,2.6 Hz,H-4b),3.01(1H,dd,J=17.4,4.6 Hz,H-4a),5.05(1H,s,H-2),5.52(1H,m,H-3),5.96(1H,d,J=2.1 Hz,H-6),5.98(1H,d,J=2.1 Hz,H-8),6.68(1H,d,J=8.2 Hz,H-5′),6.75(2H,d,J=8.7 Hz,H-3ʺ,5ʺ),6.78(1H,dd,J=8.2,1.7 Hz,H-6′),6.95(1H,d,J=1.7 Hz,H-2′),7.74(2H,d,J=8.7 Hz,H-2ʺ,6ʺ)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:26.7(C-4),70.2(C-3),78.6(C-2),95.9(C-6),96.6(C-8),99.4(C-10),115.1(C-2′),116.0(C-5′),116.1(C-3ʺ,5ʺ),119.2(C-6′),122.3(C-1ʺ),131.5(C-1′),132.9(C-2ʺ,6ʺ),146.0(C-3′,4′),157.9(C-5,7,9),163.4(C-4ʺ),167.4(-COO-)。以上数据与文献报道基本一致[24]，故鉴定化合物20 为(-)-epicatechin-3-O-phydroxybenzoate。

化合物21：白色粉末，ESI-MSm/z:477[M＋HCOO]–。1H-NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ:3.12～3.32(4H,m,H-2′～5′),3.44(1H,m,H-6′α),3.64-3.66(3H,m,H-6β,6a,6′β),3.69(3H,s,9-OCH3),4.28(1H,m,H-6α),4.84(1H,d,J=7.5 Hz,H-1′),5.60(1H,d,J=6.5 Hz,H-11a),6.42(1H,d,J=2.2 Hz,H-4),6.46(1H,dd,J=8.2,2.6 Hz,H-8),6.55(1H,d,J=2.6 Hz,H-10),6.71(1H,dd,J=8.5,2.2 Hz,H-2),7.25(1H,d,J=8.2 Hz,H-7),7.39(1H,d,J=8.5 Hz,H-1)；13C-NMR(125 MHz,DMSO-d6)δ:38.9(C-6a),55.3(9-OCH3),60.7(C-6′),66.0(C-6),69.7(C-4′),73.2(C-2′),76.5(C-3′),77.1(C-5′),77.8(C-11a),96.4(C-4),100.3(C-1′),104.0(C-10),106.1(C-8),110.4(C-2),114.2(C-11b),119.2(C-6b),125.3(C-7),132.0(C-1),156.2(C-4a),158.5(C-10a),160.3(C-9),160.6(C-3)。以上数据与文献报道基本一致[25]，故鉴定化合物21 为美迪紫檀素-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物22：白色粉末，ESI-MSm/z:463[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:2.86(1H,dd,J=15.6,4.4 Hz,H-4b),2.97(1H,dd,J=15.6,10.8 Hz,H-4a),3.73(3H,s,2′-OCH3),3.76(1H,d,J=4.5 Hz,H-3),3.82(3H,s,4′-OCH3),4.01(1H,t,J=10.0 Hz,H-2b),4.27(1H,m,H-2a),4.65(1H,d,J=7.5 Hz,H-1′′),6.34(1H,d,J=2.5 Hz,H-5),6.44(1H,dd,J=8.5,2.5 Hz,H-7),6.52(1H,d,J=8.5 Hz,H-5′),6.87(1H,d,J=8.5 Hz,H-6′),6.96(1H,d,J=8.5 Hz,H-8)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:31.3(C-4),33.4(C-3),55.6(4′-OCH3),56.6(2′-OCH3),62.0(C-6′′),70.8(C-2),70.9(C-4′′),75.3(C-2′′),77.7(C-5′′),78.3(C-3′′),102.3(C-1′′),104.5(C-5′),107.2(C-5),107.9(C-7),115.7(C-10),122.8(C-1′),124.2(C-6′),131.2(C-8),135.3(C-3′),150.0(C-2′),152.8(C-4′),156.5(C-9),160.5(C-6)。以上数据与文献报道基本一致[26]，故鉴定化合物22 为2′,4′-二甲氧基-3′-羟基异黄烷-6-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物23：黄色粉末，ESI-MSm/z:161[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.18(1H,d,J=6.0 Hz,H-3),6.75(1H,d,J=2.3 Hz,H-8),6.85(1H,dd,J=8.9,2.3 Hz,H-6),7.89(1H,d,J=8.9 Hz,H-5),7.96(1H,d,J=6.0 Hz,H-2)；13C-NMR(125 MHz,CD3OD)δ:103.5(C-8),112.7(C-3),116.6(C-6),118.2(C-10),127.9(C-5),157.7(C-2),160.1(C-9),165.2(C-7),179.5(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[27]，故鉴定化合物23 为7-羟基色原酮。

化合物24：灰白色粉末，ESI-MSm/z:177[MH]-。1H-NMR(500 MHz,CD3OD)δ:6.19(1H,d,J=5.9 Hz,H-3),6.21(1H,d,J=2.1 Hz,H-6),6.34(1H,d,J=2.1 Hz,H-8),7.97(1H,d,J=5.9 Hz,H-2)；13CNMR(125 MHz,CD3OD)δ:95.1(C-8),100.2(C-6),106.6(C-10),111.6(C-3),158.1(C-2),159.9(C-9),163.5(C-5),166.2(C-7),183.4(C-4)。以上数据与文献报道基本一致[28]，故鉴定化合物24 为5,7-二羟基色原酮。

3.2 体外抗炎活性结果

利用LPS 诱导的RAW 264.7 巨噬细胞活化模型，对分离得到的24 个化合物进行了体外抗炎活性筛选，使用Griess 法测定NO 的含量，并计算IC50。结果显示化合物3、7、8、10、15、16 能够抑制LPS诱导RAW 264.7 巨噬细胞释放NO，其IC50值分别为（27.3±0.1）、（18.1±0.3）、（9.5±2.3）、（22.1±3.6）、（22.8±2.3）、（7.3±1.6）μmol/L[阳性对照药吲哚美辛IC50值（41.2±1.4）μmol/L]。这些结果表明，血人参治疗炎症性疾病可能与其中所含黄酮类化合物有关，其抗炎作用机制有待进一步研究。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突