猪圆环病毒血清学诊断研究进展

王玉珍，王 珺，张同鑫，刘 晔，卢松岩

1.吉林省动物疫病预防控制中心，吉林长春 130062；2.长白朝鲜族自治县动物疫病预防控制中心，吉林长白 134400；3.长春市双阳区畜牧总站，吉林长春 130600；4.吉林市船营区畜牧兽医科学研究会，吉林吉林市 132012

1 发病机制

PCV颗粒存在于患病猪的呼吸系统以及消化代谢器官中。其中，淋巴结、肺脏、脾脏检测率高，患猪体况下降，免疫系统被侵伤，由于免疫抑制过度会导致免疫缺陷，因此病原性较低或致病性较低的疫苗接触健康猪后容易发生畜群患病；反复发病久治不愈，接种疫苗无免疫，同窝仔猪死亡数目增多，猪表现为多种疾病复合的临床症状，这些疾病的临床表现均与PMWS相同。淋巴细胞数量缺失，巨噬细胞发生透渗，这与B和T细胞减少和细胞在淋巴器官流失相关。

2 流行病学

我国最早在2001年发现该病，种猪存在高感染率。5～16周龄的猪易发病，6～8周的猪为易感高发年龄，极少感染小于5周龄的猪。通常，仔猪发病是在其断奶后的第2天或第3天，也有部分仔猪一周后发病。由于存在继发疾病或同时存在并发的细菌或病毒感染，死亡率通常可达25%或更高。PCV多为垂直感染，其母体在怀孕感染后，经胚胎对仔猪进行病毒传播，并致其患有繁殖障碍病。

PCV在世界各地都很流行且存在已感染的猪并不呈现明显的PMWS相关症状。在中国的部分地区，抽样检测出生20 d的未经过断奶的仔猪，检测阳性率为0，而其它年龄均存在检出率且产后母猪高达80%以上。临床症状可持续数月，在6～12个月之内达到峰值后，再慢慢回降。新出生仔猪体内存在母源PCV抗体，当仔猪在11～13周龄被转移到育肥圈混养时，再次暴露于可能存在PCV的环境中，PCV抗体将再次出现。

3 临床症状与病理变化

第一类PMWS中常见临床症状是厌食、体重减轻、精神低下、行动迟缓、肤色惨白、毛皮暗沉，呼吸急促和咳嗽，也可能出现粪便样稀和中枢神经系统疾病。浅淋巴结肿大，经表皮按压有明面异物感。第二类临床症状是先天性颤抖且震颤严重程度不等，一窝猪中的感染数量也各不相同。由于一周内没有得到及时的母乳喂养，严重的病态仔猪常死于饥饿。但是，在患病后仍能存活1周的病猪就可以在3周龄时存活并恢复健康。PCV常见混合感染的有PRRSV、PRV、PPV、PEDV、SIV、肺炎支原体、多杀性巴氏杆菌。病死率大幅度上升，感染后死亡率可达25%～40%。

PMWS的剖检病变表现为消瘦、缺血和黄疸；淋巴内脏肿大，是正常组织体积的3倍以上，切割表面呈白色且颜色均匀；肺中出现褐灰色炎症，较正常的肺组织颜色偏深，伴随发炎和水肿，呈现弥漫性损伤，触感犹如坚硬的橡皮；肝颜色发暗，呈现或深或浅的黄色，肝小叶间结缔组织减少；肾体积变大肿胀，伴随坏死灶；脾脏肿胀，触感似生肉；胰腺肿胀、坏死；肾不同程度多焦间质性肾炎。

4 血清学检测方法

4.1 免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）

Dulac等提出IPMA，是用有PCV的PK-15细胞在断层血清过程中用96孔板生长。同IFA原理相同，不同在于二者二抗标记物不同，加底物3-氨基-9-乙基昨哩(AEC)显色，生成红色沉淀可直接观察。主要在PAM、Marc-145等细胞上进行IPMA，抗体6 d分离，在4、6周检测时，试验数据达到最高值并可持续长达6～12个月，刘昌明等人探究开发出的IPMA抗体检测方法具有特异性强、灵敏度高等特点。但需要专业的实验设备，不能直接显示实验结果，可能有假阳性结果出现。

4.2 间接荧光抗体实验（IFA）

IFA操作简单，投入成本低，PCV2感染的细胞及病变组织是主要检测样本。把病畜或待检的细胞、组织进行实验室冷冻切片，用药品丙酮试剂进行固定，加特异性单抗，洗涤后加荧光二抗，洗涤晾干，荧光显微观察。如出现荧光，说明感染，PCV2为阳性。在实验中，也要添加没有感染PCV2的正常细胞或组织进行试验结果对比。对比试验是该试验成功和判定结果的重要一步，要求操作精准。

4.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）

ELISA具有系统的模式和流程，所用试剂均可批量加工，且价格适中，研究和应用价值较高。两种间接ELISA方法作为检测PCV2抗体检测的全新进展被Nawagigul等建立。第一种是利用包被抗原，其使用的原料是细胞培养物，要求是要被PCV2感染。第二种是重组杆状病毒表达的蛋白质，要求与ORF2结合并进行包装。该抗原用来检测感染PCV2病毒的血清抗体和病毒核衣壳蛋白免疫血清，敏感性好，但该方法不能精准定位病症，有一定局限性。

4.4 乳胶凝集试验（LAT）

王忠用纯化重组PCV-M蛋白致敏乳胶生成乳胶抗原，用LAT检测PCV抗体。用抗体试剂盒检测78种不同的待检血样，LAT的检出率为94.6%，与试剂盒的总吻合率为86.2%，准确性及稳定性较高。LAT成本低、易操作，时效性和灵敏度高、设备要求低，结果易观察，适合进行相关临床的应用设计。

5 小结

随着研究的不断深入，对猪圆环病毒的了解也将越来越多，诊断技术亦将取得长足发展。归纳总结现有的血清学检测技术要点，作为进一步研究的基础，同时有助于提高检测准确率，对猪圆环病毒病的诊断、防治和净化具有重要意义。

参考文献：略