青海地区育龄女性MTHFR基因C677位点的多态性研究

罗晓琴，江 平，程时磊 （青海省人民医院分子病理科，西宁 810007）

叶酸(folic)由蝶啶(pteridine)、对氨基苯甲酸(PABA)和L-谷氨酸(L-glutamic acid)组成，体内叶酸以四氢叶酸(tetrahydrofolate,THF)的形式起作用，5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶(methylene tetra hydro folate reductase,MTHFR）是叶酸代谢通路中的关键酶之一[1]。据国内外多篇文献记载，体内叶酸利用能力障碍是构成不良孕产的危险因素[2-3]，而叶酸利用能力障碍与编码MTHFR 多态性有关。因此，MTHFR 与神经管畸形、复发性流产和妊娠期高血压的发病率以及不孕症等密切相关[3-5]。本研究致力于探讨青海地区育龄女性MTHFR 在位点C677基因的多态性分布特征，旨在为青海地区育龄女性叶酸个体化补充提供科学依据。

1 对象和方法

1.1 研究对象 本研究选取2016年12月1日～2018年12月7日自青海省人民医院进行叶酸代谢能力检测的汉族及各少数民族育龄女性3 036例，年龄16～52岁，平均年龄29.8岁。其中孕前期及孕期2 008例，不孕症患者1 028例。

1.2 仪器与试剂 本研究所用仪器为美国Applied Biosystems ViiaTM7 Dx Real-Time PCR Instrument，使用深圳奥萨公司的亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C/T检测试剂盒（PCR-荧光探针法）检测。

1.3 研究方法 DNA 提取与PCR 扩增：取受试者清晨空腹静脉血1～2ml，EDTA 抗凝，提取血样的全基因DNA，借助荧光PCR 技术进行检测。反应条件为：50℃ 2min，95℃ 2min，95℃ 15s，60℃1min，共45个循环。

1.4 统计学分析 对本研究人群样本进行哈迪-温伯格定律(Hardy-Weinberg)遗传平衡检验,使用统计分析数据软件SPSS 25.0，对组间基因型及等位基因频率对比采用χ2检验，P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 青海地区孕前或孕早期女性与不孕症女性MTHFR在位点C677基因多态性数据比较 见表1。通过数据比较，青海地区孕前或孕早期女性MTHFR在位点C677的TT 纯合基因型频率（20.72%）与不孕症女性频率（18.68%）接近，差异无统计学意义(χ2=2.52，P=0.28)。

表1 青海地区孕前或孕早期女性与不孕症女性MTHFR C677基因多态性比较[n（%）]

2.2 青海地区汉族与各少数民族女性MTHFR C677基因型多态性数据比较 见表2。通过数据比较，汉族女性MTHFR C677的TT 纯合基因型频率（20.70%）与藏族女性频率（11.65%）差异较大，差异有统计学意义（χ2=25.06，P<0.05），而与回族、土族比较差异却无统计学意义(P>0.05)，提示青海地区汉族、藏族两民族间的叶酸代谢能力存在明显差异。

表2 青海地区不同民族女性间MTHFR C677基因多态性比较[n（%）]

2.3 青海地区汉族女性MTHFR C677基因多态性与不同地区数据比较 见表3。通过数据比较，青海地区汉族女性MTHFR C677的TT 纯合基因型频率（20.70%）与西藏汉族女性频率[6]（20.43%）接近，差异无统计学意义(χ2=0.86，P＜0.05)。但是，与佛山女性频率[7]（27.70%）相比有较大差异。因此，青海地区与低海拔地区差异均有统计学意义(P＜0.01)，提示本地区基因多态性分布有高原海拔特异性。

表3 青海地区与其他地区汉族女性MTHFR C677基因多态性比较[n（%）]

3 讨论

叶酸是人体必需的水溶性维生素之一，人体叶酸摄入不足或叶酸代谢障碍，均可表现为叶酸缺乏。研究表明，叶酸代谢障碍与胎儿神经管畸形、先天性心脏病及唐氏综合征等多种出生缺陷密切相关[3]。我国是出生缺陷高发国家，卫生部发布的《2012年中国出生缺陷防治报告》指出，我国每年出生缺陷新增病例高达90万例,然而青海地区围产儿出生缺陷发生率平均为100.43/万[8]。为了预防出生缺陷，全国普遍实施了补充叶酸的措施，但是仍有部分女性即便补充了叶酸，胎儿仍会发生出生缺陷，主要原因是遗传因素导致的叶酸代谢障碍[9-10]。MTHFR是叶酸代谢过程中的关键酶，MTHFR C677是其多态性位点之一，此位点的突变将MTHFR 编码蛋白中的一个丙氨酸转变为缬氨酸，造成该酶活性的改变[11-12]。有研究表明，在同等条件下CT型和TT型女性细胞内叶酸含量低于正常基因型[9]。也有研究表明，TT型易导致高同型半胱氨酸症，而高同型半胱氨酸是导致新生儿神经管缺陷的重要危险因素[12-13]。因此，根据不同基因型做个性化的叶酸补充方案对于预防出生缺陷具有重要作用。

本研究统计分析了青海地区育龄女性叶酸代谢相关基因MTHFR C677基因位点多态性的分布特征，并就孕前及孕期女性和不孕症女性群体做了比较。本研究发现，青海地区孕前或孕早期女性和不孕症女性群体间无统计学差异(P＞0.05)。从比较数据来看，青海地区汉族女性TT型频率（20.70%）同藏族女性（11.65%）存在较大差异，而同回族（19.91%）、土族（20.72%）无统计学差异。同时本研究发现，如果将青海地区汉族基因多态性分布情况同多个已有文献报道[9]的地区进行比较，研究显示青海地区汉族女性TT型频率（20.70%）与低海拔地区（辽源28.76%，淄博43.61%，郑州36.78%，南宁7.71%，佛山27.70%，琼海6.14%）差异有统计学意义(P＜0.05)，而与高海拔西藏地区汉族女性（20.43%）比较差异无统计学意义(P＞0.05)。因此，本地区汉族女性基因多态性分布显然具有高原海拔特异性。

相关研究表明，人体对叶酸的利用受遗传基因影响，叶酸缺乏是导致出生缺陷的主要原因之一。青海地区是多民族聚居地，各民族情况复杂。本研究通过分析比较青海地区各民族间叶酸利用能力差异及与低海拔地区的区别,发现青海地区汉族与各民族尤其是藏族在叶酸代谢关键酶基因多态性存在分布差异。青海地区女性与低海拔地区女性基因多态性分布相比存在明显的高原海拔特异性，为后期制定个性化的叶酸营养补充方案提供了一定的参考依据。