废弃葡萄枝蔓栽培灵芝的适宜菌株筛选

丁李春

废弃葡萄枝蔓栽培灵芝的适宜菌株筛选

丁李春

（福建省宁德市农业科学研究所，福建 福安 355003）

为筛选适合以葡萄枝屑替代部分木屑为原料进行栽培的优良灵芝菌株，采用果园废弃的葡萄枝屑为主料，对8个灵芝菌株进行栽培试验，考察产量和生物转化率等指标，并检测其子实体和孢子的灵芝多糖及三萜含量，进行综合评分。结果：子实体和孢子产量、生物转化率、子实体和孢子的三萜含量均以GH8为好，其综合评分为83.24，也最高；子实体多糖则以圆8较高。8个菌株的多糖和三萜酸含量均超出国家药典标准。因此GH8可作为葡萄枝屑栽培灵芝的适宜菌株。

灵芝；废弃葡萄枝蔓；替代木屑；优良菌株

灵芝（）隶属担子菌纲、多孔菌科、灵芝属[1]，现代医学研究证明灵芝含有多种药理活性物质，是我国传统名贵中药，也是目前开发较好的药用真菌[2, 3]。段木栽培作为我国灵芝传统栽培方法[4]，存在菌林矛盾问题，制约产业发展。农业循环经济理念要求在农业生产中减少资源与物质投入，降低废弃物排放，将废物转化为资源，以实现经济效益和生态效益的“双赢”[5]。目前，桃树屑、棉籽壳、桑枝、菌草都已用于灵芝代料栽培[6]，拓宽了灵芝栽培原料来源。

福建省福安市是我国葡萄主产区之一，每年葡萄园生产中都会产生大量的固体废弃物，包括夏季与冬季修剪的葡萄新梢（枝条）、叶片，以及秋冬季节的落叶。其中枝条约占30%，其自身物理性状和基本组成成分均适合食用菌的分解利用[7, 8]。为了更好地利用这些废弃的葡萄枝蔓，本试验在进行母种和原种适应性培养基础上，对8个灵芝菌株进行出菇试验，并检测灵芝多糖及三萜含量，以筛选出适应于葡萄枝屑培养料配方栽培的优良菌株，为葡萄枝蔓代料栽培灵芝提供依据。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

灵芝菌株日赤、圆8、GH8和武芝，由福建省农业科学院生态研究所提供；菌株盆芝、美芝和韩芝H引自江都天达食用菌研究所；对照菌株红芝为闽东地区主栽品种，由宁德市农业科学研究所食用菌室保藏。

1.2 培养基配方

母种培养基配方为葡萄糖20 g、磷酸二氢钾1.5 g、琼脂18 g、10%葡萄枝浸出液1 L。原种和栽培种的培养料配方：葡萄枝屑63%、木屑27%、麩皮8%、红糖1%、石膏1%，料水比为1∶1.5。

1.3 试验方法

（1）10%葡萄枝浸出液的制备。称取100 g 葡萄枝屑加水1 L，加热至100 ℃，继续煮30 min，取其滤液并用水定容至1 L，标记为 10%葡萄枝浸出液。

（2）母种制备。按前述母种培养基配方准确称取各种原料，采用试管分装，在0.11 MPa下灭菌20 min后，摆成斜面，冷却到室温，分别接入8个试验菌株，每个菌株接10管。接种后置于25 ℃下恒温培养。

（3）原种制备。按前述原种培养基配方准确称取各种原料，搅拌均匀后，用容积为750 mL玻璃瓶装料。每个菌株装10瓶，每瓶装干料0.2 kg，在126 ℃下灭菌2 h，冷却后分别接入经1.3（2）节培养的各菌株母种，置于25 ℃下恒温培养。

（4）栽培试验。按前述栽培种培养料配方称取各组分，搅拌均匀，用17×35×0.005（cm）的聚丙烯袋装料，每袋装料干重350 g，在126 ℃下灭菌2 h。待料温降至28 ℃以下时接入1.3（3）节培养的原种，置于25 ℃下恒温培养。每处理重复3次，每重复30袋。待菌丝满袋后，培养料表面有黄色或白色小突起时，按常规方法进行出芝管理[9]。至灵芝边缘变为黄色或棕褐色，有少量孢子弹出时，开始收集孢子。将收集的孢子和采收的子实体烘干至恒重，统计两潮灵芝产量和一潮孢子产量，并记录子实体形态特征。

（5）营养成分检测。所有样品均委托福建省农业科学院生态研究所检测。灵芝多糖含量检测采用蒽酮-硫酸法，三萜含量检测采用香草醛-高氯酸比色法。

（6）优良菌株的综合分析。根据灵芝子实体和孢子的多糖含量、总三萜酸含量及生物转化率，进行综合分析评价，筛选出优良菌株[10]。

综合评分=（多糖含量+总三萜酸含量）×（子实体生物转化率+孢子生物转化率）。

1.4 数据分析

所有数据均采用SPSS15.0系统进行整理和统计分析。

2 结果与分析

2.1 葡萄枝蔓栽培的灵芝子实体形态与产量

由表1可知，菌株GH8的子实体菌盖红褐色、厚，呈半圆形，菌柄无分枝；平均单袋产量较高，干重为30.3 g，比对照提高31.7%，与其他菌株比较，差异达极显著水准；子实体生物转化率为8.7%。韩芝H的子实体菌盖红褐色、较厚，呈肾形，菌柄无分枝；平均单袋产量较低，干重仅21.0 g，显著低于其他7个菌株。

灵芝孢子的平均单袋产量以GH8较高，为6.48 g，与盆芝、武芝、日赤3个菌株比较，差异达显著水准，与其他菌株差异不显著；以日赤较低，为4.38 g，与盆芝、武芝的差异不显著，与其他菌株比较，差异达极显著水准（表1）。孢子生物转化率，以GH8较高，为1.85%；日赤较低，为1.25%。

表1 葡萄枝蔓栽培的不同灵芝菌株子实体形态及产量比较

注：同列数据后小写字母不同表示差异显著（＜0.05），大写字母不同表示差异极显著（＜0.01）。表2～4同。

2.2 葡萄枝蔓栽培的灵芝子实体和孢子多糖含量

2015《中国药典》规定，灵芝多糖以无水葡萄糖计，不得少于0.9%。本试验各样品的含量均达到药典标准，而各灵芝菌株的子实体多糖含量均低于其孢子的含量。其中，圆8子实体多糖含量较高，为1.79%，极显著高于对照，而与武芝、日赤的差异则不显著；美芝子实体多糖含量较少，仅为1.38%，除与对照和韩芝H的差异不显著外，与其他5个菌株均有极显著差异。GH8菌株的子实体多糖含量居中，为1.58%，与对照差异不显著，与高含量的圆8和低含量的美芝比较，有极显著差异；但其孢子多糖含量较高，为2.13%，与除圆8外的其他6个菌株差异均达显著水准（表2）。

表2 灵芝子实体和孢子的多糖含量

2.3 葡萄枝蔓栽培的灵芝子实体和孢子三萜含量

2015《中国药典》规定，三萜及甾醇以齐墩果酸（C30H48O3）计，不得少于0.50%。本试验各样品的含量全部符合药典标准，而不同灵芝菌株的子实体三萜含量均低于其孢子的含量。其中，GH8的子实体三萜含量较高，为1.37%，与对照和韩芝H的差异不显著，与其他5个菌株均有极显著差异；日赤的三萜含量较少，仅为0.52%，与其他菌株比较，差异达极显著水准（表3）。

GH8的孢子三萜含量也较高，为2.81%，比其子实体高出105%，与其他各菌株比差异显著；日赤的孢子三萜含量较低，为1.68%，比其子实体高出223%。8个供试菌株的三萜含量，以日赤的子实体与孢子差异最大。

表3 灵芝子实体和孢子三萜含量

2.4 不同菌株的综合分析评价

以灵芝子实体和孢子的三萜含量、多糖含量及生物转化率3个指标进行综合分析的结果（表4），GH8综合评分最高，为83.24，与其他7个菌株比较，差异极显著，比对照高41.3%；日赤综合评分最低，为43.99，与其他7个菌株的差异显著，比对照低25%。各菌株综合评分从高到低依次为：GH8＞圆8＞红芝（CK）＞美芝＞武芝＞盆芝＞韩芝H＞日赤。

表4 不同灵芝菌株综合评分结果

3 小结与讨论

本试验结果表明，一个好的灵芝品种不能只看单一性状而要综合测评各项指标。从表1～4看，除子实体多糖含量外，其他各项检测指标均以GH8菌株表现较好。其子实体和孢子产量、生物转化率、子实体和孢子的三萜含量，以及孢子多糖含量，在8个供试菌株中均居首位，综合评分为83.24，也最高，与其他7个菌株比较，差异达极显著。且GH8子实体和孢子中的活性成分多糖和三萜酸的含量均超出国家药典规定的标准；经多次试验和检测各项指标均保持较高的稳定性，可作为葡萄枝屑栽培灵芝的优良菌株作进一步试验示范。葡萄枝屑富含白藜芦醇[11]，用葡萄枝屑栽培的灵芝是否也含有该活性成分有待进一步研究。

不同灵芝菌株对葡萄枝浸出液的耐受力不同，须经过不断培养以提高其适应性，以便在栽培过程中增加葡萄枝屑添加量，减少木屑用量，为灵芝栽培开辟新的原料来源。

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福建省科技厅项目（编号2018N0080）

丁李春（1972—），男，高级农艺师，主要从事食（药）用菌研究与推广工作。E-mail：dlc660188@126.com。

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2095-0934（2021）02-148-04