免疫组化法检测肝癌组织Twist表达的临床意义

韦小芳 欧传话 李绍龙 毛小玲

肝细胞癌是肝癌最常见的亚型，属国内常见恶性肿瘤之一，具有高度侵袭性及转移性，近年来其发病率呈逐年增长趋势，位居全球因恶性肿瘤致死亡人数的第三位，与长期大量饮酒、乙肝或丙肝病毒感染、摄入含有真菌代谢产物等密切相关[1]。虽然近年来其诊断和治疗手段均取得了较大的突破，如高分辨率螺旋CT、肝动脉血管造影及肝动脉化疗栓塞、荧光腹腔镜肝切除术等，但患者生存率仍不太理想[2-6]。目前上市靶向治疗药物作用有限，故积极探寻新的能早期预测肝细胞癌及其预后的分子标志物尤为重要，以期提供一种新的肿瘤治疗靶点[7-8]。本研究采用免疫组化法检测Twist在136例肝细胞癌患者中的表达。

资料与方法

一、一般资料

入选肝细胞癌患者136例，样本纳入时间为2013年1月至2017年1月。纳入标准：所有患者均于入院后确诊[9]；术前所有患者均未行分子靶向治疗等；临床随访资料完整(中位随访时间为20个月)。排除标准：①重要脏器功能异常；②肝细胞癌以外其他类型肝癌，如混合细胞性肝癌、弥漫性肝癌；③其他部位恶性肿瘤。136例患者中，肿瘤直径5 cm以上46例；TNM分期：Ⅰ～Ⅳ期分别50例、37例、30例、19例；配对癌旁肝组织85例。患者均签署知情同意书。

二、研究方法

对肿瘤组织蜡块行病理学分级，Twist蛋白表达采用免疫组化法检测。细胞质见棕黄色颗粒判断为Twist蛋白阳性。由2位经验丰富的病理科医师以双盲法进行阅片，按照染色强度打分，0～3分，分别代表无染色、淡黄、棕黄、棕褐。后结合阳性细胞所占百分比进行评分，占比0、1%～25%、26%～50%、51%～75%、76%～100% 分别赋值0～4分，计算染色强度与阳性细胞百分比乘积，达4分或以上为免疫反应阳性。

三、统计学分析

结 果

一、不同组织中Twist蛋白表达分析

Twist蛋白免疫组化染色表现为棕黄色颗粒，呈弥漫性分布(图1)。癌组织Twist阳性表达率为66.2%(90/136) vs癌旁肝组织5.9%(5/85)显著较高(χ2=77.590，P<0.05)。

图1 Twist阳性染色免疫组化染色(×400)

二、Twist阳性、阴性患者临床病理参数差异分析

136例癌组织标本中有90例Twist蛋白阳性表达，46例Twist蛋白阴性表达。Twist阳性组病理分级为Ⅲ～Ⅳ级、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤细胞分化程度为低分化、包膜不完整、血管侵袭所占比例显著高于Twist阴性组(P<0.05)，见表1。

表1 Twist蛋白表达与肝细胞癌患者临床病理 参数的相关性(%，±s)分析

三、不同Twist蛋白表达者预后分析

Twist阳性、阴性者3年累积生存率分别为57.8%和65.2%，两组基本相当(Log-rank值=2.133，P=0.162，图2)。

图2 两组3年累积生存率比较

讨 论

本研究结果显示，组织内Twist过度表达可能与肝细胞癌有关，与既往报道相符[10]。薛栋等[11]报道发现，肝癌组织中Twist蛋白阳性表达率比癌旁肝组织更高。另有报道也证实Twist在肝细胞癌中高表达[12]。Twist表达可经阻断细胞分化、对抗凋亡、通过抑制可变阅读框基因/鼠双微体2基因/p53途径而阻抑p53肿瘤抑制通路等途径诱发癌症[13]。笔者认为，Twist基因癌基因特性明显，可经多种途径抑制细胞凋亡，考虑可能通过抑制E-钙黏蛋白表达、诱导上皮细胞间质化来促进肿瘤形成、发展及转移。与Zhao等[14]在胃癌中的研究结果是一致的，证实Twist表达与肝细胞癌密切相关。

此外，本研究结果显示，Twist阳性组Ⅲ～Ⅳ级病理分级、Ⅲ～Ⅳ期TNM分期、低分化、包膜不完整、血管侵袭所占比明显较高，提示Twist表达可用于病情评估。Zhang等[15]报道指出，Twist在肝癌组织中高表达，与分期、分化程度、血管侵袭等密切相关，证实了本结论。肿瘤进展、扩散是一系列病理改变的多步骤过程，此过程受激活或抑制、相互拮抗或协同等影响，推测Twist激活和Twist诱导上皮细胞间质化可能是肿瘤转移的关键环节。此外，有报道显示，Twist高表达可能提示肝癌侵袭危险性及不良转归，因此关注Twist表达对肝癌的预后评估有一定参考意义[16]。本研究中，发现Twist阳性组患者与阴性组患者3年累积生存率基本相当，可能与选取病例数偏少、观察时间较短等因素有关，有待今后深入研究。

综上，肝细胞癌患者癌组织Twist表达与病理学分级、TNM分期、分化程度、血管侵袭和预后密切相关，临床应引起足够重视。