2019年河南省禽流感专项监测评估

杨海波，刘 敏，靳 东，方先珍， 闫若潜

(河南省动物疫病预防控制中心，河南 郑州 450000)

禽流感(Avian influenza，AI)是由正黏病毒科A型流感病毒属禽流感病毒(AIV)引起的家禽、野鸟和部分哺乳动物发病的一种传染病[1]。禽流感病毒分为高致病性禽流感病毒(HPAIV)、低致病性禽流感病毒(LPAIV)和无致病性禽流感病毒(NPAIV)[2,3]。H5和H7亚型为高致病性禽流感，不仅对养禽业危害严重，还能感染人，被OIE列为A类动物疫病，我国将其列为一类动物疫病[4]。2004年以来几乎席卷全球并致数百人死亡的H5N1亚型禽流感的暴发，引起了我国政府和相关行政主管部门的高度重视，通过疫苗免疫和综合监管，有效控制了H5N1亚型高致病性禽流感的流行蔓延[5]。H7N9亚型禽流感从对鸡无致病性逐渐变为高致病性，但是经过疫苗免疫后已得到控制[6]。H9N2亚型低致病性禽流感是我国家禽中存在最广泛、传播效力最高、传播速度最快的禽流感。绝大多数 H7N9 亚型禽流感病毒的内部基因来自H9N2 亚型病毒，H9亚型禽流感病毒还可与其他病原体协同致病[7]。为加强高致病性禽流感的防控工作, 河南省动物疫病预防控制中心制定了《2019年河南省高致病性禽流感等动物疫病专项监测方案》，并组织实施。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2019年3-5月,从河南省18个省辖市共采集5993份样品，其中病原学样品3532份，来自于114个场点(鸡场97个、鸭场9个、鹅场5个、野鸟栖息地3个)，血清学样品2461份，来自于82个场点(鸡场71个、鸭场7个、鹅场4个)。采样按照估计流行率方法，预设 90%的个体流行率、95%的置信水平和 10%的可接受误差。每个省辖市随机抽6个场点，采样场点包括种禽场、商品禽场、水禽场、活禽交易市场、屠宰场，水网密集区选择1个野鸟栖息地，每个目标群体随机抽取30份样品。

1.2 主要仪器与试剂

7500荧光定量PCR仪(ABI公司)；NP968全自动核酸提取仪(西安天隆科技有限公司)。

核酸提取试剂盒(批号E0119040111)，苏州天隆生物科技有限公司生产；禽流感病毒实时荧光RT-PCR 检测试剂盒(批号20180620)、禽流感病毒H5/H7/H9亚型三重荧光RT-PCR 检测试剂盒(批号20190221)、禽流感病毒H7N9实时荧光RT-PCR 检测试剂盒(批号20190221)均由哈尔滨国生生物科技有限公司生产；禽流感抗原H5亚型(Re-11株，批号20190416；Re-12株，批号20190415)、H7N9亚型(Re-2株，批号20190415)流感抗原均由哈尔滨维科生物科技有限公司生产。

1.3 检测方法

参照国家标准 《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936-2003)[8]，采用血凝抑制试验 (HI)检测血清样品。依据《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》 (GB/T1943.1-2001)、《动物流感检测 H7N9亚型流感病毒双重荧光 RT-PCR检测方法》(GB/T35806-2018)检测病毒核酸，检测出的阳性样品再用禽流感病毒H5/H7/H9型荧光RT-PCR方法检测分型。

1.4 样品的实验室检测

对采集的血清样品，用HI检测禽流感和H7N9免疫抗体。HI抗体效价≥24，判定为个体合格；存栏禽群抗体合格率≥70%，判定为群体合格。采集的咽肛拭子样品的核酸提取按照试剂盒操作说明进行，取200 μL待检样品，加入到含胰酶的核酸提取板中，用磁珠法提取RNA，然后用荧光RT-PCR检测试剂盒对核酸进行病原学检测。

1.5 数据分析

将血清学和病原学检测结果使用Excel 2010软件进行数据录入、整理及表格绘制，分别从空间分布、群间分布方面进行数据分析。

2 结果

2.1 总体检测情况

如表1所示，血清学共检测82个养殖场的2461份血清样品，其中75个场群禽流感H5亚型和H7N9亚型均合格，平均场群合格率均为91.5%。禽流感H5亚型检测血清样品2461份，检出合格样品2169份，禽流感H5亚型真实抗体合格率为92.7%(95%CI:91.7%～93.7%)。禽流感H7N9亚型检测血清样品2461份，检出合格样品2177份，H7N9亚型真实抗体合格率为93.0%(95%CI: 92.0%～94.0%)。上述结果说明我省高致病性禽流感H5亚型和H7N9亚型免疫效果较好。114个场点3532份病原学样品未检出高致病性禽流感病毒H5亚型和H7N9亚型，14个场点检测出了90份禽流感H9亚型阳性，群体检出率为12%，个体阳性率为2.55%。

表1 血清学和病原学监测情况统计表

2.2 不同地区的检测情况

不同地区的检测结果见表2。不同地区禽流感病毒H5亚型的抗体合格率以豫南地区最高(94.8%)，豫北地区最低(77.5%)(P<0.05)；H7N9病毒的抗体合格率以豫南最高(99.1%)，豫西地区最低(79.9%)(P<0.05)。高致病性禽流感病毒H5亚型和H7N9亚型在全省5个区域均未检出，低致病性禽流感病毒H9亚型共检测出90份阳性，检出率最高的是豫中地区，其次是豫南地区、豫北地区和豫东地区，豫西地区未检测出阳性。

表2 不同区域的血清学和病原学检测结果

2.3 不同类型场点的检测情况

不同类型场点的免疫抗体合格率存在差异(表3)。禽流感病毒H5亚型的抗体合格率以商品场最高(93.4%)，屠宰场最低(41.8%)(P<0.05)；H7N9亚型病毒的抗体合格率以商品场最高(96.8%)，屠宰场最低(42.1%)(P<0.05)。病原学检测结果显示，屠宰场样品禽流感病毒H9亚型的检出率最高，阳性率为9.4%(31/330)；其次是农贸市场，阳性率为9.3%(48/517)；商品场样品的检出率为0.47%(11/2324)；种禽场样品未检出阳性。

表3 不同类型场点的血清学和病原学检测结果

2.4 不同家禽的检测情况

共检测2461份血清样品，其中鸡血清2131份、鸭血清210份、鹅血清120份。鸡的抗体合格率最高，H5亚型和H7N9抗体合格率分别为88.1%和88.4%；鸭次之，H5亚型和H7N9抗体合格率分别为74.0%和90.0%；鹅的抗体合格率较低，H5亚型和H7N9抗体合格率分别为49.1%和45.0%。本次病原学监测，只有鸡样品检测出禽流感H9亚型核酸阳性，鸭、鹅、野禽样品中均未检测出禽流感H5亚型、H7N9亚型和H9亚型核酸阳性。

3 讨论

全省高致病性禽流感H5亚型、H7N9亚型整体抗体合格率在国家标准之上，但是屠宰场样品抗体合格率较低，存在一定的风险，经回访调查，部分场的鸡免疫次数少，造成鸡体内抗体含量较低，不能对自身提供免疫保护。个别种禽场抗体合格率低是因为只免疫1次疫苗。鸭场、鹅场的抗体合格率普遍低于鸡场，经回访调查，发现存在免疫程序执行不到位和漏免的问题。禽流感病毒是分节段的负链单股RNA病毒，禽流感病毒流行情况和遗传演化较为复杂,在复制过程中容易发生基因突变，存在广泛的基因重排现象[9]，增大了该病的防治难度。建议广大养殖户继续加强免疫，并做好抗体检测，及时调整免疫方案。

高致病性禽流感H5亚型、H7N9病毒未检测出核酸阳性，低致病性禽流感H9亚型的核酸阳性检出率相对较高，说明我省的高致病性禽流感病毒的免疫工作做得比较好，但是低致病性禽流感存在不免疫和免疫次数较少的现象。虽然低致病性禽流感H9亚型引发禽的死亡率低于高致病性禽流感，但是造成的经济损失不亚于高致病性禽流感，有些低致病禽流感病毒甚至可以突破宿主屏障感染人并致死，具有重大的公共卫生学意义。因此，在做好高致病性禽流感免疫工作的同时，要加强对低致病性禽流感的免疫，控制其蔓延和流行。

4 结论

河南省禽流感病毒抗体总体合格率大于85%，取得较好的防控效果。病原学结果显示我省有H9亚型禽流感发生流行的风险，我省仍需要加强禽流感病毒的免疫工作，做好定期监测和流行病学调查。