CCR7蛋白在肝细胞癌中的表达及临床意义

王博，范瑞，吴光峰

（南阳市第一人民医院 病理科，河南 南阳 473000）

肝细胞癌在全球恶性肿瘤发病率居于第5 位，死亡率居于第2 位，临床常通过手术治疗，但治疗效果及预后较差，5 年内复发率约达80%［1］。因此，寻找早期即可预测肝细胞癌的标志物是目前临床研究的重点。CC 趋化因子受体7（CCR7）具有细胞生存、类固醇激素受体活化及调节免疫等功能，为G 蛋白偶联受体［2］。近年来有研究指出，CCR7 与恶性肿瘤的发生、发展具有密切关系［3］，提示CCR7 可能与肝细胞癌的发生及病情发展存在一定联系。本文选取52 例肝细胞癌患者，对组织中CCR7 蛋白在肝细胞癌中的表达及临床意义进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016 年1 月至2017 年6 月南阳市第一人民医院收治的52 例肝细胞癌患者作为研究对象，通过手术切除癌组织及癌旁2 cm 外的正常组织，采用免疫组织化学及组织芯片技术测定CCR7表达水平。根据CCR7 蛋白在肝细胞癌组织中的高低表达情况分为高表达组34 例和低表达组18 例。其中，男性35 例，女性17 例；年龄34～68 岁，平均（53.82±6.83）岁；肿瘤最大直径<3 cm。所有患者符合肝细胞癌诊断标准［4］，且经手术病理诊断确诊，术前未接受药物治疗、放化疗。本研究通过医院伦理委员会批准。患者及其家属签署知情同意书。

1.2 检测方法

组织标本用石蜡包埋后进行切片，厚度为2.5 mm，脱蜡、水化后进行抗原碱性修复，并冷却。用磷酸盐缓冲液（PBS）进行充分洗涤3 次，3 min/次，滴加3% 过氧化氢，室温放置10 min 孵育。用PBS 浸洗3 次，3 min/次，将正常山羊血清封闭液滴入，室温放置30 min；滴加50 mL/片的一抗（英国Abcam 公司），以4℃温度过夜。PBS 浸洗3次，5 min/次，滴加50 mL/片二抗（美国Santa Cruz 公司），以37℃温度放置30min。PBS 浸洗3次，5 min/次，滴加50 mL/片的辣根过氧化物酶标记链酶卵白素。PBS 浸洗3 次，5 min/次，用二氨基联苯胺（DAB）显色5 min。苏木精复染，经过脱水、透明固定后，用PBS 作阴性对照。

1.3 评价指标

①肝功能分级标准［5］：A 级为血清蛋白>35 g/L，血清胆红素<20 mg/L，无腹水、营养正常；B 级为血清蛋白30～35 g/L，血清胆红素20～30 mg/L，少量腹水、营养尚可。②通过肿瘤细胞、间质细胞的染色深浅分为0～3 分，依次为无着色至强着色；根据阳性肿瘤细胞占比分为0～3 分，依次为<10%、10%～49%、50%～75%、>76%。CRR7 阴阳性判定：两项相加分数0～1 分为阴性，2 分为弱阳性，3～4 分为中阳性，5～6 分为强阳性。③用灰度扫描仪分析灰度值，以肝癌组织CCR7 灰度值/对应β-actin 灰度值为CCR7 蛋白的表达量。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 25.0 统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用独立样本t检验，组内比较用配对t检验；计数资料以率（%）表示，比较用χ2检验；P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CCR7 在肝细胞癌及癌旁组织中的表达情况

52 例患者肝细胞癌组织中CCR7 阳性率为65.38%（34/52），配对癌旁组织中CCR7 阳性率为26.92%（14/52）。肝细胞癌组织与配对癌旁组织中CCR7 阳性率比较，差异有统计学意义（χ2=15.476,P<0.001）。

2.2 CCR7 表达与临床病理特征的关系

分析52 例患者的相关资料，CCR7 表达与性别、年龄、肝功能分级、肝硬化及乙肝病史无关（P>0.05），而与甲胎蛋白（AFP）水平、包膜完整有关（P<0.05）。见表1。

2.3 CCR7 表达与患者预后的关系

CCR7 高表达组中1 年生存率及无复发率低于低表达组，差异无统计学意义（P>0.05）。CCR7高表达组3 年生存率及无复发率低于低表达组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表1 CCR7 表达与临床病理特征的关系

表2 CCR7 表达与患者预后的关系 ［n(%)］

3 讨论

恶性肿瘤转移的机制较为复杂，目前包括以下三点：①种子与土壤学说，即肿瘤可在适宜的靶器官上生长发育，具有特异性；②归巢学说，即肿瘤细胞表面具有CD44 蛋白、细胞间黏附分子1 及CCR7 等归巢受体，可通过归巢作用机制进入靶器官；③趋化因子学说，即类似与白细胞炎性趋化，肿瘤细胞可分泌趋化因子受体，并通过与具有特异性配体的靶器官结合，由原发灶向靶器官转移［6-8］。因此，对肝细胞癌患者进行敏感性的分子标志物检测，可对肿瘤预后、复发进行评估。

本研究结果显示，52 例患者肝细胞癌组织中CCR7 阳性率高于配对癌旁组织，52 例患者中CCR7 表达与性别、年龄、肝功能分级、肝硬化及乙肝病史无关，而与AFP 水平、包膜完整有关。其中，10 例患者出现复发。CCR7 高表达组中1 年生存率及无复发率高于低表达组，但3 年生存率及无复发率低于低表达组，说明CCR7 的表达与肝细胞癌患者临床特征具有一定的相关性，且CCR7 可能参与了肝细胞癌的转移过程，对肝细胞癌患者的预后具有评估价值。

CCR7 主要通过淋巴细胞表达，是CC 类趋化因子受体，在不同类型的细胞上均可表达，其配体人趋化因子配体21（CCL21）主要通过淋巴器官、次级淋巴组织表达［9-10］。CCR7 与CCL21 结合后，可使细胞内肌动蛋白发生聚合反应，并且可引起钙离子内流，形成细胞伪足［11］。另外，CCR7与CCL21 结合后可使基质金属蛋白酶分泌增多，从而使肿瘤细胞周围基质发生降解，促进肝细胞癌的淋巴转移；并且还能够促进β-1 整合素的分泌，从而促使肝癌细胞黏附于淋巴管内皮细胞，促使淋巴转移的发生，影响肝细胞癌的预后［12-13］。

综上所述，CCR7 的表达与肝细胞癌患者临床特征具有一定的相关性，且CCR7 可能参与了肝细胞癌的转移过程，对肝细胞癌患者的预后具有评估价值。