含黄芪中药复方制剂中黄芪甲苷含量测定的研究进展

王嵩 黄思捷 郤庆

摘 要 查阅国内外相关文献进行分析发现，目前含黄芪的中药复方制剂中黄芪甲苷的含量测定方法较多，其中以高效液相色谱法为主，为中药复方复杂成分中定量定性分析提供了有效地帮助。本文对含黄芪的中药复方制剂中黄芪甲苷含量的各种测定方法进行综述。

关键词 黄芪 中药复方制剂 黄芪甲苷 含量测定

中图分类号：R286； R927.2 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2021）05-0064-05

*基金项目：全国中药特色技术传承人才培训项目（国中医药人教函〔2019〕43号）；上海市“医苑新星”青年医学人才培养计划（沪卫计人事〔2019〕72号）；上海市卫计委科研课题青年项目（20174Y0160）；上海市虹口区卫健委中医药科研项目（HKQ-ZYY-2020-16）

Advances in the determination of astragaloside Ⅳin compound prescriptions containing astragalus*

WANG Song**， HUNAG Sijie， XI Qing***

（Shanghai TCM-Integrated Hospital， Shanghai University of TCM， Shanghai 200082， China）

ABSTRACT There are various methods for the determination of astragaloside Ⅳ in TCM compound preparations containing astragalus in domestic and foreign literatures. These methods are mainly involved in high performance liquid chromatography， which can provide effective results for qualitative and quantitative determination of the TCM compound prescriptions. In this article， the various methods for the determination of astragaloside Ⅳ in TCM compound preparations containing astragalus are reviewed.

KEY WORDS astragalus； traditional Chinese medicine compound prescriptions； astragaloside Ⅳ； content determination

黄芪是常用的补益类中药，临床主要用于气虚自汗、久咳虚喘、肺气虚证、脾气虚弱之中气下陷及浮肿、疮疡溃难敛等症的治疗。近年来的研究发现黄芪甲苷对于呼吸系统、消化系统及循环系统等疾病有一定的治疗作用。现代研究已经从黄芪中提取、分离了包括黄酮、皂苷、生物碱类等多种化合物，其中黄芪甲苷是黄芪成分中最主要的活性物质。黄芪甲苷在黄芪中的含量较低，随着科学技术的发展，对于黄芪甲苷的含量测定的相关研究也取得了较大的进步，逐步由薄层法等转向灵敏度更高、分离度更好的高效液相色谱法及超高效液相色谱法等。本文对近年来中药复方中黄芪甲苷的含量测定方法做一概述。

1 薄层扫描法

薄层扫描法包括薄层吸收扫描和薄层荧光扫描两种方法。在各种分析技术中，因其分析时间短、操作简便、成本低等优点而成为相关研究的理想选择[1]。

1.1 补阳还五胶囊

补阳还五胶囊由《医林改错》中补阳还五汤加减而成，由当归尾、赤芍、川芎、红花等6味中药组成。刘世军等[2]建立硅胶G薄层板，氯仿-甲醇-水（13∶6∶2）10 ℃以下放置过夜的下层溶液展开，选择530 nm与700 nm两种波长，有良好的专属性。线性范围在0.980～6.860 mg之间，平均回收率为99.49%。3批样品黄芪甲苷的含量在1.493～1.532 mg/g之间。该方法能有效地控制补阳还五胶囊的质量。

1.2 六味补气胶囊

六味补气胶囊由黄芪、生晒参等六味中药组成。周晶[3]采用硅胶G板，以氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）下层溶液为展开剂，检测波长为510 nm。在0.988～4.940 mg范围内线性良好，平均加样回收率为98.3%，RSD=1.42%。该方法测得的黄芪甲苷平均含量为2.306 mg/g。解决了末端吸收，紫外检测不稳定，重复性差的缺点。

1.3 升胃冲剂

院内制剂升胃冲剂由黄芪、党参、陈皮等中药组成。黄芪为该方的君药，对其主要成分黄芪甲苷的含量研究能有效地对该制剂进行质量控制。张昌文等[4]采用双波长薄层扫描法（λS=515 nm，λR=700 nm）对升胃颗粒剂中黄芪甲苷进行定量。黄芪甲苷在0.948～4.740 mg/ml范围内线性关系良好，平均回收率为96.46%，将0.25 mg/g作为升胃颗粒黄芪甲苷含量测定的最低標准。

1.4 芪黄通秘软胶囊

芪黄通秘软胶囊是从医院制剂研发而成的一款中药6类新药，由黄芪、首乌等十多味中药组成。常用于老年性便秘、习惯性便秘证属气血两虚、大肠失润者的治疗。孔德宪等[5]在试用高效液相色谱法效果不理想的情况下采用薄层色谱扫描法，波长λS=515 nm，λR=700 nm，氯仿-甲醇-水（13∶6∶2）作为展开剂。发现黄芪甲苷在1.00～5.00 mg的范围内线性关系良好，平均回收率为98.7%，样品的平均含量为0.099 mg/粒。

2 高效液相色谱法

2.1 蒸发光散射检测（ELSD）

蒸发光散射检测主要用于检测含有弱色团的非挥发性化合物的定量分析和定性分析，作为非特异性通用检测器与高效液相色谱联用具有较高的分析通量，重复性好，结果精确，弥补了常规紫外检测无法检测或只有紫外末端吸收的缺陷。因此HPLC-ELSD联用是目前中药复方中测定黄芪甲苷含量的主要方法。近年来利用HPLC-ELSD检测含黄芪中药复方制剂中黄芪甲苷含量的情况见表1。

2.2 质谱检测（MS）

液质联用技术具有分离效果好、特异性和灵敏度高等优点，是最常用的药物分析方法。中药成分复杂、分离困难，色谱法有时很难对中药成分做出分析检测。而高效液相色谱与质谱联用可避免复杂的样品预处理，同时得到化合物特征结构碎片等信息，尤其适用于含量较低成分的检测[20]。目前对于黄芪甲苷检测的质谱条件多采用电喷雾离子源，用于定量分析的检测离子及液相色谱检测条件会有所不同。使用该方法检测含黄芪中药复方中黄芪甲苷含量见表2。

2.3 电雾式检测（CAD）

电雾式检测是基于雾化-气溶胶的HPLC检测器，通过将液相洗脱液雾化蒸发后对溶质颗粒进行检测，主要用于无或者弱紫外吸收的化合物的检测，解决了电离检测或蒸发光散射检测等在精确度及灵敏度等方面的局限性。

2.3.1 归脾丸

归脾丸是临床治疗心脾两虚、脾不统血所致的心悸、失眠、健忘等疾病的经典方，出自《医学六要》。为了更好地控制该复方的质量，保证临床疗效，高海涛等[25]在传统的HPLC-ELSD法的基础上，选择电雾式检测器，雾化温度为35 ℃，载气：N2，压强63.2 pa，黄芪甲苷含量在0.416～2.496 mg/ml范围内与峰面积线性关系良好，平均回收率为96.4%，为归脾丸的质量控制提供了新方法。

2.3.2 其他中药复方制剂

由于中药复方成分复杂，含量较低不易分离，故常在样品制备的过程中采用不同的萃取方式，利用电雾式检测器的高灵敏度等特点进行检测。廖强等[26]以水饱和正丁醇为溶剂，100 ℃，5 min，循环3次作为快速溶剂萃取的条件，以HPLC-CAD法对补中益气丸、通窍鼻炎颗粒、醒脑再造胶囊、玉屏风颗粒四种中成药中的黄芪甲苷含量进行检测。在26.62～665.5 mg/ml内线性良好，回收率为98.80%～100.80%，与药典方法的结果差异不大，但检测效率明显提高。李效宽等[27]采用在线固相萃取高效液相色谱法，结合电雾式检测器，以双三元液相色谱作为上样净化泵和分析泵，测得黄芪甲苷在4.0～80 mg/ml范围内线性关系良好，平均回收率为97.6%。

3 超高效液相色谱法

超高效液相色谱（UPLC）柱效速度明显加快，检测时间缩短，近年来应用越来越广泛，尤其在中药复方研究中有独特的应用价值。使用UPLC-PDA进行定量分析，可同时测定不同结构的多种化合物[28]。

3.1 复方扶芳藤合剂

复方扶芳藤合剂属国家中药保护品种的保健品口服液。在《中国药典》中其质量控制的方法是测定其有效成分黄芪甲苷的含量。蒋湘等[29]通过建立UPLC-QExactive方法对该制剂中的13个成分进行了分析，测得黄芪甲苷的含量符合《中国药典》的标准，精密度、重复性等指标均符合要求。该方法的应用能系统、全面地反应复方扶芳藤合剂的质量。

3.2 心衰宁颗粒（无糖型）

心衰宁颗粒由黄芪等8味常用中药组成。曾真等[30]采用Waters超高效液相色谱仪进行检测。以乙腈-水（32∶68）为流动相，柱温30 ℃、流速0.5 ml/min的作为检测条件。黄芪甲苷的回收率为98.45%，三批中试样品中的含量为0.839～0.888 mg/g。该方法提高了测试效率，为该制剂推向市场提供了质量标准依据。

3.3 汉养生精口服液

汉养生精口服液是由院内制剂研发而成，由黄芪、枸杞等中药组成，已被列为非物质文化遗产，具有提高人体免疫力、抗衰老、抗肿瘤等作用。尚庆霞等[31]采用Waters Acquity UPLC C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.7 mm），以乙腈-0.1%甲酸水溶液（15∶85）为流动相、流速0.2 ml/min 对该制剂中的黄芪甲苷等5种成分进行含量测定。通过电喷雾离子源多反应监测方式正离子模式检测离子对m/z 807.3→627.30测定黄芪甲苷的平均含量为37.88 mg/ml，测定结果稳定可靠，重复性好，实用性强，为该药的全面质量控制提供了依据。

3.4 疏肝健脾颗粒

疏肝健脾颗粒由黄芪、熟地黄、枸杞等中药组成，具有疏肝健脾，调经活血的功效。罗静霞等[32]采用Agilent Poroshell C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，2.7 mm），乙腈-0.1%甲酸水溶液（40∶60）为流动相，流速0.2 ml/min，进样量2 ml，柱温35 ℃，漂移管温度100 ℃，氮气2.0 ml/min，所测定的10批样品中黄芪甲苷含量在1.236～2.576 mg/g之间。较传统的HPLC法，该研究采用的UPLC-ELSD法洗脱更快，分離效率更高。

3.5 舒筋活血颗粒

舒筋活血颗粒由黄芪、葛根等中药组成，对颈肩臂疼痛等有一定的疗效。为了有效地解决同时检测黄芪甲苷与葛根素的问题，陈昭等[33]采用UHPLC-MS-MS法进行同时测定，以Agilent Poroshell C18为色谱柱、0.2%甲酸-乙腈（40∶60）为流动相，在4 min内洗脱，10批次供试品中黄芪甲苷的平均质量分数为0.028 mg/g，准确性和重复性均良好。该方法的应用解决了含黄芪的中药复方制剂在同时检测含黄芪甲苷等多成分含量时的不便。

4 近红外光谱法

近红外光与可见光相比，能穿透生物组织，具有较少的散射和吸收，从而为定量检测提供了帮助[34]。近红外光谱（NIRS）技术是近年来逐步应用于各类食品、药品等定性及定量分析的方法，具有快速、高效、无损、用量低等特点。目前运用于中药复方分析的研究较少，而由黄芪、丹参等中药组成的精芪双参胶囊是其中之一，其有补气养阴、活血化瘀、养心安神的功效。传统的HPLC-ELSD检测周期较长，苏婷等[35]采用声光可调-近红外光谱法，首次建立了精芪双参胶囊混合过程的近红外光（NIR）在线监测模型，黄芪甲苷定量模型的主成分维数为9，R2为0.954 9，校正均方根偏差（RMSEC）为0.039 2，预测均方根偏差（RMSEP）为0.042 6，预测平均值为11.74 mg/g，HPLC-ELSD法实测平均值为11.38 mg/g，平均偏差为3.16%。任绪华等[36]收集了80批次精芪双参胶囊，运用偏最小二乘法（PLS）建立各指标分析值的NIR多元校正模型，各模型RMSEC为0.062 4，RMSEP为0.010 3，决定系数（correlation）为0.977 1，实测值与预测值的偏差为2.02%。结果都显示该方法可快速判断精芪双参胶囊的混合终点，并能够快速测定精芪双参胶囊中黄芪甲苷的含量，可提高其质量控制的水平及缩短周期。

5 其他方法

除上述方法外，对于中药复方中黄芪甲苷含量测定的研究还利用其它相关技术，如反相色谱法、毛细管电泳法、近红外漫反射光谱法等，在原有检测方法的基础上有一定改善，并取得了良好的效果。

6 展望

随着检测技术的不断进步，对于黄芪甲苷的检测方法也在不断改良，伴随着新型检测器的不断出新，操作简单、重复性好、灵敏度高等特点是研究者选择的方向。黄芪是临床常用的中药之一，也是众多中药复方制剂的主要组成，检测技术的不断更新将有助于进一步完善这些制剂的质量控制和提高。

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