ARCHITECT C16000全自动生化分析仪检测血清胱抑素C的性能评价

薛云松，邓德耀，李丽莉，周林华，李宜铮，顾津伊，刘建梅

云南省第二人民医院检验科，云南昆明 650000

血清胱抑素C(Cys C)是一种含122个氨基酸，相对分子质量为13 000的蛋白质,属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂,广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中[1]。血液循环中的Cys C仅能通过肾小球滤过而被清除体外，其可作为反映肾小球滤过率(GFR)的理想标志物[2-3]。目前较多研究发现，早期肾损伤时Cys C水平明显升高，其可作为早期监测肾功能的首选指标[4-6]。此外，Cys C不受性别、年龄、饮食等因素的影响，相比于血清肌酐能更准确、更早期地反映肾功能的变化情况,具有较好的临床应用价值，因此，Cys C检测结果的准确性也极为重要。根据WS/T 420-2013[7]和CNAS-CL02：2012[8]中的相关要求，检测系统在用于常规工作前应对其分析性能进行验证，证实其能够满足预期检测要求。本研究对本实验室中ARCHITECT C16000全自动生化分析仪检测Cys C的性能进行了评价，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集本院20例就诊患者和120例健康体检者的血液标本，离心分离血清，置于-20 ℃冰箱中保存备用。

1.2仪器与试剂 美国雅培公司生产的ARCHITECT C16000全自动生化分析仪。日本积水医疗株式会社生产的Cys C检测试剂、配套校准品及配套质控品，所有试剂、校准品、质控品均在有效期内。

1.3方法

1.3.1检测前准备 参数设置和操作程序严格按照试剂盒说明书进行。每天开机后进行日常维护，检测配套质控品，质控合格后再进行项目检测。质控出现异常时，及时查找原因并纠正，然后再进行质控，质控合格后才能进行项目检测。

1.3.3正确度验证 厂商校准品正确度验证：参考美国临床和实验室标准协会(CLSI) EP15-A2[10]，使用厂商提供的有注册证(具有溯源性)的5个水平不同批号校准品(S1、S2、S3、S4、S5)，分别重复检测3次，计算平均值作为最终检测值，并将其与靶值进行比较，计算相对偏移=(检测值-靶值)/靶值×100%，相对偏移的绝对值要小于1/2室间质评允许总误差(12.50%)。检测系统正确度验证：根据WS/T 492-2016[11]相关要求，将本实验室的检测系统定为待评系统,已通过ISO 15189实验室认可的另一家医院的检测系统定为参比系统，将20例本院就诊患者的血清标本(Cys C水平覆盖检测方法的可报告范围)用于验证，每天5例，两个系统各检测1次，连续检测4 d。以参比系统的检测值为横轴，待评系统的检测值为纵轴，进行相关性曲线拟合。计算两个系统检测值间的相对偏移=(待评系统检测值-参比系统检测值)/参比系统检测值×100%，相对偏移的绝对值要小于1/2室间质评允许总误差(12.50%)。

1.3.4分析测量范围验证 参考NCCLS EP6-A[12]和文献[13]，将厂商提供的Cys C高水平标本(H)和来自临床的Cys C低水平标本(L)按5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的比例配制成6个待评价标本。每个标本检测2次,第1次按标本水平由低到高的顺序检测，第2次按标本水平由高到低的顺序检测。计算各标本2次检测的平均值，以平均值作为实测值。按照公式(CL×VL+CH×VH)/VL+VH计算预期值，其中CL代表L的水平，CH代表H的水平，VL代表L的体积，VH代表H的体积。将实测值与预期值比较，进行曲线拟合，计算线性回归方程Y=aX+b。检测结果要满足相关系数r≥0.975，斜率为0.97～1.03。

1.3.5临床可报告范围验证 参考NCCLS EP6-A[12]，将Cys C高水平标本按2、4、8、10、20、30倍进行稀释，检测稀释后的标本，重复检测3次，计算稀释后平均值，实际值为稀释后平均值×稀释倍数。将实际值与理论值进行比较，计算平均稀释回收率=实际值/理论值×100%，平均稀释回收率在80%～120%时的最大稀释倍数为可接受的最大稀释倍数。临床可报告范围上限=可接受的最大稀释倍数×分析测量范围上限。

1.3.6抗干扰性能验证 参考WS/T 416-2013[14]，收集不含干扰物或干扰物水平极低的Cys C正常水平标本和Cys C异常水平标本各1份，备用。干扰物的选择参照厂商的试剂说明书,选择成品的游离胆红素、结合胆红素、血红蛋白及乳糜。将干扰物配制成不同水平的溶液，游离胆红素水平为4、8、12、16、20 mg/dL；结合胆红素水平为4、8、12、16、20 mg/dL；血红蛋白水平为100、200、300、400、500 mg/dL；乳糜水平为600、1 200、1 800、2 400、3 000 FTU。将上述不同水平的干扰物和收集的Cys C正常水平和异常水平标本以1∶9的比例混合，混匀后进行检测。另将生理盐水与收集的Cys C正常水平和异常水平标本以1∶9的比例混合，混匀后作为对照进行检测。每个标本重复检测3次，第1次按干扰物水平由低到高的顺序检测，第2次按干扰物水平由高到低的顺序检测，第3次再按干扰物水平由低到高的顺序检测。计算含干扰物标本检测值与对照标本检测值间的相对偏差=(含干扰物标本检测值-对照标本检测值)/对照标本检测值×100%，相对偏差的绝对值小于厂商标准(10.00%)为结果可接受。

1.3.7生物参考区间验证 参考CLSI C28-A2[15]，将120例健康体检者的血清标本用于验证参考区间的适用性。检测健康体检者血清Cys C水平，按Dixon方法检查并剔除离群值，超出参考区间的Cys C检测结果不超过10.00%时则通过验证。

1.4统计学处理 采用Excel2007进行数据统计与分析。

2 结 果

2.1精密度验证结果 低水平质控品、高水平质控品及混合血清标本的批内CV均小于1/4室间质评允许总误差(6.25%)，批间CV均小于1/3室间质评允许总误差(8.33%)，也均小于厂商标准(10.00%)。见表1。

表1 精密度验证结果

2.2正确度验证结果

2.2.1厂商校准品正确度验证结果 5个水平校准品检测值与靶值相对偏移的绝对值均小于1/2室间质评允许总误差(12.50%)。见表2。

表2 厂商校准品正确度验证结果

2.2.2检测系统正确度验证结果 参比系统和待评系统的检测值具有很好的相关性，R2=0.999 5，见图1。参比系统和待评系统检测值相对偏移的绝对值小于1/2室间质评允许总误差(12.50%)，两个系统检测结果一致性好。见表3。

表3 检测系统正确度验证结果

2.3分析测量范围验证结果 实测值与预期值的线性回归方程为Y=1.000X+0.094，r=0.999 1，r≥0.975，斜率在0.97～1.03，表明检测结果可接受。Cys C的检测结果在0.14～9.91 mg/L呈线性，故Cys C的分析测量范围为0.14～9.91 mg/L。

2.4临床可报告范围验证结果 当稀释倍数为20倍及以下时，平均稀释回收率在80%～120%，因此，本实验室待评系统检测Cys C可接受的最大稀释倍数为20倍，见表4。临床可报告范围上限=可接受的最大稀释倍数×分析测量范围上限=20×9.91(mg/L)=198.20 mg/L。

表4 临床可报告范围验证结果

图1 参比系统和待评系统检测值的相关性曲线

2.5抗干扰性能验证结果 含不同水平游离胆红素(4、8、12、16、20 mg/dL)、结合胆红素(4、8、12、16、20 mg/dL)、血红蛋白(100、200、300、400、500 mg/dL)及乳糜(600、1 200、1 800、2 400、3 000 FTU)标本的检测值与对照标本检测值相对偏差的绝对值均小于厂商标准(10.00%)。见表5、6。

表5 含不同水平干扰物的Cys C正常水平标本与对照标本检测值的相对偏差(%)

表6 含不同水平干扰物的Cys C异常水平标本与对照标本检测值的相对偏差(%)

2.6生物参考区间验证结果 120例健康体检者血清Cys C水平为0.57～1.20 mg/L。有4例健康体检者血清Cys C水平在参考区间(0.57～1.05 mg/L)外，超出参考区间的Cys C检测结果不超过10.00%，通过验证。

3 讨 论

Cys C是碱性低分子蛋白质，其水平随GFR的下降而上升，其评价GFR的灵敏度和特异度为89%～97%[16]。Cys C诊断肾功能轻、中度下降的灵敏度高于血清肌酐[17]。胶乳凝集法检测Cys C的原理为：标本中的Cys C和鼠抗人Cys C单克隆抗体致敏胶乳颗粒发生抗原抗体反应，产生凝集，通过测定吸光度的变化来反映标本Cys C水平。

新的检测试剂应用于临床之前,应在实验室的检测系统下对厂商声明的基本性能进行评价,证实其能够达到所要求的性能标准。检测系统的分析性能能够满足临床要求是医学实验室认可和检测结果互认的基础。本研究对ARCHITECT C16000全自动生化分析仪检测Cys C的性能进行了验证，以判断其是否能满足临床需要。

精密度是反映检测系统性能的最基本指标，本研究精密度验证结果显示，低水平质控品、高水平质控品及混合血清标本的批内CV均小于1/4室间质评允许总误差(6.25%)，批间CV均小于1/3室间质评允许总误差(8.33%)，也均小于厂商声明的10.00%，说明该检测系统的Cys C检测结果具有较好的重复性。正确度用不同批号的校准品进行验证，相对偏移的绝对值均小于1/2室间质评允许总误差(12.50%)。此外，本实验室检测系统的检测结果与通过ISO 15189实验室认可的检测系统的检测结果也具有较好的一致性。分析测量范围验证是反映检测方法性能特征的重要指标，也是保证检测结果准确、可靠的重要条件，本实验室Cys C分析测量范围为0.14～9.91 mg/L，与厂商声明的(0.10～10.00 mg/L)接近；r≥0.975，斜率在0.97～1.03，表明检测结果可接受，可满足临床标本检测需求。可接受的最大稀释倍数为20倍，临床可报告范围上限为198.20 mg/L，在该范围内的稀释标本检测结果可靠,符合临床要求。本研究所选用的不同水平游离胆红素、结合胆红素、血红蛋白和乳糜不会干扰Cys C正常与异常水平标本的检测结果(相对偏差的绝对值均小于10.00%)。120例健康体检者中有4例血清Cys C水平在参考区间外，但超出参考区间的Cys C检测结果不超过10.00%，可以认为目前使用的Cys C参考区间适用于本实验室。

综上所述，ARCHITECT C16000全自动生化分析仪检测Cys C的性能能够满足临床需求。