兰香草乙酸乙酯部位化学成分的研究

陈美安林春花梁 雪

（广西中医药大学，广西 南宁530001）

兰香草为马鞭草科莸属植物兰香草Caryopteris incana（Thunb.）Miq.的全草或带根全草，多生于较干旱的山坡、路旁或林缘，在广西、广东、浙江、福建、江苏等省均有分布［1］。其味辛，性温，具有疏风解表、祛寒除湿、散瘀止痛等功效，可用于治疗风寒感冒、百日咳、慢性支气管炎、肝炎、胃肠炎、皮肤瘙痒、风湿麻痹及疮疖痛肿等，在民间一般作为草药使用［2］。目前关于兰香草的化学成分、药理活性及临床应用报道甚少。本课题组在前期进行了兰香草不同提取部位抗炎活性筛选，其主要有效部位为乙酸乙酯部位［3］。为进一步探究其抗炎活性的物质基础，本研究采用现代分离技术，对兰香草乙酸乙酯部位的化学成分进行了系统分离鉴定，以期为从兰香草药材中寻找安全有效的抗炎活性成分或先导化合物提供实验依据。

1 材料

ZAB⁃HS 双聚焦磁质谱仪（英国VG 公司）；Dre⁃500 MHz、AV⁃400 MHz核磁共振仪（瑞士Bruker 公司）；YRT⁃3 型熔点测定仪（天津大学精密仪器厂）；AJ150 电子分析天平（瑞士梅特勒⁃托利多公司）；RE⁃52AA 旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；优普纯水仪（四川优普超纯科技有限公司）。柱层析用硅胶（100～200 目、200～300 目，青岛海洋化工厂）；Sephadex LH⁃20（瑞 士Pharmacia 公司）；薄层层析用硅胶G（青岛海洋化工工厂）。除提取乙醇为70%乙醇和纯水外，其余试剂均为分析纯，均购自广东省化学试剂工程技术研究开发中心。

兰香草采自广西宜州，经广西中医药大学药用植物教研室的朱意麟实验师鉴定为马鞭草科莸属植物兰香草Caryopteris incana（Thunb.）Miq.的干燥全草，阴干，粉碎成粗粉，备用。

2 提取与分离

取兰香草粗粉12.30 kg，以12 倍量70%乙醇渗漉提取，渗漉液回收溶剂至干，得乙醇总提取物2 059.03 g。取1 845.33 g，用水制备成水混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂至干，分别得石油醚部位干浸膏25.91 g、乙酸乙酯部位干浸膏492.49 g、正丁醇部位干浸膏754.23 g、水部位干浸膏253.60 g。

取乙酸乙酯部位干浸膏180 g，经硅胶柱层析分离，以石油醚⁃乙酸乙酯（100 ∶0～80 ∶1～50 ∶1～30 ∶1～20 ∶1～10 ∶1～5 ∶1～2 ∶1～1 ∶1～0 ∶100）和氯仿⁃甲醇（50 ∶1～20 ∶1～10 ∶1～5 ∶1～2 ∶1～1 ∶1～0 ∶100）梯度洗脱，经薄层色谱检测，合并相似组分，得9 个组分Fr.1～9。Fr.1 经硅胶柱层析分离，以石油醚⁃乙酸乙酯（100 ∶0～50 ∶1～30 ∶1～20 ∶1～10 ∶1～5 ∶1～2 ∶1～1 ∶1～0 ∶100）洗脱，得化合物1（16.2 mg）、2（5.1 mg）、3（7.2 mg）；Fr.2～Fr.3 经硅胶柱层析分离，以石油醚⁃丙酮（100 ∶0～50 ∶1～20 ∶1～10 ∶1～5 ∶1～2 ∶1～1 ∶1～0 ∶100）梯度洗脱，得化合物4（11.0 mg）、5（13.2 mg）；Fr.2～Fr.3 的石油醚⁃丙酮5 ∶1、2 ∶1、1 ∶1、0 ∶100 梯度洗脱部分合并，继续用氯仿⁃甲醇（60 ∶1～30 ∶1～15 ∶1～10 ∶1～5 ∶1～2 ∶1～1 ∶1～0 ∶100）梯度洗脱，得化合物6（8.5 mg）、7（9.0 mg）；Fr.5 经硅胶柱层析分离，以氯仿⁃丙酮和丙酮⁃甲醇梯度洗脱，得2 个组分Fr.7⁃1～Fr.7⁃2，Fr.7⁃2 经Sephadex LH⁃20 柱层析分离，以甲醇洗脱，得化合物8（13.4 mg）；Fr.6～Fr.7 经硅胶柱层析分离，以氯仿⁃甲醇梯度洗脱，得4 个组分Fr.67⁃1～Fr.67⁃4，Fr.67⁃1 经Sephadex LH⁃20 柱层析分离，以甲醇洗脱，得化合物9（7.5 mg）、10（43.6 mg）；Fr.67⁃3 经Sephadex LH⁃20 柱层析分离，以甲醇洗脱，得化合物11（11.0 mg）；Fr.8 经Sephadex LH⁃20 柱层析分离，以甲醇洗脱，得化合物12（15.4 mg）、13（8.1 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色结晶（甲醇），mp 150～151 ℃。碘化汞钾反应、碘⁃碘化钾反应、硅钨酸反应均呈阳性，推测为生物碱类化合物。ESI⁃MSm／z：174.0 ［M⁃H］－，分子式C10H9NO2。1H⁃NMR（400 MHz，DMSO⁃d6）δ：11.92（1H，brs，1⁃NH），8.07（1H，s，H⁃2），7.98（1H，d，J＝6.8 Hz，H⁃7），7.48（1H，d，J＝6.8 Hz，H⁃4），7.20（2H，m，H⁃5，6）；13C⁃NMR（100 MHz，DMSO⁃d6）δ：164.8（⁃C ＝O），136.5（C⁃2），132.5（C⁃8），125.7（C⁃9），122.4（C⁃4），121.4（C⁃6），120.5（C⁃5），112.4（C⁃7），106.4（C⁃3），50.7（⁃OCH3）。以上数据与文献［4］ 报道基本一致，故鉴定为吲哚⁃3⁃甲酸甲酯。

化合物2：橘黄色粉末状结晶（氯仿），mp 196～198 ℃。三氯化铁⁃铁氰化钾反应呈阳性，Borntrager’s反应呈红色，推测为羟基蒽醌类化合物，与大黄酚对照品共薄层色谱，在3 种不同的展开溶剂系统［石油醚⁃乙酸乙酯⁃甲酸（4 ∶1.5 ∶0.1）、正己烷⁃丙酮⁃甲酸（5 ∶1 ∶0.1）、氯仿⁃丙酮⁃甲酸（10 ∶1 ∶0.1）］ 中Rf值相同，二者Rf值及显色行为一致，与对照品混合后熔点不下降，故鉴定为大黄酚。

化合物3：橙红色针状结晶（丙酮），mp 254～256 ℃。三氯化 铁⁃铁氰化 钾反应 呈阳性，Borntrager’s 反应呈红色，推测为羟基蒽醌类化合物，与大黄素对照品共薄层色谱，在3 种不同的展开溶剂系统［石油醚⁃乙酸乙酯⁃甲酸（4 ∶1.5 ∶0.1）、正己烷⁃丙酮⁃甲酸（5 ∶1 ∶0.1）、氯仿⁃丙酮⁃甲酸（10 ∶1 ∶0.1）］ 中Rf值相同，二者Rf值及显色行为一致，与对照品混合后熔点不下降，故鉴定为大黄素。

化合物4：淡黄色针晶（石油醚⁃乙酸乙酯），mp 211～212 ℃。三氯化铁⁃铁氰化钾反应阳性，即有酚羟基存在；盐酸⁃镁粉反应呈阳性，α⁃萘酚⁃浓硫酸反应呈阴性，推测为黄酮苷元类化合物。ESI⁃MSm／z：297.0 ［M⁃H］－，分子式C17H14O5。1H⁃NMR（400 MHz，DMSO⁃d6）δ：12.95（1H，s，5⁃OH），7.96（2H，d，J＝8.8 Hz，H⁃2′，6′），6.93（2H，d，J＝8.8 Hz，H⁃3′，5′），6.75（1H，s，H⁃3），6.64（1H，d，J＝2.0 Hz，H⁃6），6.37（1H，d，J＝2.0 Hz，H⁃8），3.97（3H，s，7⁃OCH3），3.94（3H，s，4′⁃OCH3）；13C⁃NMR（100 MHz，DM⁃SO⁃d6）δ：163.4（C⁃2），103.3（C⁃3），182.4（C⁃4），162.6（C⁃5），98.0（C⁃6），164.0（C⁃7），92.6（C⁃8），157.7（C⁃9），104.6（C⁃10），123.5（C⁃1′），128.0（C⁃2′，6′），114.5（C⁃3′，5′），161.2（C⁃4′），56.0（4′⁃OCH3），55.6（7⁃OCH3）。以上数据与文献［5］ 报道基本一致，故鉴定为5⁃羟基⁃7，4′⁃二甲氧基黄酮。

化合物5：淡黄色针晶（石油醚⁃乙酸乙酯），mp 311～312 ℃。三氯化铁⁃铁氰化钾反应阳性，即有酚羟基存在；盐酸⁃镁粉反应呈阳性，α⁃萘酚⁃浓硫酸反应呈阴性，推测为黄酮苷元类化合物。ESI⁃MSm／z：313.0 ［M⁃H］－，分子式C17H14O6。1H⁃NMR（400 MHz，DMSO⁃d6）δ：12.61（1H，s，5⁃OH），8.74（1H，s，6⁃OH），8.08（2H，d，J＝8.5 Hz，H⁃2′，6′），7.12（2H，d，J＝8.5 Hz，H⁃3′，5′），6.96（1H，s，H⁃3），6.91（1H，s，H⁃8），3.91（3H，s，4′⁃OCH3），3.87（3H，s，7⁃OCH3）；13C⁃NMR（100 MHz，DMSO⁃d6）δ：163.3（C⁃2），103.3（C⁃3），182.2（C⁃4），149.9（C⁃5），130.0（C⁃6），154.6（C⁃7），91.5（C⁃8），146.4（C⁃9），105.2（C⁃10），123.1（C⁃1′），128.3（C⁃2′，6′），114.6（C⁃3′，5′），162.4（C⁃4′），56.5（4′⁃OCH3），55.7（7⁃OCH3）。以上数据与文献［6］ 报道基本一致，故鉴定为5，6⁃二羟基⁃7，4′⁃二甲氧基黄酮。

化合物6：淡黄色粉末（甲醇），mp 346～348 ℃。三氯化铁⁃铁氰化钾反应阳性，即有酚羟基存在；盐酸⁃镁粉反应呈阳性，α⁃萘酚⁃浓硫酸反应呈阴性，推测为 黄酮苷 元类化合物。ESI⁃MSm／z：269.0 ［M⁃H］－，分子式 C15H10O5。1H⁃NMR（400 MHz，DMSO⁃d6）δ：12.98（1H，s，5⁃OH），7.92（2H，d，J＝8.6 Hz，H⁃2′，6′），6.92（2H，d，J＝8.6 Hz，H⁃3′，5′），6.78（1H，s，H⁃3），6.48（1H，d，J＝2.0 Hz，H⁃8），6.19（1H，d，J＝2.0 Hz，H⁃6）；13C⁃NMR（100 MHz，DMSO⁃d6）δ：164.2（C⁃2），103.3（C⁃3），182.1（C⁃4），161.0（C⁃5），99.2（C⁃6），164.8（C⁃7），94.2（C⁃8），157.8（C⁃9），104.1（C⁃10），121.8（C⁃1′），128.9（C⁃2′，6′），116.6（C⁃3′，5′），161.4（C⁃4′）。以上数据与文献［7］ 报道基本一致，故鉴定为芹菜素。

化合物7：黄色粉末（甲醇），mp 328～330 ℃。三氯化铁⁃铁氰化钾反应阳性，即有酚羟基存在；盐酸⁃镁粉反应呈阳性，α⁃萘酚⁃浓硫酸反应呈阴性，推测为 黄酮苷 元类化合物。ESI⁃MSm／z：285.0 ［M⁃H］－，分子式C15H10O6。1H⁃NMR（400 MHz，DMSO⁃d6）δ：12.98（1H，s，5⁃OH），7.43（1H，d，J＝8.0，2.0 Hz，H⁃6′），7.40（1H，d，J＝2.0 Hz，H⁃2′），6.90（1H，d，J＝8.0 Hz，H⁃5′），6.68（1H，s，H⁃3），6.44（1H，d，J＝1.8 Hz，H⁃8），6.19（1H，d，J＝1.8 Hz，H⁃6）；13C⁃NMR（100 MHz，DMSO⁃d6）δ：164.0（C⁃2），103.1（C⁃3），181.7（C⁃4），161.4（C⁃5），99.2（C⁃6），164.2（C⁃7），94.1（C⁃8），157.5（C⁃9），104.1（C⁃10），119.3（C⁃1′），113.4（C⁃2′），145.6（C⁃3′），149.2（C⁃4′），116.1（C⁃5′），121.8（C⁃6′）。以上数据与文献［8⁃9］ 报道基本一致，故鉴定为木犀草素。

化合物8：浅黄色针状结晶（甲醇），mp 265～266 ℃。三氯化铁⁃铁氰化钾反应阳性，即有酚羟基存在；盐酸⁃镁粉反应呈阳性，α⁃萘酚⁃浓硫酸反应呈阴性，推测为黄酮苷元类化合物。ESI⁃MSm／z：287.0 ［M⁃H］－，分子式 C15H12O6。1H⁃NMR（400 MHz，DMSO⁃d6）δ：12.15（1H，s，5⁃OH），6.88（1H，s，H⁃2′），6.75（2H，brs，H⁃5′，6′），5.89（1H，d，J＝2.1 Hz，H⁃8），5.88（1H，d，J＝2.1 Hz，H⁃6），5.38（1H，dd，J＝12.6，3.0 Hz，H⁃2），3.19（1H，dd，J＝17.2，12.6 Hz，H⁃3α），2.68（1H，dd，J＝17.2，3.0 Hz，H⁃3β）；13C⁃NMR（100 MHz，DMSO⁃d6）δ：78.5（C⁃2），42.1（C⁃3），196.5（C⁃4），163.5（C⁃5），95.8（C⁃6），166.7（C⁃7），95.0（C⁃8），163.0（C⁃9），101.8（C⁃10），129.4（C⁃1′），114.5（C⁃2′），145.3（C⁃3′），146.8（C⁃4′），115.3（C⁃5′），118.0（C⁃6′）。以上数据与文献［9］ 报道基本一致，故鉴定为圣草酚。

化合物9：黄色粉末（甲醇），mp 242～243 ℃。三氯化铁⁃铁氰化钾反应阳性，即有酚羟基存在；盐酸⁃镁粉反应呈阳性，α⁃萘酚⁃浓硫酸反应呈阳性，推测为黄酮苷类化合物。ESI⁃MSm／z：461.0［M⁃H］－，分子式C21H18O12。1H⁃NMR（400 MHz，DMSO⁃d6）δ：12.98（1H，s，5⁃OH），7.44（1H，dd，J＝8.0，2.0 Hz，H⁃6′），7.42（1H，d，J＝2.0 Hz，H⁃2′），6.89（1H，d，J＝8.0 Hz，H5′），6.78（1H，d，J＝2.1 Hz，H⁃8），6.74（1H，s，H⁃3），6.43（1H，d，J＝2.1 Hz，H⁃6），5.10（1H，d，J＝7.0 Hz，H⁃1″）；13C⁃NMR（100 MHz，DMSO⁃d6）δ：164.5（C⁃2），103.1（C⁃3），181.8（C⁃4），161.0（C⁃5），99.5（C⁃6），162.8（C⁃7），94.5（C⁃8），157.1（C⁃9），105.3（C⁃10），119.1（C⁃1′），113.5（C⁃2′），145.9（C⁃3′），150.0（C⁃4′），116.1（C⁃5′），121.5（C⁃6′），99.7（C⁃1″），72.9（C2″），74.3（C⁃3″），71.9（C⁃4″），76.2（C⁃5″），170.8（C⁃6″）。以上数据与文献［10⁃11］ 报道基本一致，故鉴定为木犀草素⁃7⁃O⁃β⁃D⁃吡喃葡萄糖醛酸苷。

化合物10：黄色粉末（甲醇），mp 256～258 ℃。三氯化铁⁃铁氰化钾反应阳性，即有酚羟基存在；盐酸⁃镁粉反应呈阳性，α⁃萘酚⁃浓硫酸反应呈阳性，推测为黄酮苷类化合物。ESI⁃MSm／z：447.0［M⁃H］－，分子式C21H20O11。1H⁃NMR（400 MHz，DMSO⁃d6）δ：12.97（1H，s，5⁃OH），7.45（1H，dd，J＝8.1，2.0 Hz，H⁃6′），7.43（1H，d，J＝2.0 Hz，H⁃2′），6.90（1H，d，J＝8.1 Hz，H⁃5′），6.77（1H，d，J＝2.0 Hz，H⁃8），6.74（1H，s，H⁃3），6.45（1H，d，J＝2.0 Hz，H⁃6），5.09（1H，d，J＝7.0 Hz，H⁃1″）；13C⁃NMR（100 MHz，DMSO⁃d6）δ：164.4（C⁃2），103.3（C⁃3），181.6 C⁃4），161.0（C⁃5），99.6（C⁃6），163.0（C⁃7），93.9（C⁃8），157.5（C⁃9），105.5（C⁃10），119.2（C⁃1′），113.7（C⁃2′），145.8（C⁃3′），150.0（C⁃4′），116.0（C⁃5′），121.7（C⁃6′），100.1（C1″），73.1（C⁃2″），77.2（C⁃3″），69.9（C⁃4″），76.4（C5″），60.8（C⁃6″）。以上数据与文献［8］ 报道基本一致，故鉴定为木犀草素⁃7⁃O⁃β⁃D⁃葡萄糖苷。

化合物11：无色针状结晶（甲醇），mp 215～216 ℃。三氯化铁反应呈阳性，溴甲酚绿反应呈阳性，推测为酚酸类化合物。ESI⁃MSm／z：193.0［M⁃H］－，分子式C10H10O4。1H⁃NMR（400 MHz，DMSO⁃d6）δ：7.44（1H，d，J＝16.0 Hz，H⁃7），7.09（1H，dd，J＝8.4，2.0 Hz，H⁃6），7.07（1H，d，J＝2.0 Hz，H⁃2），6.94（1H，d，J＝8.4 Hz，H⁃5），6.24（1H，d，J＝16.0 Hz，H⁃8），3.82（3H，s，4⁃OCH3）；13C⁃NMR（100 MHz，DMSO⁃d6）δ：127.1（C⁃1），116.4（C⁃2），146.6（C⁃3），149.8（C⁃4），112.1（C⁃5），120.9（C⁃6），114.1（C⁃α ），144.0（C⁃β ），167.7（⁃COOH），55.6（⁃OCH3）。以上数据与文献 ［12⁃13］ 报道基本一致，故鉴定为异阿魏酸。

化合物12：无色针状结晶（甲醇），mp 240～242 ℃。三氯化铁反应呈阳性，溴甲酚绿反应呈阳性，推测为酚酸类化合物。ESI⁃MSm／z：169.0［M⁃H］－，分子式C7H6O5。1H⁃NMR（400 MHz，DM⁃SO⁃d6）δ：6.91（2H，s，H⁃2，6）；13C⁃NMR（100 MHz，DMSO⁃d6）δ：122.0（C⁃1），110.5（C⁃2，6），146.4（C⁃3，5 ），139.5（C⁃4 ），170.6（⁃COOH）。以上数据与文献［14］ 报道基本一致，故鉴定为没食子酸。

化合物13：无色针状结晶（甲醇），mp 198～200 ℃。三氯化铁反应呈阳性，溴甲酚绿反应呈阳性，推测为酚酸类化合物。ESI⁃MSm／z：153.0［M⁃H］－，分子式C7H6O4。1H⁃NMR（400 MHz，DM⁃SO⁃d6）δ：7.33（1H，d，J＝2.0 Hz，H⁃2），7.28（1H，d，J＝8.0，2.0 Hz，H⁃6），6.78（1H，d，J＝8.0 Hz，H⁃5）；13C⁃NMR（100 MHz，DMSO⁃d6）δ：121.8（C⁃1），116.6（C⁃2），145.0（C⁃3），150.1（C⁃4），115.2（C⁃5），122.0（C⁃6），167.4（⁃COOH）。以上数据与文献［15⁃16］ 报道基本一致，故鉴定为原儿茶酸。

4 讨论

目前为止，研究发现兰香草中主要含有萜类、甾醇类、黄酮类、生物碱、酚类、氨基酸、有机酸、鞣质等，其中尤以二萜类、黄酮类成分较为丰富［17⁃21］。本研究从兰香草乙酸乙酯部位中分离得到了13 个化合物，鉴定出1 个生物碱类、2 个蒽醌类、7 个黄酮类、3 个有机酸类化合物，其中，化合物1、4～5、8～9、11 首次从该植物中分离得到。分离得到的化合物大多都具有较好的抗炎活性，但要阐明兰香草药材的抗炎作用及其机理，仍需进一步的药理研究，以期本研究结果丰富兰香草的化学成分，为其药效活性评价及质量评价奠定基础。