1例猪流行性腹泻病毒变异株引起仔猪腹泻的诊断

韩竹平，王永茂

（贵州省绥阳县农业农村局，贵州绥阳 563301）

在我国生猪饲养行业中，容易引起仔猪腹泻的病毒性病原，是十分复杂多样的，其中包含了猪细小病毒、猪流行性腹泻病毒、猪德塔冠状病毒、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒以及猪圆环病毒等，这些流行性腹泻病毒感染仔猪后，所造成的病理变化以及临床症状都是十分相似的。同时，需要注意的是，使用传统的临床诊断方法是无法对这些变异性病毒进行确诊的，对于相关疾病的预防也不够及时。伴随着生物技术的迅速发展，猪场以及相关工作人员一定要加强对于猪流行性腹泻病毒变异株引起仔猪腹泻的防控，进而减少经济损失。

2020年10月初，某养殖场内的仔猪爆发腹泻疫情，临床症状表现为极度消瘦、持续性呕吐、腹泻。排便呈黄色，后期呈黑色，死亡率极高。依据仔猪表现出的临床特征，并对仔猪的小肠组织样品进行采集实验诊断后显示，该疫情的爆发是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）变异株感染所引起的，关于该疾病的诊断以及治疗过程笔者将分点来阐释。

1 发病情况及病情介绍

1.1 发病情况

某养殖场内存栏母猪50 头左右，在2020年10月初，部分栏舍仔猪出现了水样腹泻、呕吐、食欲差等临床症状，在当时，养殖户认为是细菌感染造成的相关疾病产生，因而使用了恩罗沙星这种抗菌药物进行了治疗，但是，起到的效果并不明显，且在10日龄内的仔猪死亡率达到90%以上[1]。且经过笔者的调查了解，发现在该养殖场内，其他发育阶段的猪群并未表现出相关的临床症状，这就说明在该养殖场内并不存在繁殖障碍性传染病，如猪繁殖与呼吸综合征或猪伪狂犬病等。

1.2 病情介绍

1.2.1 临床症状和病理变化

发病猪群中，保育猪及仔猪所占比例较大，在发病时表现出脱水、腹泻、畏寒以及消瘦等症状，在产床上仔猪的水样粪便以及呕吐物也较为常见。而相关工作人员通过对于濒临死亡或已经死亡的仔猪进行病理性解剖发现，仔猪出现了如肠内有未消化的凝乳块、肠壁变薄等明显的病理性变化，但是这些变化主要体现在肠道上，其他的脏器并没有明显临床症状的体现。通过对养殖场内猪群的临床症状、病理变化以及发病特点等进行观察可以初步判定，在该养殖场内部爆发的腹泻病可能由于传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、流行性腹泻病毒等导致的[2]。为了进一步确认养殖场内暴发疾病的真正原因，养殖场内的相关工作人员将腹泻仔猪送至当地某农业大学的动物医学实验室进行了病原性诊断。

1.2.2 实验室病原诊断

在该动物实验室内，将发病仔猪进行了无菌解剖，将发病仔猪的小肠内容物放入到无菌试管中，加入适量的PBS 灭菌溶液进行充分混合，在混合均匀后，进行反复3 次的冻融，然后进行4℃的高速离心（13 000 r/min）5 min，取上清液，依照试剂盒的说明进行DNA 以及RNA 的提取，在经过逆转录入后得到cDNA（互补脱氧核糖核酸）。最后再将RT-PCR（逆转录-聚合酶链反应）进行应用，对样品进行病原检测发现，检测结果为PEDV（猪流行性腹泻病毒）阳性，而关于PRoV（猪轮状病毒）以及TGEV（猪传染性胃肠炎病毒）的检测则呈现阴性。为了进一步确认养殖场内的PEDV（猪流行性腹泻病毒）病毒是否是变异毒株，实验室的工作人员挑选了1 个样品，将这个样品中的S1 基因高变区序列进行了测序和扩增，同时，把获得的序列进行了Blast（同源性分析）分析。分析结果显示，扩增后的PEDV（猪流行性腹泻病毒）毒株，它的S1 基因部分片段大小为1503 bp。Blast（同源性分析）分析显示，扩增后的PEDV（猪流行性腹泻病毒）毒株与GenBank 中收录的变异株，相似度达到97.2%到99.7%左右，而和PEDV CV777 疫苗株的同源性较低，仅有93%左右，这种结果的出现正说明了该养殖场内流行的PEDV（猪流行性腹泻病毒）毒株是变异株，养殖场内的工作人员一定要对该毒株的防控与治疗进行及时的重视，进而开展相关的技术研究工作。

2 治疗与防控

2.1 及时接种疫苗

经过Blast（同源性分析）分析可以得出，在该养殖场内部的仔猪腹泻是由于感染了PEDV（猪流行性腹泻病毒）变异株所引起的，要有针对性的采取紧急措施进行处理，进而将猪群的死亡率进行进一步降低，以减少和挽回养殖户的经济损失[3]。疫苗接种的迅速开展是十分重要的，在该养殖场内部给猪群接种的免疫腹泻疫苗为腹泻三联活疫苗，而PEDV（猪流行性腹泻病毒）疫苗株的来源是CV777毒株。但是，需要注意的是，当前该养殖场内部爆发的是PEDV（猪流行性腹泻病毒）变异株，这就说明CV777 疫苗株对于变异株的限制以及对于猪群的保护是十分有限的。而如果在这个时候，猪群继发其他类型的免疫抑制性疾病，就会使相关疫苗的接种效果较差，甚至会产生猪群在接种CV777 疫苗株后，仍然出现爆发PED （猪流行性腹泻）的现象。

因此，针对这种情况，明显采用传统的CV777疫苗株是不可行的，所以，养殖场内采用了由武汉科前生物股份有限公司研发生产，专门针对PEDV（猪流行性腹泻病毒）变异株的两种疫苗，即科腹净（猪传染性胃肠炎和流行性腹泻二联弱毒疫苗）以及科泻宁（猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻二联灭活疫苗）。这两种疫苗经过临床实验显示，对于PEDV（猪流行性腹泻病毒）变异株的防治有良好的效果，具体的免疫防控措施，要及时参考疫苗生产厂家的建议，以便于促进后续工作的进行。

2.2 落实防控措施

养殖场要将相应防控措施进行贯彻落实，要及时对已经无法挽回和救治的发病猪群进行扑杀，然后进行无害化处理。同时，要将健康猪群与发病猪群进行隔离处置，并且要及时进行免疫疫苗的注射。随后要对整个养殖场进行卫生与消杀处理，采用不同类型的消毒机进行消毒制剂的拌和，及时对养殖器具、猪舍地面墙面、运输车、垫料等定期地进行消杀工作的开展。此外还要注意及时对养殖场内所有的饮水与饲料进行病原检测，在确保没有PEDV（猪流行性腹泻病毒）感染后，再进行猪群的投饮和饲喂。在进行投饮和饲喂的过程中，可以在饮用水中放入适量的食盐或者多维，进而防治猪群因腹泻脱水而亡，也能够促进养殖场内猪群免疫力的进一步提升。而在饲料中进行适量阿莫西林类抗生素的拌入，也有助于防治继发细菌感染的产生。

该养殖场在将以上的防控治疗措施进行充分落实后，回访发现该养殖场内的PED （猪流行性腹泻）的现象明显出现了改善，猪群中仔猪的感染率、发病率以及死亡率均呈现大幅下降的趋势[4]。1 个月后，该养殖场的负责人表示在养殖场内，猪群出现腹泻、呕吐的情况明显变少，即便出现腹泻，一般也是由于细菌感染造成的，与PEDV（猪流行性腹泻病毒）并无关联。

3 结束语

养殖户在进行生猪养殖的过程中，仔猪其实是极易出现发热、腹泻等情况的，这些临床症状在产生时，如果养殖人员没有进行及时的重视、干预与治疗，疾病就会迅速蔓延至整个仔猪群中，进而造成仔猪死亡率的上升。而导致仔猪产生腹泻的原因是比较多的，如病毒感染、细菌感染等都会诱发此类症状。但是，大部分情况下，都是由于病原性感染所导致的，其中尤以病毒性感染最为常见，而其中能够导致仔猪腹泻的病毒多为PEDV（猪流行性腹泻病毒）的感染。仔猪腹泻在我国的养殖户中分布是较为广泛的，危害性也是极强的。我国在2010年将PEDV（猪流行性腹泻病毒）变异株从暴发猪流行性腹泻的养殖场中进行了分离，它的基因序列与传统的PEDV CV777 疫苗株存在着明显的不同，使得即使接种了疫苗，养殖场内部仍然会爆发流行性腹泻，十分不利于养殖行业的发展。因此，为有效防治猪流行性腹泻的产生，养殖场可以选择专门针对PEDV 变异株进行研发生产的疫苗进行免疫接种，以减少养殖场的损失。