特应性皮炎患儿血清半乳糖凝集素-10和特异性IgE的关系

张 力，汤建萍

特应性皮炎（atopic dermatitis，AD)也称为特应性湿疹，是一种常见的慢性和复发性炎症性皮肤病[1-4]。根据世界卫生组织全球疾病负担倡议的数据，据估计AD影响全球至少2.3亿人，是皮肤病中非致命疾病负担的主要原因[2,5]。AD通常在儿童时期发展，并且具有广泛的症状和体征，导致严重的功能障碍，限制了日常生活的能力和活动，并引起社会心理困扰[2,6]。此病病因与发病机制目前还不是很清楚。半乳糖凝集素-10（galectin-10）在哮喘，过敏性鼻炎和其他嗜酸粒细胞相关疾病的作用目前越来越受到关注。AD是常见的变态反应性疾病，但很少有人研究galectin-10在AD中的意义。本研究主要探讨galectin-10与AD及其与食物过敏之间的关系。

1 对象和方法

1.1 研究对象

患儿均来自2014年12月—2015年3月湖南省儿童医院门诊及住院的12岁以内AD患儿137例，年龄8 d～12.67岁，年龄均值为（6.29±0.18）岁，其中男81例，女56例。所有患儿均符合Hanifin-Rajka AD诊断标准。患儿及家长自愿参加研究并签署知情同意书。排除标准：10 d内系统使用过糖皮质激素或抗组胺类药物，有寄生虫感染史，有其他过敏性疾病和自身免疫性疾病等。

25例来自湖南省儿童医院2014年12月—2015年3月及112例来自长沙市中心医院2019年1月—2019年12月的12岁以内的健康体检儿童，年龄为8 d～12岁，平均年龄（7.45±0.16）岁，其中男80例，女57例。近期无感染、湿疹及变应性疾病家族史，无呼吸系统疾病及免疫性疾病等，未使用过糖皮质激素和免疫调节剂。

1.2 方法

1.2.1 临床资料收集 患儿就诊时接诊医师需进行仔细的体格检查，并详细记录患儿的症状和体征。患儿家长需认真填写问卷调查，包括基本情况、出生情况、喂养方式、伴随症状、个人史及家族过敏史、变态反应性疾病史。

1.2.2 标本采集方法 抽静脉血4 ml，其中1 ml检测外周血嗜酸粒细胞，另3 ml置于一次性真空无促凝剂采血管内，在37℃下凝血60 min，1 000 r/min离心机离心10 min分离血清，将血清分成4份，-20℃冻存。

1.2.3 AD病情评分 AD病情严重度分值标准参照欧洲AD特别工作组确定的湿疹面积及严重程度指数（EASI），观察其主要症状（包括瘙痒、睡眠、皮损面积、皮损严重程度），记录EASI评分。

1.2.4 分组 AD组根据牛奶或鸡蛋sIgE升高与否，且排除尘螨sIgE升高者，分为食物sIgE升高组（n=38），食物sIgE正常组（n=81）。AD组根据尘螨sIgE升高与否，且排除牛奶或鸡蛋sIgE升高者，分为尘螨sIgE升高组（n=17），尘螨sIgE正常组（n=82）。AD组根据不同年龄段分4组：＜1岁（n=55），1～3岁（n=33），3～7岁（n=35），＞7岁（n=14）。

1.2.5 检测方法 ①血清sIgE检测及结果判定：检测试剂为德国Laboratorien GmbH生产FOOKEsIgE（免疫捕获法）试剂盒。参考sIgE抗体检测试剂盒说明书，通过Exl800酶标分析仪于450 nm波长处读取吸光度（A）值，按照标准曲线读取记录样本中血清sIgE抗体的浓度并进行分级。血清sIgE检测结果的判断见表1。②galectin-10检测及结果判定：检测试剂为美国Raybiotech生产人galectin-10酶联免疫分析试剂盒，参考人galectin-10试剂盒说明书，在Exl800酶标分析仪建立标准曲线，读数后根据样品的A值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。③总IgE检测及结果判定：检测试剂为美国Biocheck公司生产的IgE检测试剂盒（酶联免疫法），参考IgE试剂盒说明书，在Exl800酶标分析仪建立标准曲线，读数后根据样品的A值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

表1 血清sIgE浓度分级标准

1.3 统计学方法

采用SPSS18.0软件包对数据进行分析。计数资料用率、构成比描述，计量资料以均数±标准差（±s）表示描述，组间比较方差不齐性采用多个独立样本的秩和检验或行×列表卡方检验，组间两两比较采用两个独立样本的秩和检验或四个表卡方检验。计量资料之间的相关性采用Spearman秩相关进行相关性分析，P＜0.05表示有统计学意义。

2 结果

2.1 AD患儿与健康体检儿童血清galectin-10、外周血嗜酸粒细胞和总IgE的水平

AD组（137例）血清galectin-10、总IgE、外周血嗜酸粒细胞明显高于健康对照组（137例），差异有统计学意义（P＜0.001，P＜0.001，P＜0.05），（表2）。

表2 AD患儿与健康体检儿童血清 galectin-10、总IgE和外周血嗜酸粒细胞水平比较 （¯x ±s）

2.2 通过ROC曲线分析判断血清galectin-10升高的标准

判断血清galectin-10升高可以选择灵敏度与特异度之和的最大截点对应的界值作为判断标准。采用SPSS18.0进行ROC曲线分析，结果显示血清galectin-10 ROC曲线下的面积为0.778，标准误为0.038，其95%的近似参考置信区间为（0.702，0.853）。按照《医学统计学》（3版）教材上给出的判断准则，其判断血清galectin-10升高的正确度为中等水平。从ROC曲线分析可以得出当血清galectin-10的浓度值＞10 pg/ml时，有100%机会为AD患儿，当血清galectin-10的浓度值＜3 pg/ml时，仅有10%的机会为AD患儿，因此判断血清galectin-10升高的标准为4～10 pg/ml（图1）。

图1 血清galectin-10的ROC曲线图

采用SPSS18.0对数据进行ROC曲线分析，在galectin-10 4～10 pg/ml，综合灵敏度和特异度，选择两者之和最大的截点作为界值，即血清galectin-10的结果为10 pg/ml，当血清galectin-10的值≥10 pg/ml被判断为血清galectin-10升高，血清galectin-10＜10 pg/ml被判断为血清galectin-10正常（表3）。

表3 分析判断血清galectin-10升高的标准

2.3 AD食物sIgE升高组与AD食物sIgE正常组外周血嗜酸粒细胞和血清galectin-10水平

AD食 物sIgE升 高 组 血 清galectin-10阳 性 率（79%）高 于 食 物sIgE正 常 组（58%）（χ2=4.958，P=0.026，P＜0.05）。AD食物sIgE升高组外周血嗜酸粒细胞计数升高的阳性率（68%）高于食物sIgE正常组（47%）（χ2=4.813，P=0.028，P＜0.05）（表4）。

表4 AD食物sIgE升高组和正常组患儿血清galectin-10水平和外周血嗜酸粒细胞计数比较 [例（%）]

2.4 AD尘螨sIgE升高组与AD尘螨sIgE正常组外周血嗜酸粒细胞和血清galectin-10水平

AD尘螨sIgE升高组血清galectin-10阳性率（41%）与正常组（50%）间无差异（χ2=0.447，P=0.504，P＞0.05）。AD尘螨sIgE升高组外周血嗜酸性粒细胞阳性率（41%）和正常组（44%）无差异（χ2=0.043，P＞0.05）（表5）。

表5 AD尘螨sIgE升高组和正常组患儿Galectin-10水平、外周血嗜酸粒细胞计数比较 [例(%)]

2.5 不同年龄组AD患儿血清galectin-10水平

血清galectin-10的阳性率随着患儿年龄增长逐渐下降（χ2=16.703，P=0.001，P＜0.05），见表6。

表6 不同年龄组AD儿童血清galectin-10水平 [例(%)]

2.6 AD患儿血清galectin-10水平、外周血嗜酸粒细胞计数与EASI评分的关系。

本研究参照欧洲AD特别工作组确定的EASI系统对137例AD患儿进行疾病活动评分，评分均值为（16.785±7.523）分（1.40～30.80分）。因为本研究数据方差不齐且非正态分布，故采用SPSS18.0中的Spearman秩相关进行AD患儿血清galectin-10、外周血嗜酸粒细胞与EASI的相关性分析。结果血清galectin-10水平与EASI评分两者之间呈正相关（r=0.216，P＜0.05），随着EASI评分的增高，血清galectin-10水平相应升高。同时将AD外周血嗜酸粒细胞计数与EASI评分进行相关性分析，也发现两组之间呈正相关（r=0.385，P＜0.05），随着EASI评分的增高，外周血嗜酸粒细胞计数相应升高。

2.7 AD患儿血清galectin-10水平与外周血嗜酸粒细胞计数、鸡蛋和牛奶sIgE的关系。

因为本研究数据方差不齐且非正态分布，故采用SPSS18.0中的Spearman秩相关对galectin-10水平，鸡蛋、牛奶sIgE以及外周血嗜酸粒细胞计数进行相关性分析。AD患儿血清galectin-10与外周血嗜酸粒细胞两者之间呈正相关（r=0.207，P＜0.05），随着外周血嗜酸粒细胞计数的升高，血清galectin-10水平的值相应升高。AD患儿血清galectin-10水平与鸡蛋sIgE两者之间呈正相关（r=0.222，P＜0.05），随着鸡蛋sIgE值的升高，血清galectin-10水平相应升高。AD患儿血清galectin-10水平与牛奶sIgE两者之间呈正相关（r=0.218，P＜0.05），随着牛奶sIgE值的升高，血清galectin-10水平相应升高。

3 讨论

galectin-10作为嗜酸粒细胞疾病的生物标志物，甚至是潜在的药物靶标[7]越来越受到高度重视。例如嗜酸性食管炎[8]；AD[9]；过敏性鼻炎[10]；哮喘[11]。

本研究发现血清galectin-10 AD组为（29.736±18.385）pg/ml，明显高于健康对照组（8.057±3.328 pg/ml），P＜0.001，与EASI评 分 之 间 呈 正 相 关（r=0.216，P＜0.05），随着EASI评分的增高，血清galectin-10水平相应升高。这与Noh[9]的研究是一致的。后者的研究表明，与健康对照组相比AD患儿的galectin-10血清水平升高，并且其水平与AD严重程度呈正相关，这一发现提供了galectin-10作为疾病生物标志物的可能性。另Noh的研究表示在免疫组化染色中，galectin-10在AD皮肤中高表达，而在正常皮肤中几乎检测不到，有趣的是在存在galectin-10的真皮区域附近也观察到了明显的棘皮症，而表皮棘皮病是慢性AD病变的标志[9]。Rossana等[12]在过敏患者的活检中观察到的galectin-10，进一步证实galectin-10与AD有关。血清galectin-10可作为AD疾病活动性的参考指标之一。

AD经常与食物过敏有关。本研究结果示AD组患儿血清总IgE明显高于健康对照组，且与AD严重程度呈正相关。正如Kiiski 等[13]报道总血清 IgE 水平和特异性 IgE与AD严重程度显着相关；Somani[14]报道 88%的AD患者血清 IgE 水平升高；薛如君等[15]报道AD 血清 IgE 水平和嗜酸粒细胞计数有不同程度的升高，血清 IgE 对评 估 AD 的严重程度及治疗有重要的价值，但不是诊断 AD 所必需。食物过敏涉及 IgE 和非 IgE 介导途径的激活，几种细胞类型参与其中，包括嗜酸粒细胞，CD4+T淋巴细胞和肥大细胞有助于过敏反应，特别是嗜酸粒细胞的数量明显增加，嗜酸粒细胞聚积在过敏反应的病灶中，并且其颗粒含有促发过敏反应的广谱促炎递质[16]。一项韩国的研究显示，外周血嗜酸粒细胞的增高可以作为一项预测指标，评估由食物引起的AD；研究表明牛奶引起的AD患儿避免食用牛奶后，嗜酸粒细胞明显下降[17]。

本研究外周血嗜酸粒细胞AD组高于健康对照组，与AD病情活动有关，且与食物过敏有关，这些均进一步证实嗜酸粒细胞参与了食物过敏。galectin-10是来自健康供体的嗜酸粒细胞中最丰富的蛋白质之一[18]，免疫荧光染色显示 galectin-10 集中在嗜酸粒细胞外围细胞质区域，距质膜宽 250 nm[12]。本研究提示嗜酸粒细胞计数与galectin-10水平呈正相关，那么galectin-10与食物过敏是否有关联？数据分析显示AD组牛奶、鸡蛋sIgE与galectin-10水平呈正相关。AD食物sIgE升高组galectin-10阳性率高于正常组，AD尘螨sIgE升高、正常AD组galectin-10阳性率无明显差异，可能是因为：①本研究所示galectin-10阳性率随着年龄增长逐渐下降，这与食物性过敏原阳性率逐渐降低类似，但与吸入性过敏原阳性率逐渐增高相反[19]。②2018年广州地区的一项研究提示户尘螨及粉尘螨阳性率高峰出现在7～16岁组[20]，而本研究主要研究对象为7岁以内患儿，尘螨sIgE阳性例数不多。因此，本研究提示AD患儿血清galectin-10可能与食物过敏有关。

综上所述，血清galectin-10与外周血嗜酸粒细胞一样，与AD的发病有关，与AD的疾病活动评分呈正相关，提示可作为AD疾病活动性的参考指标之一。同时发现血清galectin-10与食物sIgE升高有关，而与尘螨sIgE升高无关。血清galectin-10随着年龄增长阳性率逐渐下降，与食物sIgE阳性率随着年龄增长而下降一致，提示血清galectin-10可能与AD 患者食物过敏有关。但galectin-10不仅在嗜酸粒细胞上表达，并在嗜碱粒细胞、CD4+CD25+Treg细胞内也有表达，galectin-10增加在AD发病中发挥作用，但关于galectin-10来源需要更进一步的研究。