284例珠蛋白生成障碍性贫血产前基因诊断结果分析

胡新年，欧阳慧，刘冬霞，许伟华，罗伟平，龙 辉，黄美琼

清远市妇幼保健院优生与遗传实验诊断中心，广东清远 511500

珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)是一种珠蛋白基因突变引起机体内的珠蛋白链的合成不足或缺失而导致的一种慢性溶血性贫血[1]。目前实验室主要检测地贫为α地贫和β地贫，α地贫一般分为静止型、标准型、中间型和重型4种类型，β地贫主要分为轻型、中间型和重型3种类型[2]。重型α地贫患儿地贫患儿由于染色体上4个α-基因缺失，体内合成的γ链没有与α链结合形成γ四聚体，一般在妊娠后期会造成婴儿宫内死亡流产或者出生后几小时内死亡，同时也会增加孕妇患癫痫、妊娠高血压综合征、产后出血等并发症的风险[3-4]。重型β地贫患儿一般在出生6个月以后才表现出贫血的临床症状，需要依赖输血来进行治疗，一般存活至10岁[5-8]。已有研究证明清远地区地贫基因的携带率约为20.9%，属于地贫高发地带，因此，在清远地区开展地贫产前诊断具有重要意义[9-10]。本文对本院开展的284例地贫基因产前诊断结果进行回顾性分析。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2016年1月至2019年10月来清远市妇幼保健院咨询并进行地贫基因产前诊断的孕妇284例作为研究对象，孕妇孕周为16～24周，每位抽取约20 mL羊水分装为3管进行检测，本研究符合本院医学伦理委员会相关标准，并获得该伦理委员会批准，受检者均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1基因提取 本实验室采用北京天根生物科技有限公司生产的羊水提取试剂盒提取基因，每次实验为双人平行实验，每次试验前均用分光光度计对每次提取的DNA浓度和纯度进行检测，以保证实验的准确性。

1.2.2基因检测 缺失型α地贫的产前诊断采用跨越断裂点PCR技术，非缺失型α地贫和β地贫的产前诊断采用反向斑点杂交技术进行检测，所有的地贫基因检测试剂盒均来自于深圳亚能生物科技有限公司，检测的α-缺失型为--(SEA)/αα，-α(3.7)/αα，-α(4.2)/αα，α非缺失型常见的包括αCSα/αα，αQSα/αα，αWSα/αα。β地贫检测17种分别为-28、-29、-30、-32、CD14-15、CD17、CD26(βE)、CD27-28、CD31、 CD41-42、CD43、CD71-72、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、IVS-Ⅱ-654、CAP+1、initiation condon。每次实验均有阳性、阴性和空白对照，对于罕见的或者超出检测范围的送至广东省妇幼保健院检测。

1.3随访 产前基因诊断完成6～8 个月后，实验室检测的284例样本均由产前诊断科医生进行随访，对于重型地贫患儿的后续处理均有追踪，对于非重型的患儿均有新生儿血红蛋白电泳筛查和回访，对于有地贫基因检测的新生儿则进行基因统计，已验证实验诊断的准确性。

2 结 果

2.1284例地贫基因产前诊断结果分析 在检测的284例样本中，父母为同型α地贫共215例，其中检出重型α地贫36例，中间型α地贫11例，轻型α地贫111例，正常基因型αα/αα 57例。父母为同型β地贫共52例，其中检出中重型β地贫17例，轻型β地贫20例，正常基因型αα/αα 15例。父母一方为一种地贫基因携带者另一方为α复合β地贫基因或者双方均为α复合β地贫基因的样本17例，其中检出重型α地贫1例，中重型β地贫1例，中间型α地贫复合轻型β地贫1例，轻型α地贫复合轻型β地贫14例。

2.2215例α地贫基因检测结果分析 在215例羊水检测中检出重型α地贫36例，占16.74%，中间型α地贫11例，占5.12%，其中基因型--(SEA)/-α(3.7) 8例，--(SEA)/α(WS)α、--(SEA)/α(QS)α和--(SEA)/α(CS)α各有1例，轻型α地贫111例，占51.63%，基因型--(SEA)/αα 97例，α(WS)α/αα 3例，-α(4.2)/αα 2例，-α(3.7)/αα 8例，正常基因型aa/aa 57例，占26.51%。

2.352例β地贫基因检测产前诊断结果分析 52例β地贫基因检测中检出中重型β地贫17例，基因型分别为 βCD41-42/βCD17 2例、βCD41-42/βCD41-42 4例、βCD41-42/β IVS-II-654 5例、β-28/βCD17 1例、β-28/β IVS-II-654 2例、β IVS-II-654/βCD17 1例、β IVS-II-654/βCD26 1例、β IVS-II-654/β-29 1例，总占比32.08%。轻型β地贫20例，基因型分别为βCD17/βN 2例、β-28/βN 1例、β-29/βN 1例、β IVS-II-654/βN 1例、βCD26/βN 2例、β IVS-I-1位点突变1例、βCD41-42/βN 10例，总占比35.90%。正常基因型βN/βN 15例，占28.30%。

2.417例复合型地贫基因检测结果分析 17例复合型地贫中，检出重型α地贫[--(SEA)/--(SEA),βCD41-42/βN ]1例，占6.67%，重型β地贫[βCD41-42/β-28,-α(3.7)/αα]1例，占6.67%，中间型α地贫复合轻型β地贫[--(SEA)/α(3.7),βCD41-42/βN]1例，占6.67%，轻型α地贫复合轻型β地贫14例，基因型分别为βCD41-42//βN,--(SEA)/αα 4例、--(SEA)/αα,βIVS-II-654/βN 1例、--(SEA)/αα,βCD43/βN 2例、--(SEA)/αα,βCD71-72/βN 1例、α(WS)α/αα,β IVS-II-654/βN 1例、-α(3.7)/αα,βCD41-42/βN 1例、-α(3.7)/αα,βCD17/βN 1例、-α(3.7)/αα,β-28/βN 1例、-α(4.2)/αα,βCD41-42/βN 1例、-α(4.2)/αα,β IVS-II-654/βN 1例，总占比82.35%。

2.5随访结果 产前基因诊断完成6～8个月后，电话随访共67例严重类型地贫患儿(37例巴氏水肿胎、11例中间型α地贫、1例中间型α地贫复合轻型β地贫和18例严重类型β地贫患儿)和3例轻型α地贫伴18三体综合征胎儿，其中37例巴氏水肿胎、9例中间型α地贫和18例严重类型β地贫患儿和3例轻型α地贫伴18三体综合征胎儿均在知情同意和自愿选择的原则下接受了终止妊娠的处理，有2例中间型α地贫和1例中间型α地贫复合轻型β地贫的孕妇未进行终止妊娠，140例其他基因型的地贫患儿出生后均进行新生儿血红蛋白电泳筛查和地贫基因检测，检测结果与产前诊断结果完全吻合，有5个患儿失访，无人接听电话。

3 讨 论

地贫是一种遗传性的溶血性贫血，在中国南方地区广泛分布[11-12]。清远位于粤北地区，地域跨度广，本地居民多，地贫基因携带率高，因此清远地区地贫防控具有重要意义。

清远地区α地贫携带率高，其中又以东南亚缺失型[基因型为--(SEA)/αα]居多，东南亚缺失型表示患者缺失两条α蛋白基因链，当两个同为东南亚缺失型基因携带者结合有25%的概率生育重型α地贫患儿，本研究检测到36例重型α地贫患儿，经调查所有孕妇均终止妊娠。当父母一方为东南亚缺失型和另一方静止型基因携带者时，25%的概率生育中间型α地贫患儿，本研究共检测到11例中间型α地贫，患者的表型存在个体差异性，本实验室在地贫基因检测中多次检测到成年的中间型α地贫患者，因此中间型α地贫患儿的去留取决于父母的要求。

β地贫是由于β珠蛋白链突变引起的，与α地贫基因分型不同，β地贫基因突变按照严重程度可以分为β+和β0两种，当基因型为β+/β+时，为中间型β地贫，基因型为β+/β0时，则根据个人表型可以表现出不同表型，可能为中间型β地贫或者重型β地贫患儿，基因型为β0/β0时，则为重型β地贫患儿，因此产前诊断科医生和实验人员在分析β地贫基因诊断结果时需要特别谨慎。父母双方均为β地贫基因携带者时，有25%的概率生育中重型β地贫患儿，本研究中52例β地贫基因检测中检出中重型β地贫17例，占32.08%。

α地贫复合β地贫的患者，临床症状较单种轻，主要原因是为复合型地贫患者，其α和β-珠蛋白基因在体内同时存在缺陷，从而导致α珠蛋白链和β珠蛋白链合成同时减少，致使α链与β链的相对不平衡减轻[13-14]。本研究中检测到17例复合型地贫基因，其中2例为重型地贫。

地贫目前没有较好的治疗方法，只能进行预防。当父母双方均为同型地贫基因携带者时，可以通过产前咨询和诊断，预防重型地贫患儿的出生。清远地区地贫基因携带率高，地域广阔，因此需要加大地贫的预防宣传，提高民众对该病的知晓率，对指导优生优育具有重要意义。