miR-6750-5p 与氯氮平所致精神分裂症患者粒缺的关系

佟靓，邓燕，王延军，吴昊，周利国，鲍天昊)

（云南省精神病医院，云南 昆明 650000）

0 引言

精神分裂症[1]属于重性精神障碍，发病机制复杂，病因未明。主要临床表现是认知、思维、情感、行为等多方面出现显著的精神活动异常，并导致社会功能受损，明显的功能损害和慢性化的病程对医疗资源的消耗、患者本人及家属的劳动生产力损失非常巨大。如未获得及时治疗，疾病症状给患者带来极大痛苦，患者日常学习、工作、生活能力受损，学生因学习能力下降而退学、休学，成人因工作能力受损而失去工作，对家人不知关心照顾，不能承担家庭的责任。有的发展到精神衰退状态，造成精神残疾。有时受幻觉、妄想、逻辑障碍、情绪障碍等精神症状的影响，患者可能出现伤害自己和他人的行为。既往曾有研究[2-3]提出，精神障碍病人出现暴力行为的概率明显高于正常人群，尤其是精神分裂症患者，其行为具有很大的不可预测性和破坏性[4]，对其家庭和社会均造成沉重负担。

氯氮平[5]是第二代抗精神病药物的代表药物,临床治疗效果显著，尤其是难治性精神分裂症，更是有显著的疗效。而且其价格低廉，患者及其家庭经济负担轻，因此服药依从性相对较好。但因其不良反应多，尤其对粒细胞的影响，甚至出现致命的粒细胞缺乏症，使其在临床应用中受到很大的限制[6]。既往也有研究表明[7]，使用氯氮平治疗的患者，导致粒细胞缺乏危险性是其他抗精神病药物的8.8 倍。严重的限制了氯氮平的广泛应用。我们曾在前期进行一些数据分析，择取2008年至2018 年期间我院收治的463 例精神分裂症患者作为研究对象。在这463 例患者中，发生白细胞计数减少的患者有37 例，其白细胞计数减少的发生率为7.99%。发生中性粒细胞减少的患者有3 例，其中性粒细胞减少的发生率为0.65%。这463 例患者均未发生中性粒细胞缺乏症。

如果在用药之前就可以预估使用氯氮平是否会出现粒缺，是否可以耐受该药物，对于提高临床用药安全性及减轻患者经济负担，都有很大的临床意义，因此我们提出本次研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取正常人群3 例作为对照组。查询2008 年-2018 年我院曾住院病人病例，明确诊断精神分裂症且单一使用氯氮平治疗者6 人，其中导致粒细胞缺乏者3 例，未见粒缺患者3例。入组患者均符合ICD-10 精神分裂症诊断标准，性别不限；中位年龄37.6 岁，病程5-20 年，平均药物剂量100-500mg/d，平均(235±186)mg/d。排除标准：（1）血液系统疾病及重大躯体疾病史；（2）使用其他影响粒细胞药物；（3）合并其他抗精神病药物治疗；（4）未达药物治疗疗程。

1.2 方法

入组9 人，分别选取外周血冻存。并由上海泉脉生物科技有限公司分离血浆行microRNAs 芯片筛查。样品9 个，各样本的有效数据量（clean reads）分布在10.54～19.07M。基因组比对率分布在80.29～88.81%，已知miRNA 比对率分布在20.05～40.34%，所有样本比对上已知miRNA 的总数为676，所有样本新预测miRNA 的总数为386，共设有3 个差异比 较 组：Side_effect-vs-control、Side_effect-vs-test、test-vscontrol，其检测到的差异miRNA 数量分别为：24、25、23。其中miR-6750-5p 有明显差异性。

将和指定物种基因组进行比对，并统计比对率。由于SmallRNA 切胶范围在 18-35 nt，miRNA 一般情况下长度集中在 21-25 nt，piRNA 长度主要集中在 30 nt 左右，tiRNA 以及TRFs 长度主要集中在 30-35 nt。SmallRNA 测序 reads 中包含：miRNA、piRNA、tRNA、rRNA，snRNA 等。所以得到 clean reads 后，会使用 bowtie 或者 blast 软件首先和这些 SmallRNA 的数据库比对，进行 SmallRNA 的分类注释。通过sRNA 的注释后，未注释上的 reads 用于新的 miRNA 预测。标准流程中会对已知 miRNA和预测 miRNA 进行差异筛选，并基于筛选出来的差异 miRNA继续后续的靶基因预测以及靶基因的 KEGG 和 GO 富集分析。

图1 生物信息分析流程图

图2 芯片筛查显示不同组之间的miRNAs 表达各有不同

图3 芯片筛查及QPCR 检测显示miR-6750-5p 在实验组明显降低 ＊ P＜0.05 n=3

2 结果

在9 例样本中，miR-6750-5p 在粒缺组与未见粒缺组及正常人群中存在差异。因此氯氮平导致粒缺的机制可能与调控miR-6750-5p 有关。

3 讨论

精神分裂症是一种很复杂的遗传性疾病，病因尚未完全阐明，是严重的多基因变异精神疾病[8]，由于人类大脑结构和功能活动的高复杂性，人们对精神分裂症的本质认识尚存在很大的争议，目前精神分裂症的确切病因和影响因素还不十分明确，其发病机制还不清楚。既往很多研究提出，miRNA在神经系统的形成中发挥重大作用，对于大脑的发育具有重要意义[9-11]，精神分裂症病因机制可能就是与这些有关[12,13]。也有研究表明，精神分裂症患者的大脑前额叶和皮层miRNA表达谱均有所变化，但大多数miRNA 的功能还未被发现[14]。

氯氮平是第二代抗精神病药物的代表药物，临床应用范围广泛，对于难治性精神分裂症有很好的临床效果，同时价格低廉，但确却不能作为首选药物。而制约这个药物广泛应用的因素，就是其不良反应多，临床经常会导致嗜睡、流延、便秘、血糖异常增高，体重增加、心率加快等，甚至出现粒细胞缺乏这样的致命性副作用。而多数患者在使用氯氮平过程中出现粒细胞减少甚至粒细胞缺乏症时，早期并没有明显的临床表现，因此无法通过其临床表现来预测，只能定期的反复多次的进血常规检查，与其他抗精神病药物相比，无形中增加了患者及家属的经济负担，导致患者的服药依从性下降。而氯氮平导致粒细胞减少等副作用，严重的还可能出现死亡的风险，导致安全性下降。

miRNA 是一种长度约21-24nt 的内源性非编码小RNA[15]，既往多项研究表明疾病中miRNA 的表达均具有特异性，并且同一个miRNA 可以有多种表达，可以调控不同的生理过程，而不同的miRNA 又可以同时调控同一种疾病的发生与发展[16]，因此miRNA 在疾病中具有重要的调控作用以及研究价值。既往也有研究发现[17]，通过作用于目标mRNA表达，精神分裂症患者体内的miRNA 表达存在差异性,部分miRNA 可能与精神分裂症的发病机制存在关联性。但精神分裂症患者体内差异表达的miRNA 数量众多，在精神分裂症病因机制中的具体作用机制仍然不明确,有待进一步深入研究。

本次实验通过筛选我院既往住院病人的研究发现，miR-6750-5p 在粒缺组与未见粒缺组及正常人群中存在差异，表明miR-6750-5p 在氯氮平导致粒缺过程中有可能发挥极大的作用。但是本次研究制约因素较多，样本量较少，而且既往miR-6750-5p 在精神分裂症中的研究相对较少，机制还不明确。如果从基因调控的角度研究精神分裂症临床用药，可以提前预估可能发生的药物风险，对于提高临床安全性有重大意义。miRNA 调控基因表达的机制非常复杂，miR-6750-5p调控的机制也不明确，因此还有待进一步研究。同时在整个作用过程中，其他MicroRNA 是如何发挥作用，如何相互影响，这个也是我们需要进一步努力研究的方向。

未来研究中，我们需要进一步扩大样本量，增加研究基因种类，开展大样本、高质量的研究，探讨不同基因、不同位点的多态性与粒细胞减少的相关性。同时可以结合遗传学研究方法，完善实验设计，制定更严格的纳入标准，严格控制其他影响因素，增加各研究之间的可比性，从而进一步明确氯氮平导致粒细胞减少的作用机制，为临床提供更安全的治疗方案。