地中海贫血507 例的基因突变类型分析

潘小莉，鲍幼维，潘澍青

地中海贫血（简称地贫）也称海洋性贫血或珠蛋白生成障碍性贫血，是一种由常染色体隐性单基因控制的珠蛋白生成障碍性遗传性疾病[1]。根据所缺陷的珠蛋白肽链类型分类，主要包括-地贫和-地贫；另有一些少见类型，如-地贫-地贫-地贫及遗传性持续性胎儿血红蛋白增高症（HPFH）等[2]。地贫的发病率有明显的地域和种族差异，宁波虽不是地贫高发区，但地处东南沿海发达地区，人口流动性大，而本地区详细的地贫流行病学资料较少；因此有必要对本地区人群的地贫基因突变类型进行分析。本研究对892 例疑似患者（未经血液学筛查）进行地贫基因检测，分析统计其基因类型及构成情况，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019 年1 月至2020 年5 月在宁波市妇女儿童医院就诊的行地贫基因检测儿童、孕妇及其配偶等地贫疑似患者892 例，其中男381例，女511 例；年龄0 ～49 岁。

1.2 试剂与仪器 采用厦门致善生物科技股份有限公司提供的Lab-Aid824s核酸提取仪，上海宏石医疗科技有限公司提供的SLAN-96S 全自动医用PCR分析仪；DNA提取试剂盒和地中海贫血基因检测试剂盒（荧光PCR熔解曲线法）均有厦门致善生物科技股份有限公司提供。

1.3 地贫基因诊断 采集末梢血滴于专用滤纸片上，血斑直径不小于8 mm，自然晾干后，进行DNA 提取，提取操作严格按照试剂说明书进行。采用荧光PCR熔解曲线分析技术进行热点基因检测，检测中国人常见的3 种缺失型-地贫（－－SEA/、－4.2/、－3.7/）和3种非缺失型-地贫基因点突变（CSQS、WS），21 种-地贫基因点突变IVS-Ⅱ-654（C ＞T）、－28（A ＞G）、－29（A＞G）、－30（T ＞C）、－31（A ＞C）、－32（C ＞A）、CD14-15（+G）、CD15-16（+G）、CD 17（A ＞T）、IVS-Ⅰ-5（G ＞C）、CD 30（A ＞G）、IVS-Ⅰ-1（G ＞T）、CD 26（G ＞ A）、CD27-28（+C）、CD41-42（－TTCT）、CD43（G ＞T）、CD37（G ＞A）、CD71-72（+A）、IVS-Ⅱ-5（G＞C）、－73（A＞T）、－90（C＞T）。

2 结果

2.1 地贫基因检测结果 507 例确诊为地贫基因携带者，检出率为 56.8%（507/892）。其中男性检出率为56.2%（214/381）, 女性检出率为57.3%（293/511）。211 例确诊为-地贫基因携带者，阳性率为41.6%（211/507）；291 例确诊为-地贫基因携带者，阳性率为57.4%（291/507）；5 例确诊为-复合型地贫基因携带者，阳性率为1.0%（5/507）。

表1 211 例-地贫基因型分类及构成情况

表2 291 例-地贫基因型分类及构成情况

表2 291 例-地贫基因型分类及构成情况

基因型 例数构成比（%）IVS-II-654（C ＞T） 113 38.9 CD41-42（－TTCT） 88 30.3 CD17（A ＞T） 64 22.0 CD71-72（+A） 7 2.4 CD26（G ＞A） 6 2.1 CD27-28（+C） 3 1.0 CDs27-28（+C） 3 1.0 CD43（G ＞T） 2 0.7 IVS-I-5（G ＞C） 2 0.7－28（A ＞G） 1 0.3 CDs8-9（+G） 1 0.3 IVS-II-654（C＞T）；CD26（G＞A） 1 0.3合计 291 100.0

表3 5 例-复合地贫基因型分类及构成比

表3 5 例-复合地贫基因型分类及构成比

基因型 例数构成比（%）－3.7/ ；IVS-II-654（C ＞T） 2 40.0－3.7/ ；CD41-42（－TTCT） 1 20.0－4.2/ ；CD41-42（－TTCT） 1 20.0－－SEA/ ；CD17(A ＞T） 1 20.0

3 讨论

地贫的发病机制主要是由于珠蛋白基因缺陷或调控异常使珠蛋白肽链合成减少或不能合成，呈进行性贫血[1]。地贫根据临床表现分为静止型、轻型、中间型和重型。由于机体代偿能力不同或修饰基因的调控不同，临床表现呈多样性。重型地贫多在围产期死亡，或出生后需靠终生输血或干细胞移植。中间型地贫常引起持续性慢性溶血性贫血，易引发骨质疏松等并发症和继发性器官的损害[3-4]。轻型和静止型地贫一般无临床症状或出现轻度贫血。地贫发病率有明显的地域和种族差异[5]。我国以广西、广东等地发病率较高，总阳性率最高达24%[6-8]。宁波虽不是地贫高发区，但本地区人口结构较复杂；因此有必要分析地贫基因突变类型，为今后的宁波地区人群地贫防控计划奠定基础。

本研究显示总体地贫基因携带率为56.8%，共检出24 种基因型，可见宁波地区地贫基因携带率较高，基因类型较为复杂，应引起重视。同时发现-地贫基因携带率为41.6%-地贫基因携带率为57.4%。与葛群芳等[9]报道稍有出入，可能与入选人群的民族、籍贯差异有关。-地贫中共检出8 种基因型类型，最常见的是－－SEA/，这与－－SEA/可能是我国南方地区的-地贫的主要突变类型这一结论一致[10]。-地贫中共检出12 种基因型类型，其中IVS-II-654（C ＞T）、CD41-42（－TTCT）、CD17（A ＞T）较为常见，这与徐琦煜等[11]报道温州地区和杨胜等[12]报道的浙江北部地区常见-地贫突变基因型较为一致，但在比例上稍有区别。另外本研究还检出了4 种-复合地贫基因，占1%。虽然-复合地贫的临床症状有所减轻，但是与其他类型地贫个体婚配，生育重型地贫患儿的比率却有所提高；因此应重视其在人群中的分布比例。

本研究直接采用干血斑进行检测，有利于特殊人群的开展（如新生儿），扩大了本地区人群地贫热点基因检测率。同时直接进行热点基因检测可降低地贫携带者的漏检率，更能反应宁波地区人群中地贫基因携带的情况。

综上所述，宁波地区总体地贫基因携带率较高，且基因类型多元化，因此其贫已成为影响本地区人口素质的重要影响因素之一。