趋化因子受体-4蛋白在再生障碍性贫血患者骨髓细胞中的表达及与其外周血WBC、HBG水平关联性分析

郑州市金水区总医院（450000）张春玲

再生障碍性贫血（AA）是一种常见血液科疾病，主要是由于T细胞在机体内异常活动引起[1]。相关报道称，趋化因子受体-4（CXCR4）产生的相互作用对于由T细胞引起的免疫异常具有积极作用[2]。目前临床关于CXCR4针对控制免疫反应的相关报道较多，但鲜有关于其对于AA的专项报道。鉴于此，本研究旨在分析CXCR4蛋白在AA患者骨髓细胞中的表达，并分析其与外周血白细胞计数（WBC）、血红蛋白（HBG）水平关联性。具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019年1月～2020年1月我院收治的60份AA患者骨髓及骨髓活检石蜡标本。患者均符合AA诊断标准[3]，均签署知情同意书。本研究经我院伦理委员会批准后实施。其中男36例，女24例；年龄18～59岁，平均（36.52±4.17）岁。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化染色 取骨髓活检石蜡标本切片并置于二甲苯20min×1次，10min×2次；使用梯度乙醇水化，经5min/次的蒸馏水冲洗1次。将切片组织置入枸橘酸钠缓冲液中煮沸，而后置入PBS液中5min冷却。室温下采用3%双氧水覆盖切片组织15min；采用PBS液冲洗切片组织2次，3min/次；添加山羊血清液作封存，添加1∶50比例CXCR4抗体，继续放置2h。采用PBS液将CXCR4抗体冲洗干净，添加山羊抗兔二抗IgG工作液，常温下放置15min，采用PBS液冲洗切片组织2次，3min/次；添加辣根酶标记链霉卵白素工作液，室温下放置15min，采用PBS液冲洗切片组织2次，3min/次；而后滴加DAB显色剂，依据显色剂操作说明书进行。加入苏木素再次染色10s，而后经95%乙醇2min，100%乙醇2min×2次，二甲苯2min×2次，最后滴加中性树胶封片。

1.2.2 WBC及HBG水平检测 采集清晨空腹外周静脉血3ml，以3000r/min离心15min，取上层血清采用全自动血细胞分析仪（深圳市普康电子有限公司，型号：PE-6300Plus）测定WBC水平，采用血液分析仪（长春市曼特诺医疗器械有限公司，型号：MTN-21）测定HBG水平。

1.3 染色结果判读 ①染色强度：0分：无着色，1分：淡黄色，2分：棕黄色，3分：棕褐色。②阳性细胞数：低倍显微镜下随机抽取5个×400倍的高倍视野，每视野细胞计数为100个，阳性细胞率=阳性细胞数/观察细胞数×100%。阳性分级：1分：细胞率≤10%，2分：11%～50%，3分：＞50%。若染色强度与阳性细胞率所得分值相乘＞3分，则为阳性。

1.4 统计学方法 应用SPSS20.0统计学软件处理数据，计量资料以±s表示，组间比较用t检验；多因素分析采用Logistic回归分析；以%表示计数资料，用χ2检验，相关性采用双变量Pearson相关性分析，P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 基本资料与WBC、HBG水平比较 60份标本经染色呈阴性18份，呈阳性42份。两组性别、年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；相较阴性组，阳性组WBC、HBG水平较低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见附表1。

附表1 基本资料与WBC、HBG水平比较

2.2 多因素分析 经Logistic回归分析结果显示，AA患者外周血中WBC、HBG过表达是AA发生的影响因素（OR＞1，P＜0.05）。见附表2。

附表2 AA发生的影响因素多因素分析

2.3 CXCR4表达与外周血WBC、HBG水平相关性分析 经双变量Pearson直线相关性检验结果显示，阳性组CXCR4蛋白水平与外周血WBC、HBG呈负相关（r=-0.938，-0.873，P＜0.001）。

3 讨论

AA主要表现为全血细胞锐减与骨髓细胞增生不良，患者常因出血、重度贫血以及感染等因素病死[4]。近些年，临床常采用免疫控制来增加AA患者白细胞数目，达到治疗目的。研究显示，CXCR4对于人体免疫反应具有重要作用，而其是否参与AA免疫过程尚无定论[5]。

本研究结果显示，相较阴性组，阳性组WBC、HBG水平均较低；经双变量Pearson直线相关性检验结果显示，阳性组CXCR4蛋白水平与外周血WBC、HBG呈负相关，表明CXCR4在AA患者骨髓细胞中表达增加，与外周血WBC、HBG水平呈负相关。分析其原因可能在于，CXCR4主要表达于静息细胞表面，由于免疫系统产生异常，静息细胞数量显著降低，CXCR4表达降低，可见CXCR4在决定AA疾病进程中起到关键作用[6]。CXCR4可吸引免疫细胞聚集于免疫应答位置，影响免疫调节及人体免疫反应，因此CXCR4对于AA患者骨髓细胞表达显著增加。WBC作为机体内一种重要血细胞，其在人体内可起到吞噬异物并形成有效抗体的作用，还可增强机体受损愈合能力及疾病免疫力[7]。当机体出现AA等细菌感染类疾病时，其水平可迅速升高以抵抗细菌侵入，因此其水平高低与CXCR4在骨髓细胞中表达具有显著关联。而HBG作为机体内用于运输氧气的一类特殊蛋白质，其数量在机体发生贫血等血液疾病时锐减，CXCR4于AA患者骨髓细胞中的高表达可引起机体免疫系统逐渐趋于正常，进而引起机体内HBG水平增加，因此其水平与CXCR4在骨髓细胞中表达亦具有显著关联。

综上所述，CXCR4在AA患者骨髓细胞中表达增加，与外周血WBC、HBG水平呈负相关，对AA治疗具有一定指导价值。