血浆miR-127、IL-32 水平对急性肺损伤患者预后的预测价值

张永军，吕会礼，廖玉峰，刘俊宏，谭勇平，文军

郴州市第一人民医院，湖南郴州423000

急性肺损伤（ALI）是由非心源性因素损伤肺毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞，导致的弥漫性肺间质和肺泡水肿，其起病急、进展快，若不及时给予有效治疗，可发展为急性呼吸窘迫综合症［1］。目前临床主要通过临床体征、症状、结合病史判断，ALI诊断及预后预测尚缺乏特定生物标志物。近年研究表明［2-3］，炎症反应在ALI发生发展中发挥重要作用。微小RNA（miRNA）是一类新型的基因调控分子，参与调控细胞多种生物学功能。研究［4］发现，miR-127可通过影响靶基因表达进而调控免疫和炎症反应，参与肺部炎症反应。白细胞介素-32（IL-32）是近年来新发现的一种白细胞介素，能诱导多种炎性细胞因子和巨噬细胞炎性蛋白2 表达，与多种炎症性疾病有密切关系［5］。本研究检测ALI 患者血浆miR-127、IL-32水平，探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取我院2019 年1 月—2020 年6月收治的233 例ALI 患者为观察组，均表现为不同程度通气/血液比例失调、肺容量减少、肺顺应性下降，根据患者死亡或痊愈出院分为两组，死亡组87例，其 中 男58 例，女29 例；年龄46～78（58.93 ±5.57）岁；BMI 19～27（23.16 ± 2.38）kg/m2；病因：胰腺炎5 例，创伤24 例，感染56 例，其他2 例；冠心病史10 例，高血压史27 例，糖尿病史13 例。存活组146 例，其中男92 例，女54 例；年龄44～76（57.25 ±5.26）岁；BMI 19～27（23.51 ± 2.29）kg/m2。病因：胰腺炎10 例，创伤31 例，感染98 例，其他7 例；冠心病史11 例，高血压史35 例，糖尿病史26 例。纳入标准：①经临床体征、症状、结合病史确诊；②符合《急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征诊断和治疗指南（2006）》［6］中ALI 诊断标准；③临床资料完整；④患者及家属均知情同意；⑤无精神疾病；排除标准：①支气管哮喘；②肺结核；③自身免疫性疾病者；④恶性肿瘤。另选取58 例体检健康者为对照组，其中男37 例，女21 例；年龄43～76（57.52 ± 9.67）岁；BMI 19～27（23.20± 2.17）kg/m2。三组性别、年龄、BMI、病因、既往史比较差异无统计学意义（P 均＞0.05）。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 血浆miR-127、IL-32水平测定 抽取观察组入院当天和对照组体检日空腹静脉血3 mL，EDTA-K2抗凝，3 000 r/min 离心8 min，离心半径8 cm，分离血浆，置于-80 ℃环境中保存，TRIzol 总RNA 抽提试剂（上海碧云天生物技术有限公司，产品编号：R0016，规格：100 mL）提取血浆总RNA，加入反应液，TaKa‑Ra 反转录试剂盒（北京田根生化科技有限公司，产品编号：FP314，规格：50 μL）转录合成cDNA，加入miR-127 正 向 引 物：5′-GCGGCTCGGATCCGTCT‑GAGCT-3'，反向引物5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3'；RT-PCR 扩增，条件：95 ℃预变性10 min，95 ℃变性15 s，60 ℃退火60 s，72 ℃延伸30 s，循环45 次，各管设置3 个复孔，以U6 做内参校正，正向引物5'-CTC‑GCTTCGGCAGCACA-3'，反向引物5'-AACGCTTCAC‑GAATTTGCG-3'，反应结束后得到各反应管Ct，2-ΔΔCt法计算血浆miR-127 相对表达量。酶联免疫吸附法测定血浆IL-32 水平，所有操作严格按照试剂盒（上海赫澎生物科技有公司，规格：48T/96T）说明书进行。

1.3 观察指标 收集ALI 患者一般资料，包括性别、年龄、BMI、病因、病史、心率（HR）、呼吸频率、鱼跃YE660A 型血压测量仪测定收缩压（SBP）和舒张压（DBP）、超声心动图（迈瑞DCN2S 型彩色多普勒超声诊断仪）测定平均动脉压（MAP）、西门子EPOC型血气分析仪测定呼气末正压（PEEP）、动脉血氧分压（PaO2）、动脉血二氧化碳分压（PaCO2）。

1.4 统计学方法 采用SPSS26.0 统计软件。计量资料以±s表示，组间比较采用t 检验；计数资料比较采用χ2检验；采用多因素Logistic 回归分析ALI 患者死亡危险因素；采用受试者工作特征（ROC）曲线判断血浆miR-127、IL-32 水平对ALI 患者死亡的预测价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组与对照组血浆miR-127、IL-32 水平比较 观察组血浆miR-127、IL-32 水平分别为1.42 ±0.93、（95.89 ± 22.54）ng/L，对照组血浆miR-127、IL-32水平分别为0.53±0.36、（52.15±18.72）ng/L，观察组血浆miR-127、IL-32 水平高于对照组（t 分别为7.148、13.648，P均＜0.05）。

2.2 存活组和死亡组临床资料对比 死亡组与存活组血浆miR-127 水平分别为2.42 ± 0.71、0.82 ±0.37，IL-32 水平分别为（115.91±19.06）、（83.96±14.62）ng/L，死亡组MAP 低于存活组，PEEP 和血浆miR-127、IL-32 水平高于存活组（P 均＜0.05），见表1。

2.3 ALI患者死亡危险因素的多因素Logistics回归分析 以MAP（≥73.20 mmHg=2，＜73.20 mmHg=1）、PEEP（≥9.76 cmH2O=2，＜9.76 cmH2O=1）、miR-127、IL-32 为自变量，ALI 患者生存状态为因变量（死亡=1，存活=0），多因素Logistic回归分析显示，高水平miR-127 和IL-32 为ALI 患者死亡的独立危险因素（P均＜0.05）。见表2。

表1 存活组和死亡组临床资料情况（ ± s）

表1 存活组和死亡组临床资料情况（ ± s）

组别死亡组存活组n 87 146 t P HR（次/min）107.61±17.85 105.41±16.21 0.965＞0.05呼吸频率（次/min）26.13±5.36 25.47±5.11 0.936＞0.05 SBP（mmHg）131.41±14.69 128.61±13.41 1.487＞0.05 DBP（mmHg）80.71±9.73 78.51±9.46 1.699＞0.05 MAP（mmHg）62.41±13.76 83.73±17.21 9.831＜0.05 PEEP（cmH2O）12.93±2.71 8.46±2.27 13.509＜0.05 PaO2（mmHg）60.21±14.16 61.51±14.38 0.671＞0.05 PaCO2（mmHg）39.16±7.51 37.29±7.31 1.87＞0.05

表2 ALI患者死亡危险因素的多因素Logistic回归分析

2.4 血浆miR-127、IL-32 水平对ALI 患者死亡的预测价值 ROC 曲线分析显示，血浆miR-127+IL-32 水平预测ALI 患者死亡的AUC 明显大于miR-127、IL-32 单独预测（Z 分别为3.909、3.743，P 均＜0.05），灵敏度、特异度、准确度均高于各指标单独预测。见表3。

表3 血浆miR-127、IL-32水平对ALI患者死亡的预测价值

3 讨论

ALI 是临床常见急危重症，当严重肺损伤得不到及时有效控制时，可加重肺组织水肿，进一步损害肺功能，最终发展为急性呼吸窘迫综合症，总体病死率高达35%～50%［7］。目前临床尚缺乏ALI有效治疗方式，病死率极高，故如何早期预测患者病情严重程度和预后，对改善患者预后有重要意义。目前研究一致认为，肺内难以控制的炎症反应是ALI 发生重要原因，其机制可能是促炎因子诱导中性粒细胞迁移至肺泡腔，释放大量炎症递质代谢产物，并诱导多种炎症细胞聚集和释放，形成正反馈效应，加重肺毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损伤，导致ALI 发生，并促进其发展为急性呼吸窘迫综合症［8］。

miRNA 是一组长约22 个核苷酸的非编码RNA，可通过序列特异性碱基互补配对结合其靶miRNA 的3′-UTR，抑制靶miRNA 翻译在转录后水平调控基因表达，参与调节细胞增殖、分化、迁移、凋亡、自噬等多种生物学功能［9］。随着研究的进展，如今miRNA 已被广泛用于肿瘤和心血管疾病的诊断中。miR-127 位于人类基因染色体14q32.2，所属基因簇进化高度保守，具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用［10］。2009 年BHASKARAN 等［11］研究发现，胎儿肺器官培养中过表达miR-127 能明显降低末期芽数，增加内芽和末期芽大小，导致肺部发育不当，故推测miR-127 在肺部发育中发挥重要作用。研究发现，肺损伤期间患者血浆miR-127 表达明显降低，通过体内肺损伤模型实验发现，过表达miR-127 会导致肺通透性降低，增加细胞因子和炎性细胞浸润，提示miR-127 与肺损伤有关［12］。为进一步探讨miR-127 与肺损伤的关系，ESSANDOH 等［13］研究发现，过表达miR-127 能促进M1 巨噬细胞和促炎细胞因子生成，并抑制抗炎因子表达，引起不可控炎症反应，参与肺部损伤。但LI 等［14］通过脂多糖处理巨噬细胞却发现，miR-127 能通过靶向免疫球蛋白G-Fc 片段受体Ⅰ缓解肺部炎症反应。同时CHUNG等［15］研究显示，miR-127 可促进信号传导与转录激活因子3磷酸化，参与细菌感染调控，增强宿主对细菌的清除能力，故认为miR-127 既可促进炎症反应，亦可调控宿主免疫。本研究结果显示，观察组血浆miR-127 水平高于对照组，说明ALI 患者血浆miR-127水平明显提升；死亡组血浆miR-127水平高于存活组，为ALI 患者死亡的独立危险因素，说明miR-127与ALI患者预后密切相关，随着其水平提升，ALI患者预后越差，其机制是过表达miR-127 激活c-Jun氨基末端激酶通路，调节巨噬细胞极化，促进肺部炎症和损伤［16］。同时过表达miR-127 还能激活p38 丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）和核因子-κB（NFκB），增加肺通透性和肺中性粒细胞浸润，诱导肺组织病理改变，促进ALI进展［17］。

IL-32 位于人类染色体16p13.3，由8 个编码区组成，具备多种前炎症细胞因子特性，可诱导巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α），广泛分布于大脑、睾丸、卵巢、前列腺、结肠、小肠、胸腺、脾脏、胰腺等组织器官，由上皮细胞、单核细胞、NK 细胞、T 细胞等内源性细胞分泌，在机体内的作用主要体现在免疫调节和炎症反应两个方面［18］。DAMEN 等［19］研究发现，类风湿性关节炎患者病理组织中IL-32表达明显提升，可增强疾病炎症加剧损伤，与患者病情严重程度密切相关。但在疱疹性口炎病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、甲型流感病毒等免疫性疾病中，IL-32 具有抗病毒和增强抗炎等作用［20］。RONG等［21］研究显示，慢性阻塞性肺疾病患者肺组织内IL-32 表达明显升高，可诱导并加速疾病发生发展。马莉等［22］研究发现，大鼠ALI后肺组织中IL-32 浓度明显升高，参与ALI的炎症反应。本研究结果显示，观察组血浆IL-32水平高于对照组，说明ALI患者血浆IL-32 水平升高；死亡组血浆IL-32 水平明显高于存活组，为ALI 患者死亡的独立危险因素，说明IL-32与ALI患者预后密切相关，随着其水平升高，IL-32患者预后越差，机制是过表达IL-32能激活含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1、p38 MAPK 和NF-κB 依赖途径，诱导TNF-α、巨噬细胞炎症蛋白2、IL-1β、IL-6、IL-8等趋化因子和细胞因子产生，参与ALI炎症反应发展过程［23］。ROC 曲线结果显示，血浆miR-127+IL-32水平预测ALI患者死亡的AUC、灵敏度、特异度、准确度高于各指标单独预测，说明联合检测血浆miR-127、IL-32水平能提升ALI患者预后诊断价值。

综上所述，ALI 患者血浆miR-127、IL-32 水平升高，与预后不良密切相关，联合测定血浆miR-127、IL-32水平能提升对ALI患者预后的预测价值。