五味子不同炮制品中鞣质含量的测定

张宇喆，赵 丹，武子敬

(通化师范学院医药学院·吉林通化·134002)

五味子为木兰科五味子属植物五味子Schisandra Chinesisi（Turez.）Baill.的成熟果实。五味子这个名字来自于唐代《新修本草》中“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味”的描述[1]。《神农本草经》中描述五味子具有滋养作用并无毒性[2]。据以往的研究表明，五味子中主要含有五味子素、维生素C、树脂、鞣质及少量糖类，具有增强免疫、延缓衰老、治遗精的功效，也可平缓心跳频率和纾解高血压[3]。如今五味子以治疗肝炎和神经衰弱等症为主[4]。鞣质又称单宁，是普遍存在于植物中的次生代谢产物，鞣质其性收敛，内服可用于医治出血、滑脱等症；外用后鞣质能使创面渗出液中的蛋白质凝结形成结痂，降低感染的风险[5]。鞣质还原性较强，被认为是天然的抗氧化剂，可以帮人们实现延缓衰老的梦想[6]。而且，抗过敏、抗炎、驱虫、降血压等也是鞣质具有的作用。本文五味子不同炮制品中鞣质的含量测定以五味子不同炮制品中鞣质含量差异为根据，用紫外-可见分光光度计法联合干酪素法进行测定。本试验采取超声波辅助提取技术，运用紫外-可见分光光度计法，测定五味子不同炮制品中鞣质含量，为五味子在临床上更好的使用提供参考[7]。

1 实验仪器与材料

1.1 材料

中药材五味子（购于通化医药大厦）；没食子酸对照品；磷钼钨酸试液；无水碳酸钠；干酪素；食盐；黄酒；醋。

1.2 仪器

电子分析天平（沈阳龙腾电子有限公司）；紫外-可见分光光度计（上海昂拉仪器有限公司）；超声提取仪（上海宇砚机械设备有限公司）；电子万能炉（本溪恒文育电炉厂）；高速多功能粉碎机（广州市旭朗机械设备有限公司）。

2 方法与结果

2.1 五味子炮制方法

2.1.1 五味子生品

取中药五味子，去除杂质后，用水冲洗至洁净，取出，晾干，得到洁净的五味子生品,准确称量30g。

2.1.2 醋蒸五味子

取30g洁净的五味子，在洁净的烧杯中，用醋闷润后，放到蒸锅内，等到醋被吸干后，拿出晾干，就得到了用醋炮制的五味子。五味子∶醋=20∶3[8]。

2.1.3 酒蒸五味子

取洁净的中药五味子，称取30g后，放入洁净烧杯中，用黄酒混合均匀，闷润，放置在合适容器内，蒸至酒干，其外表呈现紫黑色，拿出，晾干，得到用酒蒸制而成的五味子[11]。五味子∶酒=5∶1[9]。

2.1.4 清蒸五味子

取符合标准的五味子30g，放入蒸锅内，蒸汽加热蒸透，拿出，晾干。

2.1.5 盐蒸五味子

取处理过的五味子30g，用盐水拌匀待盐水吸尽后，置于适当容器内蒸制，直至外表呈紫黑色后取出，晾干。食盐∶水=1∶50[10]。

2.1.6 炒五味子

取干净的五味子30g，用文火炒到五味子微微鼓起，并基本保持紫褐色时，拿出，晾干，得炒五味子[11]。

2.1.7 焦五味子

取五味子30g，去除杂质，用中火炒至焦黄色或焦褐色，拿出，晾干。

2.1.8 五味子炭

将30g五味子生品去掉杂质及梗，用武火翻炒五味子，直到五味子表面呈焦褐色即可，内部“存性”。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取洁净50mL棕色量瓶，倒入25.20mg精确称量没食子酸，然后再倒入水溶解稀释到刻度线，振荡，取其中10mL置于另一棕色量瓶，重复以上操作，得到浓度为50.4μg·mL-1的没食子酸对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

用4号筛对粉碎后的五味子生品及不同炮制品进行筛选，在250mL棕色量瓶中加入2g药材粉末和150mL水，静置过夜后用超声提取仪处理15min，晾凉，加水稀释至相应刻度，充分混匀，放置在阴凉地方30min，过滤，弃去最开始滤得的滤液50mL，而后精密滤得20.0mL续滤液加入到100mL棕色量瓶中，加水稀释到相应刻度，充分混合均匀后，得到五味子供试品溶液。

2.3 测定波长的选择

量取4.0mL没食子酸对照液以及样品溶液，将测量后的两种溶液放入50mL的棕色瓶，再分别向其中

放入磷钼钨酸试液2.0mL。再分别向其中加入20mL水，向棕色瓶中加入29%碳酸钠溶液直到稀释到与刻度线平齐，充分混合均匀，放置阴凉处静置15min。使用空白试剂做参照，在400～800nm之间做波长扫描，其得到两种比色液在760nm处吸光度值最大，因此测定的波长选择760nm[12]。

2.4 线性关系考察

选择4个50mL棕色量瓶，并分别倒入对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0mL，磷钼钨酸溶液2.0mL以及水22.0、20.0、18.0、16.0mL，最后倒入29%碳酸钠溶液定至刻度线。充分混匀，静置15min。最后用空白试剂做参照，在波长760nm处测量各自的吸光度，横坐标为各瓶的溶液浓度，纵坐标为各自的吸光度，进行线性回归后[13]，得到线性回归方程式：y=0.0133x+0.1，R2=0.9996。并看到在2.02～12.10μg·mL-1的浓度下五味子供试品溶液线性关系较好。其结果见图1。

图1 没食子酸标准曲线

2.5 总鞣质含量的测定

2.5.1 总酚量的测定

把4.0mL供试品溶液倒进50mL洁净的棕色量瓶中，运用2.3项下的相同方法得到各种供试品在760nm处的吸光度值。将各自的吸光度值代入到回归方程中，通过计算得出溶液里总酚量。

2.5.2 不被吸附多酚量的测定

在100mL的锥形瓶中加入0.6g磨成细粉的干酪素和25mL各种五味子溶液，放入30℃恒温水浴锅中1h，摇匀，水浴保温后拿出，防冷至室温，混合均匀静置后过滤，丢去初滤液，精密滤取4mL续滤液。使用“2.3”项下的方式测定出吸光度值，代入回归方程式中，计算得到不被吸附的多酚的量。

2.5.3 总鞣质含量的计算

鞣质含量=总酚量-不被吸附的多酚量[14]

2.6 方法学考察

2.6.1 精密度试验

准确量取4.0mL没食子酸对照液，按照“2.3”项中的方法，连续测量6次对照品的吸光度，.并计算出其RSD值为0.77%（n=6），得出实验精密度良好的结论。

2.6.2 重复性试验

称出6份2g的五味子生品粉末，按“2.2.2”中的方法配制供试品溶液，吸取4mL溶液按“2.3”项下方式，测定出各自不同的吸光度值，通过相对标准偏差的计算公式计算出供试品溶液吸光度的RSD为0.55%（n=6）。

2.6.3 稳定性试验

准确量取超声波提取的4.0mL生五味子供试品溶液，如同“2.3”项下的办法，在显色后0.5、1、3、6、9、12h时测出各个吸光度，计算吸光度的RSD=1.22%，通过相对标准偏差可以看出稳定性较好。

2.6.4 加样回收率试验

以五味子生品为例，在15.0mg没食子酸对照品中加入6份已知含量的供试品溶液0.1g，再按“2.2.2”项中一样的方式得到供试品溶液，最后运用“2.5”项下一样的方法测出吸光度并计算得到样品中鞣质的加样回收率和的RSD值为1.29%。

2.7 样品测定

取8种五味子药材粉末2g，各取3份，之后根据“2.2.2”项下的原理得到样品溶液，再使用“2.5”项下办法测得吸光度并根据标准曲线方程式计算得到总鞣质含量，结果见表1。

表1 五味子不同炮制品中鞣质含量的测定结果

3 结论与讨论

因鞣质性质活泼易发生氧化反应，受热结构易被破坏，对于鞣质成分的提取不利，所以运用冷浸过夜超声提取法，而且操作简单，对总鞣质成分的提取较完全[12]。

鞣质的含量测定可以选择皮粉法、干酪素法、比色法等。本实验测定五味子不同炮制品中的鞣质含量选择了干酪素法，因为它的选择性较好，具有取样量少，快速，灵敏等特点[15]。同时在碱性条件下鞣质能与磷钼钨酸产生蓝色沉淀，因为该蓝色沉淀遇光不稳定，因而，颜色反应防止轻操作，应用棕色瓶。

以紫外-可见分光光度法联合干酪素法测定五味子不同炮制品中鞣质含量与生品有一定差异，相较于生品，其中醋蒸、清蒸、酒蒸的炮制方法均增加了其鞣质的含量，而其他方法使鞣质含量降低。其中经查阅其他文献得知，醋蒸、酒蒸均能增加其收敛作用，与实验结果相符，而清蒸鞣质含量的增加可能是由于蒸法或者蒸制温度对其内部结构有影响，所以鞣质含量增加可能不仅与醋、黄酒的作用有关。