龙蒲定神丸对小鼠行为学的影响及其急性毒理学研究

袁岳鹏，宏亚丽，万美霞，吴国泰

(1.庆阳市人民医院，甘肃 庆阳 745000；2.陇东学院，甘肃 庆阳 745000；3.甘肃中药药理与毒理学重点实验室,甘肃 兰州 730000)

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明种小鼠，SPF级，体重20±2g，雌雄各半，由甘肃中医药大学实验动物中心提供，动物质量合格证号：SCXK(甘)2011-0004，喂食标准饲料(由甘肃中医药大学实验动物中心提供)，饲养温度：20±2℃，相对湿度：60%-70%，适应环境7d后开始实验。

1.2 药品与试剂

DSW(DSW，庆阳市第二人民医院制，甘药制字Z7101638)口服，成年人每次10g，每天2次。处方为龙齿、磁石、珍珠母各30g，三棱、莪术、天竺黄、枣仁、远志、柴胡、香附、牡丹皮、黄连各10g，当归、合欢皮、节菖蒲、寒水石各15g，蜈蚣3条，琥珀(冲服)3g。

小鼠受试物的制备：取DSW 28.6g，研磨成粉末，加150ml蒸馏水浸泡过夜，超声提取30min，过滤，取上清液，蒸馏水定容至100ml，作为高剂量受试品；取高剂量受试品减半稀释，为中剂量受试物；取中剂量受试品减半稀释，为低剂量受试物。

戊巴比妥钠(北京普博斯生物科技有限公司提供)，养血安神片(国药准字Z14020770，亚宝药业集团股份有限公司，批号121203)。

1.3 主要仪器

ZZ-6型小鼠自主活动测试仪(成都泰盟科技有限公司)；Sartorius电子天平(北京赛多利斯有限公司)；BA-200型小鼠避暗仪(成都泰盟科技有限公司)；超声波清洗器(上海冠特超声仪器有限公司)。

2 方法

2.1 DSW对小鼠自主活动的影响

昆明小鼠60只，雌雄各半，随机分为5组，阴性对照组、阳性对照组(养血安神片)、DSW高、中、低剂量组，每组12只。给药剂量：阳性对照组小鼠灌胃养血安神片(2.36g·kg-1)；DSW高、中、低剂量组分别灌胃DSW(5.71g·kg-1、2.86g·kg-1和1.43g·kg-1)；阴性对照组小鼠灌胃等容量生理盐水。每天1次，连续给药3d，末次给药前均禁食8h。于给药前60min和末次给药60min后，将小鼠于PM 8:00～22:00逐一放入ZZ-6型小鼠自主活动测试仪中，适应环境5min后，记录5min内各组小鼠的自主活动量和站立次数[1,2]。

2.2 DSW对小鼠避暗实验的影响

动物分组、给药剂量及给药方式同“2.1 DSW对小鼠自主活动的影响”项下，每天1次，连续给药3d，末次给药60min后，将小鼠放入BA-200型小鼠避暗仪中，适应环境5min后，记录小鼠第一次从明室进入暗室的逃避潜伏期及5min内受到电击的总次数(即犯错次数)[3-5]。

2.3 DSW对戊巴比妥钠催眠作用的影响

动物分组、给药剂量及给药方式同“2.1 DSW对小鼠自主活动的影响”项下，每天1次，连续给药7d。末次给药60min后，各组小鼠分别腹腔注射戊巴比妥钠35mg·kg-1(预实验中得到的使80%的小鼠翻正反射不消失的最大剂量)。观察并记录入睡小鼠数量(15min内小鼠翻正反射消失大于等于1min的小鼠数作为入睡动物数)和入睡率，同时记录注射戊巴比妥钠后，小鼠从出现翻正反射到翻正反射消失的这段时间为睡眠潜伏期[6-8]。

2.4 急性毒性实验

2.5 统计学分析

3 结果

3.1 DSW对小鼠自主活动的影响

与阴性对照组比较，阳性对照组和DSW高剂量组小鼠自主活动量和站立次数明显降低，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；DSW低剂量组小鼠站立次数明显减少，与阴性对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 DSW对小鼠自主活动的影响

3.2 DSW对小鼠学习记忆的影响

与阴性对照组比较，阳性对照组和DSW高、中剂量组小鼠受电击的次数(犯错误次数)明显降低，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；阳性对照组和DSW中、低剂量组小鼠逃避潜伏期(记忆时间)较短，与阴性对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 DSW对小鼠学习记忆的影响

3.3 DSW对戊巴比妥钠催眠作用的影响

与阴性对照组比较，阳性对照组和DSW各剂量组小鼠入睡率均有不同程度的增加，阳性对照组和DSW高、中剂量组差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；阳性对照组和DSW各剂量组小鼠入睡潜伏期明显缩短，与阴性对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，见表3。

表3 DSW对戊巴比妥钠催眠作用的影响

3.4 急性毒性实验

DSW给药剂量2.86g·kg-1、11.44g·kg-1、34.32g·kg-1给药，持续观察14d，小鼠饮食、活动均未出现异常，皮毛肤色、大小便未见异常，未见动物死亡，无法测得DSW小鼠灌胃LD50；与对照组相比，给药组小鼠体重增加差异无统计学意义(P>0.05)，结果见表4。

表4 DSW对小鼠体重的影响

4 讨论

精神分裂症是一种复杂性脑病，其病因及发病机制目前仍然不清楚。现代医学药物治疗虽然取得了确切疗效，但出现了药物依赖等诸多副作用，近年来诸多中医学者致力于中医药治疗精神分裂症，已取得了可喜的临床疗效。DSW是庆阳市第二人民医院的纯中药复方院内制剂，前期临床研究发现，该方剂辅助治疗妄想型精神分裂症取得良好治疗效果，且复发率低。对DSW组方主要药物的现代中药药理学研究发现：磁石、香附、龙齿、牡蛎对中枢神经系统有一定的抑制作用，具有镇静催眠作用；龙齿、黄连具有保护和恢复脑损伤神经的作用；莪术可增强学习记忆[11]。

本研究旨在观察DSW对小鼠的行为学(小鼠自主活动、学习记忆、镇静催眠)的影响并考察其急性毒性，为DSW的临床应用提供参考。结果显示：DSW能改善小鼠的自主活动、增强学习记忆，并具有镇静催眠作用，且毒性甚小，在规定剂量范围内应用是安全可靠的，值得临床推广。对DSW治疗精神分裂症的机制是通过多巴胺D2受体还是5-HT受体系统的问题还有待进一步研究。