羊布鲁氏菌S2疫苗免疫与自然感染鉴别方法

郭希萍，纪新花，王会英

（安阳市动物疫病预防控制中心，河南 安阳 455000）

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌感染引起的人或多种动物共患的急性或慢性传染病，临床上主要表现为妊娠家畜流产、关节肿大等症状。疫苗接种是目前控制重点疫区布病流行的一种方法,但是接种活疫苗以后，布病感染的疫情被掩盖了，而不是消失了，因为疫苗接种动物与自然患病动物无法甄别，法定检疫措施严重受阻。

笔者应用荧光微球抗体检测试纸条进行了羊布鲁氏菌S2 疫苗免疫与自然感染鉴别试验，随机对应用试管凝集试验结果进行复核，结合样品相应的免疫背景，经分析，效率高，准确率高，建议将该方法推广应用于羊布鲁氏菌免疫或感染的筛查、辅助诊断等。

1 试验原理

荧光标记物采用的是镧系元素及其螯合物经特殊包裹加工而成的荧光微球，荧光强度远高于普通荧光标记物，大大提高了检测的灵敏度。镧系元素及其螯合物的激发波长和发射波长间有一个较大的Stokes位移，减少了由激发光引起的特异杂散光对检测的干扰，提高荧光检测稳定性；同时荧光寿命长，消除了环境中荧光物质对待测物的干扰，而且荧光激发波长较宽，发射波长较窄，具有本底低、分辨率高、特异性强的优势。

2 试验步骤

样品选择：选择试管凝集试验结果阴性羊血清10份，阳性羊血清20份（结合样品采集登记表选择免疫S2疫苗羊血清10 份，自然感染羊血清10 份），分成阴性对照组、S2疫苗免疫组、自然感染组，每组10份羊血清。

样本稀释：用吸管取9 滴样本稀释液，再吸取1 滴羊血清在1.5 ml离心管中做10倍稀释并混匀。

撕开检测试纸铝箔包装袋，取出检测试纸，放于平整、洁净的台面上。

用配套吸管吸取已稀释好的样本，垂直而缓慢地滴加2 ～3滴（约80 ul）到加样孔内。

室温下放置15 min，读数前先将产品配套ID 卡插入便携式荧光免疫分析仪，之后将反应到时间的检测试纸加样孔朝里插入便携式荧光免疫分析仪，点击“快速检测”进行读数。

3 结果判定

阴性：当LPS检测值＜0.1时，判为阴性。

阳性：当LPS检测值≥0.1且NH检测值＜0.1时，判为疫苗免疫阳性；当LPS和NH检测值均≥0.1时，判为布鲁氏菌感染。

试验结果如表1所示。

表1 各组检测结果统计表

4 结果分析

从试验结果来看，试管凝集试验阴性的血清（抗体滴度＜1:25），LPS 检测值、NH 检测值均＜0.1；S2 疫苗免疫组LPS 检测值≥0.1 且NH 检测值＜0.1；自然感染组LPS 和NH 检测值均≥0.1，表明应用荧光微球抗体检测试纸条较准确地鉴别出疫苗接种动物与自然患病动物。

S2 疫苗具有良好的免疫保护效果和优越的安全性，它不仅能对猪、牛和羊产生良好的免疫保护效果，并且口服免疫也不会引起怀孕母畜流产，应用范围较广。根据有关动物试验，布病疫苗株可在动物体内完全被免疫系统清除，而强毒株或自然感染毒株会在动物体内长期存在。研究显示，S2 疫苗株在小鼠体内完全清除时间为6周。LPS检测值、NH检测值数值大小与免疫时间长短、抗体滴度大小之间的关系有待进一步研究。

5 结论

荧光微球抗体检测试纸条是在荧光染料标记技术上发展起来的，作为一种免疫学检测方法，荧光微球的发光强度可以随激发光的强度增强而增强，所以荧光微球标记有望提高免疫层析技术的检测限；而在微球壳结构的作用下，荧光微球具有相对稳定的形态结构，粒度均一、单分散性好、稳定性好、发光效率高、重复性好，有较好的生物相容性；且形成微球后染料荧光淬灭大大减少，发射强而稳定，且不受外界环境介质变化的影响，具有检测灵敏度高、操作简便、稳定性好的优点。综上所述，荧光微球抗体检测试纸条在布鲁氏菌病检测中有广阔的应用前景。□