桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症大鼠的治疗作用及机制

陈光元，黄平，廖小花，谢家滨

子宫内膜异位症是指于子宫内膜外部位有活性内膜细胞的妇科疾病，主要以月经异常、慢性盆腔痛、痛经及不孕表现为主，可影响患者的生殖系统功能[1]。据流行病学统计[2]，育龄期女性子宫内膜异位症发生率约为10%，致使其生活质量下降，严重危害患者身心健康。因此，需找寻一种有效治疗方法，改善患者临床症状，提升生活质量。桂枝茯苓丸属中成药，主要由桃仁、牡丹皮、茯苓及桂枝组成，具有消癥、化瘀及活血之效，可缓解妇女月经不畅、闭经、痛经、血色暗紫及下腹包块等症状[3]。目前，临床上关于桂枝茯苓丸治疗子宫内膜异位症的研究较多，但仍未明确其具体作用机制。鉴于此，本研究对子宫内膜异位症造模成功的大鼠展开研讨，探讨桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症的治疗作用与机制。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 (1)动物：未交配过的健康雌性、性成熟大鼠，体质量185～220 g，均来源于上海剑钝生物科技有限公司。(2)药物和试剂：桂枝茯苓丸(同药集团大同制药有限公司生产，国药准字Z14020280)，达那唑(广州白云山光华制药股份有限公司生产，国药准字H44020421)，布洛芬缓释胶囊(芬必得，上海信谊天平药业有限公司生产，国药准字H31022720)，血栓素2(TXB2)、β-内啡肽(β-EP)、6-酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)放免试剂盒(上海生物科技有限公司生产)，苯二胺、机制金属蛋白酶抗体显色试剂盒(上海古朵生物科技有限公司生产)。(3)仪器：石蜡切片机(浙江省金华市华速科技有限公司生产，型号：HS-3315)，医院计算机图像分析系统。

1.2 实验方法

1.2.1 大鼠模型建立：选取动情周期5 d且持续有2个正常动情周期的大鼠，于第3个动情周期，通过子宫内膜肢体移植法，构建大鼠子宫内膜异位症模型。在建模术后4周，借助涂片法，查看大鼠动情期与性周期，随机选取5只，实施开腹检查，观察病灶生长状况，同时开展病理组织检查，探查移植物生存状况，如果移植物存活且有间质细胞、腺体、子宫内膜上皮生长，则证明建模成功。

1.2.2 分组及用药：采用随机数字表法，将100只建模成功的大鼠分成A、B、C、D、E组，每组20只。A组予以桂枝茯苓丸1.024 g/kg，B组予以桂枝茯苓丸0.256 g/kg，C组予以达那唑0.036 g/kg，D组予以芬必得0.054 g/kg，E组予以等体积生理盐水，灌胃给药，每天1次。5组治疗时间均为28 d。

1.3 观察指标与方法

1.3.1 血清免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)水平：通过免疫比浊法测定5组大鼠血清IgM、IgA、IgG水平。

1.3.2 血浆TXB2、β-EP、6-keto-PGF1α水平：在大鼠最后1次给药后，禁食12 h，取静脉血2 ml，快速放于抗凝管内，以3 000 r/min的速度离心10 min，取血浆，在-20 ℃条件下保存备用；通过放免法测定TXB2、β-EP、6-keto-PGF1α水平。

1.3.3 异位内膜中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达：取血后，采用戊巴比妥钠将大鼠麻醉，取出移植物，借助游标卡尺测量其体积，对比各组体积状况。体积=高×长×宽×0.52。采用4%多聚甲醛进行固定，实施常规石蜡包埋与切片，通过免疫组织化学染色法开展检测工作。显色深浅评分标准：0分：显色不清或不显色；1分：浅黄色；2分：棕黄色；3分：褐黄色。阳性细胞百分率评分标准：0分：未发现细胞显色；1分：细胞显色率<25%；2分，细胞显色率为25%～50%；3分：细胞显色率>50%。染色强度评分标准：0～1分：呈阴性；2分：表现为弱阳性；3～4分：呈中度阳性；5～6分：呈强阳性。采用显色深浅半定量得分+阳性细胞百分率得分+染色强度评分作为评分标准，评估5组异位内膜中MMP-9、MMP-2表达水平。

2 结 果

2.1 血清IgM、IgA、IgG水平比较 A、B、C、D组IgM、IgA、IgG水平低于E组(P<0.05)；A、B、C、D组IgM、IgA、IgG水平相比，A组最低(P<0.05)。见表1。

表1 5组血清IgM、IgA、IgG水平比较

2.2 血浆TXB2、β-EP、6-keto-PGF1α水平比较 A、B、D组血浆TXB2水平低于C组、E组，血浆β-EP、6-keto-PGF1α水平高于C、E组(P<0.05)。见表2。

表2 5组血浆TXB2、β-EP、6-keto-PGF1α水平 比较

2.3 异位内膜中MMP-9、MMP-2表达情况比较 A、B组MMP-9、MMP-2总积分低于C、D、E组(P<0.05)。见表3。

表3 5组异位内膜中MMP-9、MMP-2表达情况 比较分)

3 讨 论

子宫内膜异位症属临床常见妇科疾病，患者可伴有不同程度的痛经，甚至会出现不孕现象，严重影响患者的身心健康。该病的发生可能与内分泌功能失调、体质与遗传因素、免疫防御功能缺陷等因素有关[4]。西医主要采用达那唑、布洛芬治疗子宫内膜异位症。达那唑主要是通过对子宫内膜细胞雌激素受体的作用，抑制雌激素效能，促使子宫正常及异常的内膜不活动与萎缩，从而减轻患者临床症状[5]。布洛芬在子宫内膜异位症引起的痛经治疗中效果较好，但对子宫内膜异位症的整体治疗效果并不显著。

中医认为子宫内膜异位症属“癥瘕”“痛经”范畴，主要是由血瘀络阻而致，因此，治疗时应以活络通经、活血化瘀治疗为主[6]。桂枝茯苓丸是一种中成药，具有消癥、化瘀、活血之效，主要用于血瘀闭经、腹痛的治疗。在子宫内膜异位症治疗中桂枝茯苓丸可有效缓解患者疼痛，促进内膜异位肿块的消除。有学者认为[7]，子宫内膜异位症可能属自动免疫性疾病，在B细胞分化成浆细胞后，IgM会率先生成，之后通过转化合成IgA、IgG。当无内源性感染的条件下，腹腔膜会产生多种抗体。IgG可参与机体的自动免疫反应与慢性炎性反应，IgA可参与到黏膜的免疫中，IgM可参与急性炎性反应。以往研究表明[8]，子宫内膜异位症患者腹膜液IgG含量较高，且经子宫内膜腺上皮染色发现，IgA、IgG水平也较高。本结果显示,A组IgM、IgA、IgG水平低于B、C、D、E组，表示高剂量桂枝茯苓丸能有效改善患者炎性反应与自动免疫应答反应，从而缓解子宫内膜异位症临床症状。

文献报道[9]，子宫内膜异位症的发生，造成组织或血浆内的TXA2、PGI2失去平衡，从而引发子宫小动脉痉挛而导致子宫体缺血，最终产生疼痛，致使6-keto-PGF1α、TXB2在体内的含量出现异常变化，子宫产生异常收缩，抑制机体排卵。而桂枝茯苓丸则可有效调节患者体内6-keto-PGF1α与TXB2水平，促使机体有关指标水平较快恢复，从而促进患者康复。本研究中A、B、D组TXB2低于C、E组，β-EP、6-keto-PGF1α水平高于C、E组，可见桂枝茯苓丸能有效改善患者机体内有关指标水平。

子宫内膜异位症存在与恶性肿瘤类似的转移侵袭能力，细胞基质的重建、降解是其重要因素，基质金属蛋白酶则关系到细胞基质的降解。有关文献报道[10]，基质金属蛋白和细胞基质的发生存在密切关系，其中MMP-9、MMP-2皆参与了子宫内膜异位症的发生与发展。有关研究发现，MMP-9、MMP-2于异位内膜细胞中的表达程度上升，可提高血管生成数量。另外，MMP-9、MMP-2于子宫内膜异位症发病过程中发挥关键性作用。本研究中A、B组MMP-9、MMP-2表达低于C、D、E组，这提示桂枝茯苓丸可抑制MMP-9、MMP-2的表达，防止该病深入发展。

综上所述，在子宫内膜异位症大鼠治疗中桂枝茯苓丸可发挥较好治疗作用，其可能作用机制：(1)通过对子宫内膜异位症大鼠免疫功能功能的调节，改善其临床症状；(2)通过抑制子宫平滑肌痉挛，改善患者前列腺素水平，降低MMP-9、MMP-2的表达。