细胞周期蛋白D1、基质金属蛋白酶 -9 在胃癌组织中的表达水平及与幽门螺杆菌感染的相关性

陆 莲

（江南大学附属医院病理科，江苏无锡 214062）

胃癌是一种恶性肿瘤，其发病初期无明显症状，随着病情发展进入晚期，患者将表现出消化道出血症状，如疼痛、呕血、黑便等，如提示疼痛持续放射性向腰背部展开，则表示肿瘤已经侵犯胰腺被膜。肿瘤细胞的增殖、凋亡在恶性肿瘤的发展中起着重要的作用，细胞周期蛋白D1（cyclinD1）具有促进细胞增殖由G1 期转变为S 期的作用，cyclinD1 蛋白表达的增加主要见于恶性肿瘤的发生过程；基质金属蛋白酶 -9（MMP-9）是可对肿瘤细胞侵袭的组织学屏障起破坏作用[1]。幽门螺杆菌（Hp）感染可引发机体发生免疫反应与炎症损伤，进而促进胃癌的发生[2]。相关研究表明，Hp 阳性患者胃癌发生率明显高于Hp 阴性患者，且清除Hp 可以有效降低胃癌的发生率[3]。因此，本研究旨在探讨cyclinD1、MMP-9 在Hp 感染性胃癌组织中的表达水平与Hp 感染的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2018 年1 月至2021 年1月江南大学附属医院收治的100 例胃癌患者的临床资料，其中男性63 例，女性37 例；年龄48～73 岁，平均（58.37±7.42）岁；TNM 临床分期[4]：Ⅰ+Ⅱ期40 例，Ⅲ+Ⅳ期60 例；分化程度[5]：中高分化65 例，低分化35 例。纳入标准：符合《胃癌》[6]中的相关诊断标准者；且经病理学检查确诊者；临床资料完整者；近期未接受抗Hp 治疗者等。排除标准：伴有其他恶性肿瘤者；严重肝、肾等功能损伤者；胃癌复发者等。本研究已通过院内医学伦理委员会批准。

1.2 检测方法

1.2.1 Hp 感染 ①改良Giemsa 染色：取所有患者的病理组织，做石蜡切片，进行脱蜡水化，在2%的Giemsa染色剂中染色30 min，取出后立即用自来水进行冲洗脱水透明处理，采用油镜观察Hp 感染情况（×1 000），其中改良Giemsa 染色Hp 菌体呈紫红色。②14C 呼气实验：检测前采集所有患者空腹6 h，且口服14C 尿素胶囊后的100 mL 呼出气体，进行14C 红外线能谱仪检测；14C 呼气实验Hp 阳性超基准值（DOB） ＞2.5。Hp 感染判定标准：改良Giemsa 染色、C-14 呼气实验均为阳性。

1.2.2 cyclinD1、MMP-9 表达 取所有患者的病理组织，做石蜡切片，进行脱蜡水化，每隔3 min 用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗1 次，共冲洗3 次。使用微波将pH值 = 6.0 的柠檬酸盐缓冲液加热至沸腾，取出组织切片后，放置于耐高温塑料切片架上，静置自然泠却10 min后，每隔3 min 用蒸馏水和PBS 反复冲洗各2 次。滴1 滴3%的过氧化氢于切片上，静置10 min 后，PBS再次冲洗3 次。cyclinD1 阳性染色主要定位于细胞核，阳性着色为棕黄色；MMP-9 阳性染色主要定位于细胞质，阳性着色为棕黄色。综合判定标准为染色强度和阳性细胞数占肿瘤细胞的百分比，染色强度：棕褐色（3分）、棕黄色（2 分）、淡黄色（1 分）、无染色（0 分）；阳性细胞数在肿瘤细胞中占比：＞50%（3 分）、25%～49%（2分）、5%～24%（1 分）、＜5%（0 分），最后计算两项结果的乘积，乘积 ＞ 2 则判定为阳性[7]。

1.3 观察指标 ①Hp 感染、cyclinD1、MMP-9 表达与胃癌患者临床病理特征的关系，其中临床病理特征包括胃癌TNM 临床分期、分化程度。②胃癌患者Hp 感染与cyclinD1、MMP-9 表达的相关性。

1.4 统计学分析 采用SPSS 21.0 统计软件分析数据，计数资料采用[ 例(%)]表示，组间比较采用χ2检验，采用Pearson相关系数法进行相关性分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Hp 感染与胃癌患者临床病理特征的关系 100 例胃癌患者中Hp 感染70 例，非Hp 感染30 例；非Hp 感染胃癌患者TNM 临床分期为Ⅰ期和Ⅱ期、低分化程度占比均低于Hp 感染患者，但经比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 Hp 感染与胃癌患者临床病理特征的关系比较[ 例(%)]

2.2 cyclinD1 阳性表达与胃癌患者临床病理特征的关系 免疫组化染色结果显示，cyclinD1 表达阳性57例，阴性43 例；cyclinD1 阴性患者中胃癌TNM 临床分期为Ⅲ+Ⅳ期、中高分化程度患者占比均显著低于cyclinD1 阳性患者，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 cyclinD1 表达与胃癌患者临床病理特征的关系比较[ 例(%)]

2.3 MMP-9 阳性表达与胃癌患者临床病理特征的关系 免疫组化染色结果显示，MMP-9 表达阳性80 例，阴性20例；MMP-9 阴性患者中胃癌TNM 临床分期为Ⅲ+Ⅳ期、中高分化程度患者占比均显著低于MMP-9 阳性患者，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表3。

表3 MMP-9 表达与胃癌患者临床病理特征的关系比较[ 例(%)]

2.4 胃癌患者Hp 感染与cyclinD1、MMP-9 表达的相关性 与Hp 感染患者比，非Hp 感染患者中胃癌组织cyclinD1 阳性、MMP-9 阳性患者占比均显著降低，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表4。

表4 胃癌患者Hp 感染与cyclinD1、MMP-9 的表达水平的关系比较[ 例(%)]

2.5 胃癌患者Hp 感染与cyclinD1、MMP-9 表达的相关性 胃癌患者中，Hp 感染与cyclinD1 阳性、MMP-9阳性表达均呈正相关，差异均有统计学意义（r= 0.462、0.571，均P＜0.05）。

3 讨论

胃癌是由饮食、感染等致病因素导致机体胃黏膜上皮细胞发生癌变的一种疾病。手术切除仍是目前临床治疗胃癌的主要方法，也是治疗胃癌的主要手段，由于大多数胃癌患者被发现时已经属于晚期肿瘤，所以仍有大部分患者在术后存在复发和转移的情况[8]。

Hp 是一种革兰氏阴性菌，在大气或绝对厌氧环境下不能生长，常寄居在胃黏膜内壁，但胃黏膜上皮脱落较快，所以寄居在胃黏膜上的Hp 会随着胃黏膜上皮的更新而脱落，脱落后顺着肠道从粪便排到体外，使食物和水源受到污染。但也有一部分Hp 不会随着肠道排出，会经过胃 - 食管反流进入口腔，通过唾液传播感染，Hp 可加重胃黏膜的炎症反应，促进肠内消化和萎缩，进而加快癌变[9]。cyclinD1 含量随细胞周期而变化，不同细胞周期时细胞内cyclinD1 的含量和活性的高峰均不同[10]。MMP-9 是一种依赖性较强的金属酶，可有效降解细胞外基质。本研究结果，非Hp 感染患者胃癌TNM 临床分期为Ⅰ期和Ⅱ期、低分化程度占比均低于Hp 感染患者；cyclinD1 阴性患者与MMP-9 阴性患者中胃癌分期Ⅲ+Ⅳ期、中高分化程度占比均显著低于cyclinD1 阳性与MMP-9 阳性患者，表明在胃癌中，Hp 感染可明显促进cyclinD1、MMP-9 的表达，进而加快病情进展。MMP-9 是一类蛋白水解酶，在正常的生理过程与疾病过程中参与细胞外基质的分解，破坏机体抑制肿瘤细胞转移的天然屏障，进而促进肿瘤细胞转移。胃癌患者中Hp 自身及其代谢产物在一定程度上具有致癌活性，其可促进cyclinD1 基因的激活、扩增等，同时其可通过对胃黏膜的炎症损伤进行促进MMP-9 的表达，从而加重患者临床症状[11]。本研究中，非HP 感染患者中cyclinD1 阳性、MMP-9 阳性患者均显著低于Hp 感染患者；Hp 感染与cyclinD1阳性、MMP-9 阳性均呈正相关，表明胃癌Hp 感染与cyclinD1、MMP-9 表达水平的关系密切。

综上，Hp 感染性胃癌中，cyclinD1、MMP-9 表达水平较高，且其与Hp 感染均呈正相关，可为胃癌患者预后分析提供参考，但本研究样本量较少，且为单中心研究，因此后期可增加样本后进行多中心、多方面深入研究，以便提高研究结果的准确度。