淋巴细胞亚群检测在小儿哮喘诊断中的临床价值

王群 李娟 孙逊

徐州市儿童医院检验科221000

支气管咳喘 (哮喘)是5 岁以下小儿常见呼吸系统疾病,若治疗不及时,会对小儿免疫系统及生长发育带来严重的影响,也会给社会、家庭带来严重的负担[1]。流行病学资料数据显示,目前我国小儿哮喘呈现高发病率和高增长率趋势,发病率约为2.4‰～5.6‰,年增长率约为0.1‰～0.3‰[2-3]。研究报道指出,越早对急性小儿哮喘进行有效控制,尤其是在3岁以下能得到有效控制,可以降低成年后哮喘反复发作风险[4]。小儿哮喘极易因大量炎性因子及淋巴细胞亚群异常表达的持续作用,引起持续的气道高反应,从而表现为较强的持续性反复哮喘[5]。小儿哮喘与细胞免疫状态异常相关,如外周血T 淋巴细胞亚群就与小儿哮喘存在明显的关系,但是否与小儿持续性反复哮喘存在关系少见报道。本文在观察淋巴细胞亚群检测在小儿哮喘诊断中临床意义的基础上,进一步分析淋巴细胞亚群检测与小儿持续性哮喘的关系,为临床小儿哮喘诊断提供科学依据。

1 对象与方法

1·1 研究对象 选取2018年1月至2019年10月徐州儿童医院健康体检的小儿50名为健康对照组,儿科同期收治的哮喘小儿107例为病例观察组进行回顾性研究。健康对照组,1～3周岁,身体健康,无呼吸系统、血液系统、免疫系统疾病及心肝脑肾疾病,近1个月未应用任何糖皮质激素。病例观察组,1～3周岁,符合婴幼儿哮喘诊断标准,患儿在48 h内哮喘发作超过3次以上;血常规白细胞计数正常或稍微降低[6],诊断为小儿哮喘,无呼吸系统、血液系统、免疫系统疾病及心肝脑肾疾病,近1个月未应用任何糖皮质激素,排除发育不良导致的小儿哮喘。病例观察组根据临床症状及病史问询结果分为急性发作组(突然发作喘息、咳嗽、气促、胸闷等呼吸道症状,或者原有症状急剧加重,共44例)和持续发作组 (近3个月内不同频度或者不同程度的出现过喘息、咳嗽、气促、胸闷等症状,共63例)。健康对照组、急性发作组、持续发作组3组小儿的一般资料比较,差异均无统计学意义(P 值均>0.05),见表1。纳入研究患儿家属均签署知情同意书,且经徐州市儿童医院伦理委员会论证通过(2017045)。

1·2 研究方法 对纳入研究的所有受试小儿进行空腹采血2 ml,血液样品2 000 r/min 离心处理20 min,离心半径5 cm,采用流式细胞仪 [生产商:艾森生物 (杭州) 有限公司; 型号:NovoCyte D2040R;批准文号:浙食药监械 (准)字2014 第2400581 号]进行T 细胞亚群细胞CD3+、CD4+、CD8+检测,并计算CD4+/CD8+的值,分析健康对照组、急性发作组、持续发作组3组小儿的T 淋巴细胞亚群细胞水平差异。

表1 3组小儿的一般资料比较

1·3 统计学分析 应用SPSS 19.0统计软件,T淋巴细胞亚群细胞表达水平采用±s 描述;2组间比较采用t检验,多组间比较采用LSD-t 检验。P <0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2·1 3组小儿T 淋巴细胞亚群CD3+比较 健康对照组、急性发作组、持续发作组小儿CD3+分别为(84.63±3.43)%、(73.82±2.61)%和(46.56±1.18)%,急性发作组和持续发作组均低于健康对照组,且持续发作组低于急性发作组,差异有统计学意义(F =56.807,P <0.05),见表2。3组典型病例小儿T 淋巴细胞亚群CD3+流式细胞仪检测见图1。

2·2 3组小儿T 淋巴细胞亚群CD4+比较 健康对照组小儿T 淋巴细胞亚群CD4+为 (76.24±3.34)%,急性发作组小儿T 淋巴细胞亚群CD4+为(50.89±2.26)%,持续发作组小儿T 淋巴细胞亚群CD4+为(38.70±1.03)%。3组小儿T 淋巴细胞亚群CD4+比较,急性发作组和持续发作组均低于健康对照组,且持续发作组低于急性发作组,差异有统计学意义(F=67.216,P <0.05)。见表2、图2。

2·3 3组小儿T 淋巴细胞亚群CD8+比较 健康对照组小儿T 淋巴细胞亚群CD8+为 (57.82±2.39)%,急性发作组小儿T 淋巴细胞亚群CD8+为(68.74±2.78)%,持续发作组小儿T 淋巴细胞亚群CD8+为(91.08±3.42)%。3组小儿T 淋巴细胞亚群CD8+比较,急性发作组和持续发作组均高于健康对照组,且持续发作组高于急性发作组,差异有统计学意义 (F =7.019,P <0.05)。见表2、图3。

2·4 3 组小儿T 淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比较 健康对照组小儿T 淋巴细胞亚群CD4+/CD8+为1.46±0.54,急性发作组小儿T 淋巴细胞亚群CD4+/CD8+为0.74±0.31,持续发作组小儿T 淋巴细胞亚群CD4+/CD8+为0.42±0.18。3组小儿T 淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比较,急性发作组和持续发作组均低于健康对照组,且持续发作组低于急性发作组,差异有统计学意义 (F =62.115,P <0.05)。见表2。

3 讨论

小儿哮喘给患儿的生活质量及生长发育带来了严重的威胁,其具体发病机制尚未完全明确,但有文献报道显示,变态性反应及气道炎性反应与小儿哮喘病理机制具有密切的相关性,而机体免疫功能是影响小儿变态性反应及气道炎性反应的关键因素[7]。T 淋巴细胞亚群参与机体免疫应答,如辅助性T 淋巴细胞及其他T 淋巴细胞所导致的免疫应答,从而造成小儿哮喘的发生,可能在小儿哮喘发生、发展中起到重要作用[8],研究T 淋巴细胞亚群水平变化与小儿哮喘发生、发展的相关性有一定的临床意义。

表2 3组小儿T 淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比较表 (±s)

表2 3组小儿T 淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比较表 (±s)

注:与健康对照组比较,a P <0.05;与急性发作组比较,b P <0.05

组别例数CD3+ (%)CD4+ (%)CD8+ (%)CD4+/CD8+健康对照组50 84.63±3.43 76.24±3.34 57.82±2.39 1.46±0.54急性发作组44 73.82±2.61a 50.89±2.26a 68.74±2.78a 0.74±0.31a持续发作组63 64.56±1.18b 38.70±1.03b 91.08±3.42b 0.42±0.18ab F 值56.807 67.216 7.019 62.115 P 值<0.001<0.001 0.030<0.001

图1 3组典型病例小儿T 淋巴细胞亚群CD3+流式细胞仪检测图 A:急性发作组;B:健康对照组;C:持续发作组

图2 3组典型病例小儿T 淋巴细胞亚群CD4+流式细胞仪检测图 A:急性发作组;B:健康对照组;C:持续发作组

图3 3组典型病例小儿T 淋巴细胞亚群CD8+流式细胞仪检测图 A:急性发作组;B:健康对照组;C:持续发作组

3·1 T 淋巴细胞亚群异常与小儿哮喘发生、发展密切相关 CD3+、CD4+、CD8+均属于T 淋巴细胞亚群中的重要组成部分。CD3+为一种蛋白质复合物,具有CD3γ链和CD3δ链。这两个链具有参与T 细胞的信号转导的功能,是免疫系统中的重要分子标志物,其表达水平降低则可使机体免疫功能受到影响[9]。而CD4+、CD8+的高低变化则主要揭示机体免疫功能的被强化或被弱化,CD4+/CD8+被认为是机体免疫功能评估的最关键指标[10-11]。本研究发现,无论是急性发作哮喘患儿,还是持续性发作哮喘患儿的CD3+、CD4+表达水平均低于健康儿童,而CD8+则高于健康儿童,同时衡量机体免疫功能的关键指标CD4+/CD8+则均低于健康儿童(P 值均<0.05),这一结果得到国内外大量研究的支持[12-14]。提示哮喘发作时,CD3+、CD4+表达水平被抑制,而CD8+表达水平则被激活,T 淋巴细胞亚群在小儿哮喘发作时的功能和作用,其可能导致免疫功能抑制,最终诱导小儿哮喘的发生。

3·2 T 淋巴细胞亚群检测可用于小儿持续性哮喘的预测诊断 本文将106例小儿哮喘病例按进行急性发作和持续性发作进行分组,并分析2组小儿哮喘病例的T 淋巴细胞亚群表达情况,结果显示,持续发作哮喘患儿的CD3+、CD4+表达水平均低于急性发作哮喘患儿,CD8+则高于急性发作哮喘患儿,同时衡量机体免疫功能的关键指标CD4+/CD8+则均低于急性发作哮喘患儿 (P 值均<0.05)。分析认为,小儿哮喘的主要病因在于激活免疫系统功能的T 淋巴细胞受到抑制,最终导致儿童免疫功能持续性低下,进而导致小儿持续性高气道反应,导致哮喘持续性反复发作[15]。T 淋巴细胞亚群水平的持续紊乱或失衡,对于儿童哮喘具有明显的病情促进作用,可使小儿急性哮喘发展为小儿持续性哮喘[16-17]。本研究结果显示,持续性哮喘发作患儿的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+表达水平较对照组低,而CD8+的表达水平则较高(P 值均<0.05),提示T 淋巴细胞亚群检测在预测诊断小儿持续性哮喘具有一定的临床意义。

综上所述,外周血T 淋巴细胞亚群与小儿哮喘的发生、发展存在明显的相关性。与健康儿童比较,哮喘患儿的T 淋巴细胞亚群表达存在差异,且持续性哮喘患儿的T 淋巴细胞亚群表达差异更为显著,故淋巴细胞亚群检测不仅在小儿哮喘诊断中有一定的临床意义,而且在反复持续性小儿哮喘诊断中也具有一定的临床意义,外周血T 淋巴细胞亚群在健康儿童、急性发作哮喘患儿和持续性发作哮喘患儿中的这种表达差异,值得在小儿哮喘临床诊断中给予关注。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突