2014-2019年青藏高原牦牛轮状病毒血清学检测与分析

周赛赛，宋仁德，罗晓林，赵索南，马进寿，参木友，石红梅，索朗斯珠

（1.西藏农牧学院动物科学学院，林芝860000；2.青海玉树藏族自治州畜牧兽医工作站，玉树815400；3.四川省草原科学研究院，成都610097；4.青海省海北畜牧兽医科学研究所，海北812200；5.青海省大通种牛场，大通810102；6.西藏农牧科学院草原研究所，拉萨850000；7.甘南州畜牧工作站，甘南747000）

轮状病毒（Rotavirus，RV）是呼肠孤病毒科（Reoviridae）轮状病毒属（Rotavirus）成员，可分为A～G 7个不同群；A群RV是5岁以下儿童和各幼龄动物病毒腹泻的病原之一，是导致严重腹泻的人畜共患病原，在国内外广泛流行[1-4]。牛轮状病毒（Bovine rotavirus，BRV）是导致牛腹泻的病原之一，犊牛腹泻严重影响了犊牛的健康生长。目前，在四川[5]、新疆[6]、黑龙江[7]、内蒙古[8]等地均分离鉴定出了BRV；印度[9]、巴西[10]、泰国[11]、乌干达共和国[12]等国家均呈地方性流行。牦牛是生活在青藏高原地区包括我国西藏全部地区和青海、甘肃、四川、云南、新疆的部分地区的独特物种，是高原地区农牧民的经济支柱。虽然BRV对我国牦牛产业影响较大，但由于青藏高原地理环境恶劣、民族文化差异、牦牛生活习惯差异等原因，我国还尚未对牦牛源RV进行大规模系统的流行病学调查研究。本研究采用BRV抗体ELISA检测试剂盒，在2014-2019年采集的西藏7地市、青海、甘肃、四川部分地区牦牛血清样品中随机挑选了630份进行检测，结果经过统计分析，明确牦牛源RV在青藏高原各省区的流行情况，为青藏高原BRV的防控提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 Bovine RV-Ab ELISA Kit，批号为ZKB6971，生产日期为2019年6月，有效期6个月，购自深圳子科生物科技有限公司。

1.2 血清样品来源 2014-2019年采集并选取牦牛血清630份，牦牛均未免疫过RV疫苗，置于-80℃冰箱保存。

1.3 抗体检测和结果判定 按照Bovine RV-Ab ELISA Kit（批号：ZK-B6971）说明书对血清样品进行RV抗体检测和结果判定。

1.4 数据统计分析 利用SPSS 19.0软件对检测结果进行年份、地区、年龄差异分析，取连续校正卡方（χ2）值，通过χ2检验并分析差异显著性，P＜0.01为差异极显著，0.01＜P＜0.05为差异显著，P＞0.05为无显著性差异。

2 结果与讨论

2.1 不同年份牦牛感染RV的情况 2014-2019年青藏高原牦牛轮状病毒血清抗体检测结果见表1。经统计分析显示：仅2014年RV阳性率较高，与其他年份阳性率差异极显著（P＜0.01），具有统计学意义；除2014年以外其他年份间阳性率差异不显著（P＞0.05）。高原地区牦牛饲养方式多为散养模式，牛群中一旦感染RV，将会在种群内一直伴随牛群，这可能是近些年青藏高原地区牦牛RV血清阳性率较高的原因之一，表明近些年RV可能一直在影响青藏高原地区牦牛产业发展。

表1 不同年份青藏高原牦牛血清RV抗体检测结果Table 1 Detection results of yak sera RV antibody in Qinghai-Tibet plateau in different years

2.2 不同地区牦牛RV的检测结果 通过对青藏高原4个省牦牛BRV抗体进行检测，结果见表2和图1。青藏高原地区牦牛RV总阳性率为18.57%（117/630），西藏牦牛RV抗体阳性率（25.76%）平均水平明显高于其他地区，并且西藏地区抗体阳性率高于青海地区（8.33%），差异极显著（P＜0.01），高于四川地区（11.67%），差异显著（P＜0.05）。青藏高原的西藏地区气候和其他地区牧场相比，更为恶劣，饲养环境更差，侧面证实了Herv á s等[13]所表达的观点，高海拔及恶劣气候会影响RV对人和其他动物的感染性。李鑫等[14]收集了2005-2006年我国12省份的1760份牛血清并对BRV抗体进行了检测，其中西藏176份血清中，BRV抗体弱阳性率12%，中阳性率71%，强阳性率17%，总阳性率高达100%，比本试验中RV抗体阳性率最高的西藏地区还高，说明西藏牦牛的感染率非常高，因此，要加强西藏地区RV的监测。2014年，贺晓龙[15]检测了青海省天峻、海晏、共和地区的犊牦牛血清RV抗体，平均总阳性率为4.17%，与本次检测的海北、大通、玉树的总阳性率为（8.33%）相比，差异不显著（P＞0.05）。李然、周芳等[5,16]已经分离出牦牛RV，但并未能对青藏高原牦RV进行充分流行病学调查。本研究虽选择了西藏7个地市的牦牛血清样品，但仍有不全面之处，后期还需对全阴性的阿里地区增加检测数量。牦牛RV感染可能因地理位置、气候环境等因素存在差异，因此，应该对牦牛RV加强区域化监测，才能有利于牦牛产业的发展。

图1 青藏高原各地区牦牛RV血清抗体检测结果Fig. 1 Detection of yak serum antibody against BRV in different areas of Qinghai-Tibet plateau

表2 不同地区青藏高原牦牛血清RV抗体检测结果Table 2 Detection results of yak sera RV antibody in Qinghai-Tibet Plateau

2.3 不同月龄牦牛RV的检测结果 对不同年龄牦牛的检测结果见图2。≤4月龄犊牛RV血清抗体阳性率（32.27%）极显著高于4～12月龄牦牛（14.05%）和≥12月龄牦牛（9.76%），差异极显著（P＜0.01），4～12月龄牦牛的血清抗体阳性率（14.05%）和≥12月龄牦牛的差异不显著（P＞0.05）。以上结果表明，青藏高原牦牛RV感染存在月龄差异，≤4月龄牦牛RV阳性率较高，最为易感。青藏高原牦牛养殖方式主要为散养，牦牛活动范围广，粪便处理条件差，RV极易通过粪口传播，幼龄动物的呼吸道和消化道较敏感，且自身抵抗力弱，因此，更易感染RV。

图2 不同年龄阶段牦牛RV血清抗体阳性率比较Fig. 2 Positive rate comparison of BRV serum antibody in yaks of different ages

RV感染可能因地区、温度、海拔、气压、降雨量或季节气候影响而存在差异，但均有可能引起流行，较寒冷的季节RV感染较多[13]。牛源RV感染导致犊牛腹泻，继发感染大肠杆菌、冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒等细菌和病毒病，严重影响犊牛的健康。本研究首次大范围检测了青藏高原4个省区牦牛RV血清抗体，表明青藏高原地区牦牛持续存在RV感染，丰富了青藏高原地区牦牛RV血清流行病学的资料。