EDTA-K2抗凝血浆与血清中心脏标志物检测结果的一致性验证

杨郝亮，张 萍，武利涛，周航宇，郝金莉，王 昊，丁 然，陈维华，杨曦明△

1.北京中医药大学东直门医院检验科，北京 100700；2.北京市通州区疾病预防控制中心中心实验室，北京 101100

随着社会经济的发展，人们生活方式发生了巨大变化，尤其是人口老龄化及城镇化进程加速，中国心血管疾病危险因素流行趋势明显，如吸烟、高血压、血脂异常、糖尿病、超重/肥胖、缺乏运动和不合理膳食等，导致心血管疾病的发病人数持续增加[1-3]。今后10年，心血管疾病患病人数仍将快速增长。急性心肌梗死(AMI)是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧引起的心肌坏死，作为一种心血管危急症，其具有发病急、病死率高、最佳救治窗口期短且容易合并多器官系统疾病等特点[4-5]。2002-2016年，AMI病死率总体仍呈上升态势，从2005年开始，AMI病死率呈快速上升趋势。肌红蛋白(Myo)、肌钙蛋白I(cTnI)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)对AMI的早期诊断有重要作用，可为临床提供诊断依据，从而降低AMI急性期的病死率[6-9]。在实际应用过程中，推荐使用的血清标本因分离时间长对报告的及时性可造成一定影响，而使用血浆可以缩短标本预处理时间。本研究对乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝血浆和血清对心脏标志物检测结果的一致性进行初步验证，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取北京中医药大学东直门医院因急性冠状动脉综合征入院的患者133例作为研究对象。选取CK-MB、Myo和cTnI正常参考值人群标本、异常人群标本2个梯度，其中每个梯度各40例，男女各20例。

1.2仪器与试剂 亚辉龙iFlash 3000-H化学发光测定仪及配套CK-MB、Myo及cTnI原装试剂、校准品及质控物。CK-MB参考值为：男性<5.60 ng/mL，女性<3.10 ng/mL；Myo参考值为：男性<118.0 ng/mL，女性<59.5 ng/mL；cTnI参考值为：<0.03 ng/mL。真空采血管为北京格瑞纳健峰生物技术有限公司提供的奥地利非可替紫头管(内含EDTA-K2，批号：454222)和红头管(内含分离胶，批号：454067)。

1.3方法 分别用红头管和紫头管采集同一患者静脉血，红头管为血清组，紫头管为血浆组，分别于低速离心机4 000 r/min离心10 min(排除高脂血、溶血、高胆红素血标本)，采用直接化学发光技术的夹心免疫法测定CK-MB、Myo和cTnI水平，抽血后4 h内完成全部项目的检测。所有检测项目均按试剂盒说明书设定参数，采用试剂配套校准品进行校准，确认质控结果在控后，同时对两种标本进行检测。

2 结 果

2.1CK-MB、Myo和cTnI检测结果阴性、阳性一致性评价 CK-MB、Myo和cTnI定性分析结果存在一致性，Kappa值为0.75～1.00，一致性较好。其中CK-MB和cTnI检测结果的Kappa值一致性检验完全相符，在标本前处理过程中，抽取血浆或血清对CK-MB和cTnI检测定性结果无影响。Myo检测结果Kappa值一致性检验不完全相符。血清组中有2例Myo阳性患者在血浆组中检测结果为阴性，这2例血清阳性值在参考区间的临界值附近。Myo血清组与血浆组经一致性检验Kappa值为0.95，一致性较好。血清和血浆CK-MB、Myo和cTnI检测结果阴性、阳性一致性评价见表1。

表1 3项指标检测结果阴性、阳性一致性评价

2.2血清组与血浆组CK-MB、Myo和cTnI检测结果比较 EDTA-K2抗凝血浆组与血清组CK-MB、Myo和cTnI检测结果的数据分布均呈偏态分布，Myo偏态分布数据取以10为底的对数后转换为正态分布。血浆组和血清组CK-MB和Myo检测结果比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；血浆组和血清组cTnI检测结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 血清组与血浆组CK-MB、Myo和cTnI检测结果比较(ng/mL)

2.3血清组与血浆组CK-MB阳性者和阴性者CK-MB检测结果比较 血清组与血浆组CK-MB阳性者和阴性者CK-MB检测结果比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 血清组与血浆组CK-MB阳性者和阴性者CK-MB检测结果比较[M(P25～P75)，ng/mL]

2.4血浆组和血清组Myo阳性者和阴性者Myo检测结果比较 血浆组和血清组Myo阳性者Myo检测结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)；血浆组和血清组Myo阴性者Myo检测结果比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 血浆组和血清组Myo阳性者和阴性者Myo检测结果比较[M(P25～P75)，ng/mL]

2.5血浆组和血清组cTnI阳性者和阴性者cTnI检测结果比较 血浆组和血清组cTnI阳性者和阴性者cTnI检测结果比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表5。

表5 血浆组和血清组cTnI阳性者和阴性者cTnI检测结果比较[M(P25～P75)，ng/mL]

3 讨 论

据流行病学调查显示,近年来我国心血管疾病持续增加,老龄心血管疾病患者数量大幅增多[10]，其中AMI患者需要早期诊断，以便及时采取治疗措施，挽救生命。使用抗凝管获取血浆可避开血液凝固的过程，可以尽快对标本进行分离、检测，从而缩短检测时间。应注意各种抗凝剂(如肝素或EDTA-K2等)对不同检测方法的影响程度不一。检测心肌损伤标志物时使用血浆可以缩短标本周转时间，但是一定要考虑抗凝剂对检测结果的影响。EDTA-K2抗凝血浆和血清标本均为亚辉龙公司认可的心肌损伤标志物标本类型，但这两种标本类型的检测结果是否一致需进行验证。

本研究结果表明，EDTA-K2抗凝血浆和血清的心肌损伤标志物定性分析结果一致性较好。CK-MB和cTnI检测结果Kappa一致性检验完全相符，表明血浆中的纤维蛋白原和EDTA-K2抗凝剂对CK-MB和cTnI定性分析无非特异性干扰。Myo检测结果Kappa一致性检验不完全相符，Myo在血清组中有2例阳性，在血浆组中按现有的参考值判为阴性，这2例血清阳性值在参考区间临界值附近。Myo作为急性冠状动脉综合征患者心肌损伤的早期标志物，其参考区间在EDTA-K2抗凝血浆中需要根据实验室具体情况来建立。

本研究EDTA-K2抗凝血浆和血清的心肌损伤标志物定量分析结果表明，cTnI作为最特异的心肌标志物[11-12]，EDTA-K2抗凝血浆组和血清组检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。Myo和CK-MB则因试管而异，EDTA-K2抗凝血浆组和血清组检测结果差异有统计学意义(P<0.05)。与血清组比较，血浆组Myo和CK-MB检测结果偏低，这与国内外相关报道结果一致[13-14]。国外文献报道，分离胶干扰Myo和CK-MB检测机制尚不清楚[14]。从凝胶中释放出的未知物质可以轻微影响化学发光信号产生，也可以影响检测中使用的抗体与Myo或CK-MB之间的相互作用。有文献报道，抗凝剂不同对检测结果有影响[14]。DAVES等[14]研究发现，使用Beckman Coulter Access时，含分离胶血清管的CK-MB检测结果比不含分离胶肝素锂抗凝管高，但HEDBERG等[15]观察到Abbott AxSYM检测肝素锂血浆CK-MB检测结果比血清高。抗凝剂与分离胶对心肌损伤标志物检测结果的影响有待进一步研究。各实验室在使用各检测系统前需对厂家声明进行验证，并制订各自实验室的参考区间。

综上所述，EDTA-K2抗凝血浆可作为血清替代标本检测cTnI，但不适合作为血清替代标本检测Myo和CK-MB。如在工作中需要使用EDTA-K2抗凝血浆，则需要实验室根据具体情况建立相应的Myo和CK-MB参考区间。