三种试剂检测血清幽门螺杆菌抗体的比较研究

崔俊华，周佳烨，周 琰，王蓓丽,2，张春燕,2，潘柏申,2，郭 玮,2

（1.复旦大学附属中山医院检验科，上海 200032；2.复旦大学附属中山医院厦门医院检验科，福建厦门 361015）

自从1983年发现幽门螺杆菌[1](Helicobacter pylori，Hp)以来，众多研究结果显示Hp 感染与慢性胃炎、消化道溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌相关[2-5]，世界卫生组织（World Health Organization，WHO）的国际癌症研究机构（International Agency for Research on Cancer，IARC） 将其定为一类致癌物质[6]，而我国幽门螺杆菌现症感染率平均为55%[7]。目前诊断Hp 感染的方法很多，各有其优缺点。幽门螺杆菌感染的处理-马斯特里赫特V/佛罗伦萨共识报告[8]中最为推荐的非侵入试验为尿素呼气试验，对无活检禁忌的患者推荐胃镜下行快速尿素酶试验；尽管研究[9-10]也表明这两种方法的优势，但抗生素或质子泵抑制剂会干扰这两种检测方法[8,11]；相比之下血清学抗体检测不受类似干扰且操作简便、无创，可以结合胃蛋白酶原（pepsinogen,PG），PGI，PGII 和PGI/II 的比值用于预测萎缩性胃炎和胃癌的风险[12-15]。本研究以快速尿素酶试验和尿素呼气试验作为Hp 检测标准，参考第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告[11]的诊断标准，评价三种血清Hp 抗体检测试剂在诊断Hp 感染中的性能，以供临床参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2017年4月，在复旦大学附属中山医院同时接受快速尿素酶试验（rapid urease test，RUT）以及尿素13C呼气试验（13C urease breath test，13C-UBT）的患者； 筛选出均未接受过抗幽门螺杆菌治疗的80例患者，其中男性患者47例，女性患者33例，年龄24～67岁，并在患者检查前进行血液样本的采集。

1.2 仪器与试剂13C-UBT 使用13C-UBT 诊断试剂颗粒（北京勃然制药有限公司）和HY-IREXB 呼气检测仪（广州华友明康光电科技有限公司），RUT 使用胃幽门螺杆菌诊断试剂盒（福建三强生物化工有限公司）；血清学抗体检测使用的三种试剂分别是：胶体金法幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒（A试剂，北京康美天鸿生物科技有限公司），胶乳增强免疫比浊法幽门螺杆菌检测试剂盒[B试剂，波音特生物科技（南京）有限公司]，装载于Hitachi7600-030型全自动生化分析仪（日本日立株式会社）进行检测，抗幽门螺杆菌IgG ELISA试剂盒[C试剂，欧蒙医学诊断(中国)有限公司]，用科华ST360 酶标仪（上海科华生物工程股份有限公司）进行检测。

1.3 检测方法

1.3.113C-UBT 检测：空腹吹气收集0 min 呼气；80～100ml 室温饮用水送服13C-UBT 诊断试剂颗粒一瓶，静坐30 min 收集30 min 呼气。用呼气检测仪检测0 min 呼气和30 min 呼气中的13CO2。超基准值( Delta Over Baseline，DOB）≥4.0 为阳性。

1.3.2 RUT 检测：在反应微孔内加入酶促反应液100μl，将新鲜活检的胃黏膜样本置入反应微孔，在室温孵育5 min 后观察结果。反应显红色为阳性，无反应显色为阴性，试剂中含有尿素和pH 指示剂。从胃内取出的标本通常呈酸性（pH ＜6.0），一般情况下试剂的颜色不变，如果胃内有Hp 感染，当黏膜标本放入试剂中，Hp所产生的尿素酶则分解尿素产生氨使pH值升高，试剂变为粉红色。

1.3.3 血清Hp 抗体检测：静脉采血立即分离血清，-20℃保存，一周内同时使用三种试剂，按试剂说明书操作对血清中的Hp 抗体进行检测。胶体金法幽门螺杆菌尿素酶抗体检测试剂盒检测结果判读：质控条带显色为有效检测，检测条带显色结果为血清中的Hp 抗体阳性，检测条带未显色结果为血清中的Hp 抗体阴性；质控条带未显色为无效检测。胶乳增强免疫比浊法幽门螺杆菌检测试剂盒，检测结果＜30AU/ml 为血清中的Hp 抗体阴性，结果≥30AU/ml 为血清中的Hp 抗体阳性。抗幽门螺杆菌IgG ELISA试剂盒，检测结果＜16RU/ml 为血清中的Hp 抗体阴性，结果≥16RU/ml 为血清中的Hp 抗体阳性。

1.4 统计学分析 用SPSS 20.0 统计软件计算三种血清Hp 抗体检测试剂盒的敏感度、特异度、准确度、阳性预期值、阴性预期值，并进行卡方检验和Kappa 检验分别评估三种试剂检测结果的差异以及与RUT 和13C-UBT 检测结果的一致性。其中卡方检验，P＜0.05 为差异有统计学意义；Kappa 检验的κ值越接近1，表明一致性越好；κ值越接近0，表明一致性越差。

2 结果

2.1 Hp 检测结果 见表1。根据第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告[11]，本研究以RUT 和13C-UBT 任何1 项阳性为Hp 感染诊断标准，80例患者中临床诊断为Hp 感染的患者56例，临床诊断无Hp 感染的患者24例。

表1 三种试剂检测Hp 抗体结果

2.2 三种检测血清幽门螺杆菌抗体的试剂比较 见表2。A试剂检出Hp 抗体阳性32例，B试剂检出Hp 抗体阳性51例，C试剂检出Hp 抗体阳性59例。A，B 和C 三种试剂检测结果的差异有统计学意义，A试剂与B试剂、A试剂与C试剂和B试剂与C试剂的χ2分别为30.327，18.983，42.874，均P＜0.001。三种试剂中，C试剂检测结果与通过RUT 和13C-UBT 检测诊断的Hp 感染结果一致性最好，κ值为0.722（P＜0.001），准确度达88.75%。

3 讨论

从胃组织活检样本中分离培养是Hp 诊断的金标准，而且能同时进行抗生素的敏感性试验是其在临床应用中独特的优势。此外，通过分离培养能够得到Hp 单个菌株以供后续表型和基因型特征分析试验，从而能更好地揭示不同表型和基因型的病理特征，为临床治疗提供依据。但是培养周期长，操作相对复杂、样本质量不合格、延迟运送、暴露于氧气环境以及转运温度的改变都会对分离培养的结果带来不利影响，同时也会降低其诊断准确度[16]。所以本次实验未以分离培养Hp 作为诊断标准，而是参考第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告，以RUT 和13C-UBT 任何一项阳性为Hp 感染诊断标准。

表2 三种不同检测血清HP 抗体试剂的比较（%）

实验中有16例RUT 阴性而13C-UBT 阳性的结果。RUT 结果直接受到胃镜取样的影响，胃中Hp 菌体分布不均和样本菌量不足会导致检测结果假阴性，而13C-UBT 能反映胃整体的Hp 感染情况，不受菌体分布不均的影响。入组的患者都未经抗Hp 治疗，近期也无使用氢离子泵抑制剂、抗生素和铋剂，可排除由这些原因造成的结果不一致[8]。尽管在胃中很难检出Hp 之外的产尿素酶细菌，但是口腔中可能会存在产尿素酶的正常菌群，而在服用13C-UBT 诊断试剂颗粒时这些细菌随药物通过口腔、食道进入到胃中而被检测出，造成假阳性结果。因此，对于RUT 和13C-UBT 矛盾的16例患者的结果，不排除RUT 假阴性和13C-UBT 假阳性的可能。这也是本次实验的局限所在：以RUT 和13C-UBT检测结果得出的Hp 诊断结果作为标准来验证三种血清Hp 抗体检测试剂用于诊断Hp 的性能，不能完全真实反映Hp 感染和未感染情况。

未经抗Hp 治疗的患者若被Hp 感染，血清抗体会持续存在。血清Hp 抗体检测试验的优点包括了其诊断准确度不受溃疡出血、胃萎缩和抗生素或氢离子泵抑制剂使用的影响，这些因素都在其他的侵入性或非侵入性试验中都会导致假阴性结果的产生。然而，由于血清Hp 抗体效价在根治成功后仍能维持很长时间，不能用其评估根治疗法的疗效，也不能区分Hp 的近期感染和既往感染。尽管本研究排除抗Hp 治疗、近期使用氢离子泵抑制剂、抗生素和铋剂等影响因素，但是多种原因（胃中Hp菌体分布不均和样本菌量不足、口腔和食道中细菌的污染、不同表型和基因型Hp 等）以及不同试验各自的性能差异仍干扰检测结果准确性，因此本研究中三种血清Hp 抗体检测试剂结果与RUT 和13C-UBT 检测结果存在差异。

综上所述，三种试剂中C试剂检测结果与RUT 和13C-UBT 的检测结果一致性最好，以RUT和13C-UBT 的检测结果作为Hp 诊断标准，C试剂的准确度达到了88.75%，可以作为未经抗Hp 治疗患者的Hp 诊断试验。