高危型HPVE6/E7mRNA检测在新疆维吾尔族妇女宫颈病变分层管理中的应用价值

朱行行，吕锡芳

石河子大学医学院第一附属医院妇科，新疆石河子 832000

宫颈癌属于临床一类常见恶性肿瘤，目前该病的早期诊断需要结合宫颈细胞和HPV检查，然后借助阴道镜检查，最后给予宫颈活检，活检结果作为诊断依据[1]。HPV持续感染是该病出现的重要原因之一，当前疾病筛查从只单纯依靠细胞学变成HPV DNA检查，可促进诊断效能提升[2-3]。然而，就HPV-DNA而言，仅仅是对疾病的病因进行分析。HR-HPV DNA可能不会引起细胞癌变。只有更多的病毒持续转录E6和E7mRNA，增加癌蛋白的分泌，才能最终出现癌变[4-5]。HR-HPV检查由DNA进入到E6以及E7mRNA时代，一定程度提升了宫颈癌筛查的精准性。新疆属于国内宫颈癌的高发地区，同时维吾尔族患病率及病死率较其他民族高，发病年龄也比其他民族早，已经严重影响到患者身心健康。该文随机选取2019年10月—2021年10月在该院妇科门诊行TCT检查为阳性（≥ASCUS）同时HC2初筛阳性的维吾尔族患者共100例为研究对象，分析检测HR-HPVE6/E7mRNA在不同级别宫颈病变中的表达情况，为宫颈病变的分层管理提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取在该院妇科门诊行TCT检查为阳性（≥ASCUS）同时HC2初筛阳性的维吾尔族患者共100例为研究对象，依据随机数表法将其中50例归为观察组，余下50例归为对照组，其中观察组年龄21～70岁，平均（42.38±5.32）岁；文化程度：初中或以下20例，高中或以上30例。对照组年龄22～70岁，平均（42.46±4.68）岁；文化程度：初中或以下19例，高中或以上31例。两组一般资料对比差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。该研究得到医学伦理委员会批准。

纳入标准：①均同时开展HPVE6/E7mRNA检测及阴道镜下宫颈活检；②非妊娠期和哺乳期女性；③以往未开展过宫颈手术；④均自愿参与此次研究并签署有关书面说明。排除标准：①近3个月之内应用过阴道抗病毒药物者；②伴阴道和宫颈部急性炎症者；③其他部位存在恶性肿瘤者；④子宫切除术后者；⑤宫颈曾开展过微波或者激光等物理治疗者。

1.2 方法

1.2.1 TCT检查 取膀胱截石卧位，采取一次性的窥阴器暴露患者宫颈部，经专门的标本采集刷在鳞状交接位置或者宫颈管进行5圈逆时针旋转，放置标本到保存液内。病理科人员完成制片后，两名病理科医师开展阅片，产生意见上的分歧时需协商后统一意见，结果分类标准如下：（1）未观察到上皮内存在病变细胞或者恶性细胞（NILM）：包含正常范围与良性反应细胞改变（轻中重度炎症反应）。（2）鳞状上皮内病变：①不明诊断意义不典型性鳞状细胞（ASC-US）与不排除高级上皮内病变不典型性鳞状细胞（ASC-H）；②低级鳞状上皮内病变（LSIL）；③高级鳞状上皮内病变（HSIL）；④鳞状细胞癌（SCC）。（3）腺细胞病变：①不典型腺细胞（AGC）；②倾向瘤变不典型腺细胞；③宫颈管原位腺癌；④腺癌（AC）。

1.2.2 HPV DNA有关检测 对照组予以HPV DNA检测，经凯普核酸分子杂交有关基因分型检测盒对病毒不同类型进行划分，对HPV DNA共21个病毒亚型开展检测，该次研究中HPV阳性指的是高危HPV阳性，包 括HPV68、66、59、58、53、52、51、45、35、33、31、18及16型。提取宫颈部分泌物细胞DNA，开展PCR基因扩增，于扩增的芯片内完成导流杂交操作，再予以显色。

1.2.3 HR-HPVE6/E7mRNA有关检测 观察组除开展对照组检测之外加以HR-HPVE6/E7mRNA检测，选择郑州科迪亚生物技术有限公司生产宫颈稳态检查试剂盒，经QuantivirusTM支链杂交捕获DNA原理，定量检测HR-HPV共14种，依次是HPV68、66、59、58、56、52、51、45、39、35、33、31、18及16型，存在以上一种则属于阳性，检测结果为计算机结合E6/E7mRMA拷贝数和产品的临床实验阈值自行得出，拷贝数≥1 copies/mL为阳性，拷贝数＜1 copy/mL为阴性。

1.2.4 阴道镜和病理组织检查 经阴道镜观察宫颈上皮和阴道各壁改变，后在宫颈上涂抹碘溶液，一定放大倍数下摄片保存，在可疑病灶处取活检，若阴道镜检查不满意，则行宫颈管搔刮术。固定标本，贴上标签送检。病理结果报告为：慢性宫颈炎、宫颈低级别上皮内病变（CINⅠ级）、宫颈高级别上皮内病变（CINⅡ级）、宫颈高级别上皮内病变（CINⅢ级）、宫颈鳞状细胞癌或宫颈腺癌。

1.3 观察指标

将宫颈活检病理学检查结果作为金标准，观察两组在不同细胞学与组织学分级中的阳性率、筛查费用及阴道镜转诊率情况。

1.4 统计方法

2 结果

2.1 两组不同细胞学分级中阳性率对比

病理检查显示NILM共4例，ASCUS共15例，LSIL共15例，HSIL共12例，宫颈癌共4例。两组在NILM、LSIL、HSIL和宫颈癌中的阳性率对比，差异无统计学意义（P＞0.05），但观察组在ASCUS中的阳性率低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），且伴随细胞学分级升高，两组阳性率也在相应升高，见表1。

表1 两组不同细胞学分级中阳性率对比[n(%)]

2.2 两组不同级别组织学病变中阳性率对比

病理检查显示慢性子宫颈共5例，CINⅠ级共14例，CINⅡ级共15例，CINⅢ级共12例，宫颈浸润癌共4例。两组在慢性宫颈炎、CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈浸润癌中的阳性率对比，差异无统计学意义（P＞0.05），但观察组在CINⅠ级中的阳性率低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组不同级别组织学病变中阳性率对比[n(%)]

2.3 两组在宫颈癌筛查及分流中的费用及阴道镜转诊率对比

观察组筛查费用为（1 254.50±258.60）元低于对照组（1 735.20±274.00）元，差异有统计学意义（t=9.022，P＜0.001）；观察组筛查的阴道镜转诊率为8.00%（4/50）低于对照组24.00%（12/50），差异有统计学意义（χ2=4.762，P=0.029）。

3 讨论

宫颈癌属于威胁女性健康的一类常见恶性肿瘤，其出现原因已经完全明确，同时疾病是可以预防的。细胞学、HPV DNA两项检查能尽早观察到CIN同时阻止其往宫颈癌发展，降低宫颈癌出现和病死率[6-7]。但随着HPV DNA于一线筛查工作中的应用，其缺陷逐渐显现出来，即虽然感染HR-HPV属于引发宫颈上皮瘤变和宫颈癌重要原因，但较多HPV感染是一过性的，于6～24个月之内不需进行临床处理能自行转归，即便存在感染，HPV DNA也无法反映出感染病毒后的活跃状况，无法确定宫颈病变严重度，从而不能对宫颈病变开展分层管理[8]。经临床研究显示，HR-HPV各项癌基因内，E6和E7属于宫颈癌主要致病癌基因，HR-HPV将宿主细胞感染之后，癌基因中E6及E7经转录生成E6、E7mRNA，后经翻译生成E6、E7癌蛋白[9-10]。E6与E7分别和宿主细胞p53、pRB等抗癌蛋白合体，促使细胞凋亡，并对染色体的稳定程度带来影响，使得细胞呈现出永生化，出现癌变，结合HPV E6/E7mRNA表达情况能对宫颈上皮细胞的癌变进展开展预测[11-12]。

该次研究发现，NILM、ACUS、LSIL、HSIL和宫颈癌的HR-HPVE6/E7mRNA阳性率分别为25.00%、26.67%、80.00%、91.67%、100.00%，提示伴随细胞病理学有关分级上升，HR-HPVE6/E7mRNA和HPV DNA阳性率也在相应上升。HR-HPVE6/E7mRNA在NILM、LSIL、HSIL和宫颈癌中的阳性率为25.00%、80.00%、91.67%、100.00%和HPV DNA的50.00%、86.67%、83.33%、100.00%相近（P＞0.05），但观察组在ASCUS中的阳性率为26.67%低于HPV DNA的73.33%（P＜0.05），该结果出现原因在于HPV DNA检测是阳性者的感染多呈现一过性，检测时假阳性情况较多，结合检测结果虽提示当前未感染上HPV，但不能提供出病毒引发癌症的可能性[13-14]。HSIL与SCC的阳性率相近，但HR-HPVE6/E7 mRNA高表达，提示HPV持续感染有一定的可能性，病毒基因与人类基因结合，HPV相关癌基因E6/E7不断复制和转录，使癌蛋白分泌增多，会引起恶性变化[15-16]。和单独HPV DNA检测相比较，联合HR-HPVE6/E7mRNA检测对病变、病变进展状态更注重，和高级病变之间联系更密切，属于高级病变特异度较高的标志物之一。

于组织病理学有关分级中，赵涌等[17]发现，慢性宫颈炎、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈浸润癌的HR-HPVE6/E7mRNA阳性率分别为15.60%、31.80%、72.30%、90.30%、100.00%，提示伴随宫颈病变级别升高，HR-HPVE6/E7mRNA阳性率相应升高。该次研究发现，慢性宫颈炎、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈浸润癌的HR-HPVE6/E7mRNA阳性率分别为20.00%、21.43%、80.00%、91.67%、100.00%，这和赵涌等研究结果一致，说明伴随宫颈病变分级升高，HR-HPVE6/E7mRNA阳性率也在不断上升。HR-HPVE6/E7mRNA在慢性宫颈炎、CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈浸润癌中的阳性率为20.00%、80.00%、91.67%、100.00%和HPV DNA的40.00%、86.67%、91.67%、100.00%相近（P＞0.05），但观察组在CINI级中的阳性率为21.43%低于对照组78.57%（P＜0.05），考虑原因是该类患者多数HPV DNA处在游离状况，感染呈现一过性，暂未到达宿主细胞有关DNA内，从而HR-HPVE6/E7mRNA检测结果为阴性。于CINⅡ级或者Ⅲ级中，两组检出率相近，高级病变中伴随HPV DNA整合至宿主生成持续感染，病毒癌基因呈现过表达，产生较多癌蛋白E6/E7导致癌症发生，使得宫颈病变加重。蒋欣等[18]对妇科门诊就诊的宫颈癌筛查者415例开展研究，均予以HR-HPVE6/E7mRNA和HPV DNA检测，最终结果显示，HR-HPVE6/E7mRNA对CIN2+的诊断敏感度为85.20%与HPV DNA的91.90%相近，HR-HPVE6/E7mRNA诊断CIN2+的准确度及特异度达到80.90%、76.90%高出HPV DNA的70.90%、51.00%。该次研究的不足之处在于未对HRHPVE6/E7mRNA的诊断效能开展分析，还需在日后研究中进一步完善。此外，联合HR-HPVE6/E7mRNA、HPV DNA的筛查费用及阴道镜转诊率比HPV DNA单项筛查更低，说明临床在HPV DNA及TCT一线筛查前提下将HR-HPVE6/E7mRNA当作二线筛查方法能避免不必要检查及治疗，减轻患者经济压力。

综上所述，HR-HPVE6/E7mRNA检测在新疆维吾尔族妇女宫颈病变分层管理中有着重要应用价值，可当作二线筛查指标，能有效检出高级上皮内瘤变和宫颈癌，使一过性的HPV感染检出率降低，减少对于疾病严重度误判，降低患者的筛查费用及阴道镜转诊率。