调经止痛胶囊牡丹皮提取工艺研究

郭秀丽

调经止痛胶囊是由地黄、牡丹皮、白芍、川芎、炒栀子等十五味组成的胶囊，具有清热凉血、止痛调经之效。用于月经不调，气滞血瘀型痛经等。经文献及《中华人民共和国药典》检索，牡丹皮[1]味苦、辛、微寒，归心、肝、肾经，功效清热凉血，活血化瘀。用于热入营血，温毒发斑，吐血衄血，夜热早凉，无汗骨蒸，经闭痛经，跌扑伤痛，痈肿疮毒。粉性较强，主要含丹皮酚挥发性成分，还含有芍药苷等成分。现代药理研究表明牡丹皮具有明显的抗菌消炎、保肝护肝等作用，还有抗动脉硬化、保护心肌、改善微循环、镇痛等作用，主要是其中丹皮酚发挥药理作用。本研究采用单因素实验法对丹皮酚挥发性成分主要采用水蒸气蒸馏法提取工艺筛查，为后期制剂设计提供基础。

1 仪器与试药

R1002型旋转蒸发器(上海申顺生物科技有限公司)；LC-20AT型高效液相色谱仪(日本岛津)；HS3120型超声波提取器(天津市恒奥科技发展有限公司)；AB135-S十万分之一型天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)；ATY124型万分之一天平(日本岛津)；HH型电热恒温水浴锅(江苏中大仪器科技有限公司)。

安徽亳州药材市场购买的牡丹皮，经医院药检室确认为正品。

中国食品药品检定研究院，批号：110708-200506，丹皮酚对照品；分析纯级别：莱阳市康德化工的盐酸、氢氧化钠、醋酸、乙醇等。色谱纯级别：乙腈、甲醇、磷酸(美国TEDIA公司)等。

2 方法与结果

2.1 丹皮酚含量测定方法液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水(38∶62)为流动相；检测波长274 nm，流速1.0 ml/min。对照品溶液的制备：取丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml约含25 μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取牡丹皮干膏粉适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，即得[2]。

2.2 牡丹皮水蒸气蒸馏提取工艺参数筛选牡丹皮中的丹皮酚为挥发性成分，具有清热凉血、活血化瘀作用，须单独提取保留，采用双提法，对药渣和水提液保留另作处理。提取挥发性成分最常用的方法就是水蒸气蒸馏法[3,4]，操作简单方便，以丹皮酚提取率为指标，采用单因素考察试验法对牡丹皮提取纯化工艺主要参数进行优选。

2.2.1 温浸时间对丹皮酚提取率的影响精密称取牡丹皮粉末(过40目筛)100.00 g，加入14倍量的水，分别温浸0、1 h、3 h、5 h、7 h进行水蒸气蒸馏，得1000 ml蒸馏液，混匀，取1 ml蒸馏液放置50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。参考第2.1项下测定方法测定并计算丹皮酚提取率。浸泡对丹皮酚提取率有影响，浸泡3 h后随着时间的延长对丹皮酚提取率的影响差别不大，可选择浸泡3 h后，再进行水蒸气蒸馏。结果见表1。

表1 不同浸泡时间对丹皮酚提取效果的影响

2.2.2 料液比对丹皮酚提取率的影响精密称取牡丹皮粉末(过40目筛)100.00 g，分别加入12倍、14倍、16倍、18倍量的水，温浸 3 h进行水蒸气蒸馏，得1000 ml蒸馏液，混匀，取1 ml蒸馏液放置50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。参考2.1项下测定方法测定并计算丹皮酚提取率。料液比为1∶14左右后，丹皮酚提取率继续升高不明显。当料液比小于1∶14时，随着加水量的增加丹皮酚提取率急剧增加；当料液比大于1∶14时，随着加水量的增加丹皮酚提取率无明显变化。料液比过小，丹皮酚不能完全溶出，料液比高于14倍时，对有效成分溶出率效应不大，从节约资源方面考虑，选择料液比1∶14最佳。结果见表2。

表2 不同料液比对丹皮酚提取效果的影响

2.2.3 收集馏液倍量对丹皮酚提取率的影响精密称取牡丹皮粉末(过40目筛)100.00 g，加入14倍量的水，温浸 3 h进行水蒸气蒸馏，得800 ml蒸馏液，分段收集蒸馏液，收集3段，每段100 ml,蒸馏液总共收集1100 ml，混匀，取1 ml蒸馏液放置50 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。参考2.1项下测定方法测定并计算丹皮酚提取率。收集10倍量馏液丹皮酚的提取率己达78.99%，且已耗时较长，继续蒸馏对丹皮酚提取率影响不大，且考虑到牡丹皮中水溶性成分避免长时间受热，选择收集10倍量蒸馏液讲行后续处理。结果见表3。

表3 不同收集馏液倍数对丹皮酚提取效果的影响

2.2.4 加盐量对丹皮酚提取率的影响精密称取牡丹皮粉末(过40目筛)100.00 g，加入14倍量的水，温浸 3 h进行水蒸气蒸馏，得1000 ml蒸馏液，用盐析冷藏析晶法处理蒸馏液，蒸馏液中分别加入1.0%，1.5%，2.0%，2.5%，3.0%的氯化钠，搅拌使溶解，静置，冷藏(2～10 ℃)24 h，滤过，得丹皮酚结晶，减压干燥(40～45 ℃，-0.08 MPa)，称重。当加盐量为2.0%时，丹皮酚提取率达到最大值。当加盐量小于2.0%时，随着加盐量的增加丹皮酚提取率逐渐增加；当加盐量大于2.0%时，随着加盐量的增加丹皮酚提取率增加不明显，因此，选择加盐量2.0%为最佳提取条件。结果见表4。

表4 加盐量对丹皮酚提取效果的影响

综合，最终丹皮酚的提取工艺为：加入14倍量的水，温浸 3 h进行水蒸气蒸馏，收集10倍量馏分，馏出液加入2.0%的氯化钠，于冰箱冷藏24 h，析晶，抽滤，干燥器干燥，称重，即得丹皮酚结晶，提取水液及药渣备用。

3 讨论

挥发油是中药牡丹皮中的主要药用活性成分之一。提取中药挥发油的方法有多种，其中以共水蒸馏最为常用，为提取植物挥发油的经典方法，同时也是《中华人民共和国药典》所载方法[5]。本研究采用水蒸气蒸馏法提取丹皮酚，提取率较高，可满足后续制剂的要求。通过查阅文献发现，影响丹皮酚提取的因素有很多，主要有加水量、加盐量、提取时间、浸泡时间、冷藏时间等。本研究设计了4个影响因素：温浸时间、料液比、收集馏液倍量、加盐量进行考察。在提取分析的过程中，又发现流速在实际研究中并不易控制，主要因为随着提取容器内水量减少，流速也相应减慢；加一定量的氯化钠或硫酸钠均可提高丹皮酚的提取效果，而氯化钠的效果更好一些，由此可见，牡丹皮水蒸气蒸馏提取丹皮酚的影响因素较多。结果表明，丹皮酚的提取工艺是完全可行的，具有操作简单、可控等优点。

经过实验研究最终确定肝胃疏颗粒处方中牡丹皮的提取及丹皮酚包合工艺为：牡丹皮加入14倍量的水，温浸3 h进行水蒸气蒸馏，收集10倍量馏分，馏出液加入2.0%的氯化钠，于冰箱冷藏24 h，析晶，抽滤，干燥器干燥，称重，即得丹皮酚结晶，提取水液及药渣备用，为后续制剂打下基础。