56 510例患者不规则抗体及特异性检测结果分析

洪毅，李菲，杨阳，贾万里，孟洁，梁蕊，剌芝芳，叶维莉

西安高新医院输血科，陕西 西安 710075

不规则抗体筛查是指检测患者血清中除ABO以外的其他血型系统的抗体，不规则抗体主要由相关的免疫刺激产生，包括临床输血和妊娠。不规则抗体是导致交叉配血不相合、迟发性溶血性反应、新生儿溶血病以及ABO血型正反定型不符的重要因素之一[1]。故对临床患者的不规则抗体筛查有着重要的临床意义。近年来，随着相关输血实验技术水平的不断提高以及全自动血型仪的广泛使用，使得不规则抗体筛查得到普及，进一步保障了患者的输血安全。现将我院近年来对患者的不规则抗体筛查结果分析如下：

1 资料与方法

1.1 标本来源 西安高新医院输血科2010年1月至2019年12月的门急诊患者、有备血需求住院患者及常规检测不规则抗体筛查的患者共56 510例，标本要求为采集每例患者EDTA-K2抗凝静脉血3 mL，用于血清学试验的检测。

1.2 仪器与试剂 全自动血型分析仪(达亚美，瑞士)、离心机(久保田，日本)、水浴箱(GFL，德国)、孵育器(达亚美，瑞士)；ABO血型正反定型和RhD血型鉴定卡(达亚美，瑞士)、筛查细胞及谱细胞(上海血液生物医药有限责任公司)；抗-C、抗-c、抗-E、抗-e、抗-M、抗-N、直接抗球蛋白试剂(上海血液生物医药有限责任公司)；抗Lea及抗Leb(Millipore，美国)；低离子抗人球蛋白卡(达亚美，瑞士)。试验中使用的所有试剂批检均合格，并且均在相应的有效期内使用。

1.3 检验方法

1.3.1 血型鉴定 使用全自动血型分析仪，对所有患者标本进行ABO及RhD血型的鉴定。

1.3.2 抗体筛查 应用低离子抗球蛋白卡进行不规则抗体筛查。不规则抗体筛查阳性的所有标本均需进行复检，采用手工试管法进行复检，同时排除人为、操作、试剂等的因素，确保试验结果准确性。

1.3.3 抗体鉴定 对不规则抗体筛查阳性的样本，送至陕西省血液中心血型参比室进一步进行抗体特异性的鉴定。参比实验室所使用的不规则抗体鉴定用谱细胞为荷兰Sanquin公司，试验方法包括盐水介质法、特殊介质凝聚胺法以及经典抗球蛋白法(试管法)三种方法，对送检的不规则抗体筛查阳性标本进行抗体鉴定，并对所检出的抗体做效价测定[2-3]。

1.3.3.1 特异性抗体的鉴定 采用盐水介质法、特殊介质凝聚胺法、经典抗球蛋白法(试管法)三种方法，鉴定特异性同种抗体的标准为患者血浆或血清与谱细胞反应有一定的格局，同时凝集强度在1+～4+。

1.3.3.2 非特异性抗体的鉴定 其鉴定标准为患者血浆或血清与谱细胞及自身细胞反应的凝集强度无明显的差别，同时测定的患者红细胞放散液与谱细胞反应在凝集强度上也均一致。

1.3.3.3 联合抗体的鉴定 试管法正反定型中出现正反不一致，同时出现抗体筛查阳性以及交叉配血结果不相合，应该考虑血清中存在IgM联合IgG多种不规则抗体，且在不同反应温度有不同的反应格局。对此类抗体鉴定方法为：(1)取患者血浆各100 μL分别加于11支试管中，再加入50 μL谱细胞于前10支试管，最后一管加入自身细胞50 μL，室温立即离心，多次离心分别记录反应结果；以及增强反应试验即将试管放置于4℃冰箱10 min后离心观察凝集情况，对照谱细胞格局表，分析IgM类同种抗体的特异性。(2)将盐水介质中有凝集的试管在37℃水浴箱轻摇3 min，观察盐水法凝集强度是否有减弱，若有减弱，继续孵育30 min进行经典抗球蛋白试验，水浴箱孵育30 min后生理盐水洗涤3次，加入抗球蛋白试剂，离心后观察是否有凝集，若凝集，对照谱细胞反应格局表，分析IgG类同种抗体特异性。(3)对于同种性质的联合抗体，应该根据血清与谱细胞反应格局的凝集强度的强弱差别，逐一鉴定，如有必要时可通过吸收放散试验进行进一步的鉴定。

2 结果

2.1 不规则抗体筛查的检出率 56 510例标本中共检出不规则抗体170例，检出率为0.30%，170例不规则抗体标本送陕西省血液中心做抗体鉴定，其中男性33例(19.4%)，女性137例(80.6%)。

2.2 不规则抗体筛查分布 170例中同种特异性抗体有145例，自身抗体25例，其中同种特异性抗体主要为抗-E 62例(36.5%)及抗-D 13例(7.64%)抗体，见表1。

表1 不规则抗体种类的分布

2.3 不规则抗体在各血型系统中的分布 不规则抗体在Rh血型系统中112例(76.9%)、Lewis系统13例(6.3%)、MNS系统20例(13.8%)，见表2。

表2 同种不规则抗体在各血型系统中的分布

3 讨论

本文对56 510例门急诊患者、住院备血患者进行输血前不规则抗体筛查及抗体特异性鉴定结果的分析研究，检出不规则抗体170例，检出率为0.3%，其中男性患者33例，占检出率19.4%，女性患者137例，占检出率的80.6%。结果显示女性患者比男性患者产生不规则抗体的比率要高，主要为女性妊娠的原因比男性有更多得接受同种免疫刺激的机会，即女性同时存在双重免疫刺激机会是由妊娠和输血所引起的，因此女性患者不规则抗体筛查结果为阳性的检出率高于男性患者[4]。本次不规则抗体鉴定试验数据统计显示：IgG类不规则抗体占61.2%，IgM类所检测出的不规则抗体占22.8%，IgG联合IgM不规则抗体占5.52%；其中Rh血型系统的所检测出的不规则抗体比例占总比率的76.9%；Lewis系统不规则抗体比例占总比率的9.3%；MNS系统不规则抗体比例占总比率的13.8%。

本试验数据表明，Rh系统产生的不规则抗体比率较高。Rh系统抗体为免疫性IgG抗体，且多具有临床意义，此类抗体可结合已致敏在患者红细胞上的相应抗原，形成抗原抗体复合物，被机体巨噬细胞系统攻击识别，引起血管外溶血，是迟发性溶血性输血反应[5]。我国输血现状为只对患者的ABO血型及RhD血型进行输血前检测，而对Rh血型系统的其他抗原包括C、c、E及e不做为常规检测[6]，采用随机配合性输血，易导致患者在输血后产生针对输入性抗原的抗体。本次试验数据统计显示：83例(48.8%)抗-E，抗-cE，抗-Ce抗体的产生均与患者多次输血有关，而13例产生抗-D的患者均为RhD阴性孕妇，均有孕产史。RhD阴性孕产妇患者在接受到一定量的RhD阳性红细胞的刺激后，50%～70%的孕产妇会产生Rh抗D抗体，主要是由于E、C、c、e这四个抗原的免疫原性明显弱于RhD抗原。但是，在本调查研究中发现，其产生的对应抗体中，抗E是最常见的抗体，其次为抗c抗体，而抗C与抗e经常同时出现于同一样本内，这也与相关的调查结果一致[7]。因此，在以后的输血前检测中是否可将患者Rh血型系统做为常规检测，同时输血时选择与患者Rh血型完全一致的血液进行输注，避免患者因输血免疫产生抗体，或者是因免疫回忆产生的溶血性输血反应，是值得进一步探讨的问题。

MNS血型系统抗体是最为常见的IgM类抗体，是天然产生的，MNS血型系统中以抗M抗体常见，并且在血浆或血清中通常是以IgM形式存在。抗M抗体可通过妊娠、输血免疫刺激产生，但也有无免疫刺激产生的个体，临床意义显著的是IgG性质的抗M抗体。IgG-M抗体可导致交叉配血不和也有相关文献报道[8]，还可发生比较严重的新生儿溶血病，总之，MNS系统抗体多对配血结果影响不大，但在血型鉴定中易干扰反定型，影响血型鉴定的结果。Lewis血型系统中有6个血型抗原，Lea和Leb是最常见的两个血型抗原，这两种血型抗原与其他血型系统的抗原有所不同，主要是由于Lewis血型抗原最初存在于人体的血清和人体的唾液等分泌液中，以水溶性抗原的形式为主。抗Lea或抗Leb血清反应的特性是被红细胞表面所吸附，且可以放散，故由抗-Lea和抗-Leb抗体引起的输血不良反应较少，但也有相关个例报道[9]。介于MNS系统与Lewis系统抗体多为IgM性质，有补体结合性，且偶有在37℃条件下有反应性的抗体活性，故对于此类患者的输血应尽量选择相应血型抗原为阴性的血液，交叉配血后进行配合性输注，减少输血不良反应的发生。

IgG联合IgM抗体的检出是根据不同抗体性质进行鉴别，本研究中的一例抗-cE联合抗-M是较为常见的混合抗体，在室温条件下反应检出抗-M抗体，37℃反应抗-M无活性，再进行经典抗球试验，检出抗-cE抗体，最终选择cE抗原及M抗原均阴性的红细胞与患者进行交叉配血。

自身抗体的检出可提示患者有可能存在免疫系统的疾病，尤其是自身免疫性溶血性贫血，此类患者的试验特点是有可能存在ABO正反定型不符、抗体筛查试验阳性、自身反应阳性、交叉配血不相合及谱细胞反应全凝集等情况，对于自身抗体反应特性的鉴定，需排除同种特异性抗体的存在。此次研究中出现的25例自身抗体均为非特异性自身抗体，即与谱细胞反应凝集强度一致，与自身细胞反应强度相当，放散液反应无特异性。对于此类患者输血，严格把控输血指征并结合临床症状，结合药物治疗，降低溶血速率[10]。

综上所述，不规则抗体的筛查及特异性的鉴定，可以发现针对临床输血有意义的不规则抗体，同时了解同种特异性抗体的种类、性质以及实验室的检测方法等，可以最大程度的减少溶血性输血反应的发生，提前预知抗体属性，对于保障临床患者输血的安全性、及时性、有效性有着较为重要的临床意义。