下呼吸道病原体检测中行恒温核酸扩增芯片法的应用价值

韩磊 王书平

【摘 要】目的：探討下呼吸道病原体检测中行恒温核酸扩增芯片法的应用价值。方法：收集我院2019年6月至2021年6月108例下呼吸道感染患儿的病原体样本，所有样本病原体均给予恒温核酸扩增芯片法与细菌培养法检测，痰涂片抗酸染色、RNA恒温扩增，结核分枝杆菌检测运用静脉血γ干扰素释放试验。结果：在108例样本中，恒温扩增芯片法检出阳性47例（占43.52%），其中32例仅有1种病原体，6例有2种病原体，4例有3种病原体，1例有4种病原体，1例有5种病原体。在10例结核分枝杆菌标本中，恒温扩增芯片法均检出阳性，SAT-TB检出阳性7例，A·TB检出阳性3例，抗酸染色检出阳性4例。结论：恒温核酸扩增芯片法可同时检出13种病原体，在流感嗜血杆菌与肺炎链球菌中恒温核酸扩增芯片法的检出率显著高于细菌培养，在结核分枝杆菌中恒温核酸扩增芯片法的阳性检出率显著高于γ干扰素释放试验与痰涂片抗酸染色，且恒温核酸扩增芯片法操作简单，结果快速，在小儿下呼吸道感染诊断及指导临床治疗方面具有独特优势。

【关键词】下呼吸道感染；病原体检测；恒温核酸扩增芯片法；阳性检出率

The application value of constant temperature nucleic acid amplification chip method in the detection of lower respiratory tract pathogens

Han Lei1， Wang Shuping2

1. Yinchuan maternal and child Health care Hospital， Yinchuan Ningxia 750001， China； 2. Maternal and child health care Hospital of Ningxia Autonomous Region， Yinchuan Ningxia 750001， China

【Abstract】Objective：To explore the application value of constant temperature nucleic acid amplification chip method in the detection of lower respiratory tract pathogens. Methods： Collecting pathogen samples from 108 children with lower respiratory tract infections in our hospital from June 2019 to June 2021. The pathogens in all samples were tested by constant temperature nucleic acid amplification chip method and bacterial culture method， acid-fast staining of sputum smear， constant temperature amplification of RNA， and venous blood interferon-gamma release test for detection of mycobacterium tuberculosis. Results： Among the 108 samples， 47 cases （43.52%） were positive by the constant temperature amplification chip method， of which 32 cases had only one pathogen， 6 cases had two pathogens， 4 cases had three pathogens， and 1 case had four pathogens， and 1 case has five pathogens. Among the 10 samples of Mycobacterium tuberculosis， the thermostatic nucleic acid amplification chip method was positive， 7 were positive for SAT-TB， 3 were positive for A？TB， and 4 were positive for acid-fast staining. Conclusions： The constant temperature nucleic acid amplification chip method can simultaneously detect 13 pathogens at the same time， the detection rate of the constant temperature nucleic acid amplification chip method in haemophilus influenzae and streptococcus pneumoniae is significantly higher than that of bacterial culture， and the positive detection rate of the constant temperature nucleic acid amplification chip method in mycobacterium tuberculosis is significantly higher than that of γ interferon release test and acid-fast staining of sputum smear，and the constant temperature nucleic acid amplification chip method has the advantages of simple operation and fast results， have unique advantages in the diagnosis of children’s lower respiratory tract infections and the guidance of clinical treatment.

【Key？Words】Lower respiratory tract infection； Pathogen detection； constant temperature nucleic acid amplification chip method； Positive detection rate

下呼吸道感染是儿科临床较为常见的疾病类型，也是导致患儿死亡的主要原因，早期确诊并给予对症治疗是改善预后的关键所在。以往临床常采用细菌培养法来明确病原菌感染类型并指导临床治疗，但敏感性较低，且耗时长，常会耽搁患者最佳治疗时间而导致病情加重[1]。恒温核酸扩增芯片法是利用环介导恒温扩增原理，可同时检测多种病原菌，在下呼吸道感染诊断中具有敏感度高的特点[2]。鉴于此，本研究收集我院108例下呼吸道感染患儿的病原体样本，探讨恒温核酸扩增芯片法的应用价值。

1.1 一般资料

收集我院2019年6月至2021年6月108例下呼吸道感染患儿的病原体样本，所有患儿均经临床相关检查确诊，取痰液标本且均满足鳞状上皮细胞在10/LP（低倍镜视野）以内，多形核白细胞在25/LP以上，样本量在6mL以上[3]，患儿家长充分知情后自愿签订同意书，且排除合并其它感染性疾病、近2周内应用药物治疗及不愿配合本次研究者。其中男58例，女50例，年龄32天～8岁，平均年龄（4.32±0.57）岁。

1.2 仪器与试剂

RTisochipTM-A恒温扩增微流控芯片核酸分析仪，博奥晶典芯片呼吸道病原菌核酸检测试剂盒，血平板，VITEK2-Com-pact细菌鉴定药敏仪，巧克力平板，微量移液器，离心管，麦康凯培养基，RNA恒温扩增结核分枝杆菌核酸试剂盒（SATTB），抗酸染色试剂，革兰染色试剂，结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒（A·TB）。

1.3 方法

痰标本进行初筛确保合格后接种血平板、巧克力平板培养24h或48h，培养条件：温度控制在35℃，CO2浓度为5%，分纯后鉴定致病菌。按照博奥晶典芯片呼吸道病原菌核酸检测试剂盒提取核酸，完成加样、检测，最后判断结果。根据SAT-TB说明书完成SAT-TB检测，根据A·TB说明书完成结核分枝杆菌γ干扰素释放试验。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析。计数资料采用（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（χ±s）表示，进行t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2.1 恒温核酸扩增芯片法检测结果分析

在108例样本中，检出阳性47例（占43.52%），其中32例仅有1种病原体，6例有2种病原体，4例有3种病原体，1例有4种病原体，1例有5种病原体。病原菌种类：流感嗜血杆菌（16株），肺炎链球菌（13株），铜绿假单胞菌（12株），结核分枝杆菌（13株），肺炎克雷伯菌（12株），金黄色葡萄球菌（8株），嗜麦芽窄食单胞菌（5株），大肠埃希菌（5株），鲍曼不动杆菌（1株），衣原体（1株）。

2.2 细菌培养法检测结果分析

在108例样本中，检出阳性12例（占11.11%），病原菌种类：流感嗜血杆菌（4株），肺炎链球菌（1株），铜绿假单胞菌（5株），大肠埃希菌（1株），鲍曼不动杆菌（1株）。

2.3 不同检测方法在结核分枝杆菌中的检测情况分析

在10例结核分枝杆菌标本中，恒温扩增芯片法均检出阳性，SAT-TB检出阳性7例，A·TB检出阳性3例，抗酸染色检出阳性4例，见表1。

细菌培养法是感染性疾病常用的检测方法，但其敏感性低，检测周期长，常难以满足肺部感染治疗的要求。恒温扩增芯片是基于环介导恒温扩增原理检测常见肺炎病原体，该芯片可同时检测13种病原体并可筛选耐甲氧西林葡萄球菌的mecA基因，且检测周期短，从痰标本处理到出检测结果仅需2h，且敏感度高，显著弥补了常规细菌培养法的不足[4]。本研究结果表明，在108例样本中，恒温扩增芯片法检出阳性47例（占43.52%），共检出病原菌10种，而细菌培养法检出阳性12例（占11.11%），共检出病原菌5种。提示恒温扩增芯片法在病原菌分布与阳性检出率方面也存在明显差异性。检测结果可能与痰标本被口腔污染或实验室检测条件有限有关，而恒温扩增芯片法更能反映呼吸感染的真实病原[5]。结果还表明，在10例结核分枝杆菌标本中，恒温扩增芯片法均检出阳性，SAT-TB检出阳性7例，A·TB检出阳性3例，抗酸染色检出阳性4例。恒溫扩增芯片法与SAT-TB检测能力相当，A·TB检测能力较低。淋巴细胞不足或活性降低将影响干扰素能力而导致假阴性[6]。恒温扩增芯片法还可检测衣原体、肺炎支原体及军团菌，但病程满足2周左右才可在血清中出现相应抗体，诊治价值有限[7]。

综上所述，恒温核酸扩增芯片法可同时检出13种病原体，在流感嗜血杆菌与肺炎链球菌中恒温核酸扩增芯片法的检出率显著高于细菌培养，在结核分枝杆菌中恒温核酸扩增芯片法的阳性检出率显著高于γ干扰素释放试验与涂片抗酸染色，且恒温核酸扩增芯片法操作简单，结果快速，在小儿下呼吸道感染诊断及指导临床治疗方面具有独特优势。

参考文献

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