血红蛋白电泳联合地贫基因检测在地中海贫血诊断中的应用

李爱丽，陈瑞芬，吴丽娜，黄丽芳

广东省韶关市第一人民医院检验科，广东 韶关 512000

地中海贫血是东南亚地区及我国南方地区最常见、危害最大的遗传病，常以易疲劳和轻度贫血为主要临床表现，极易误诊或漏诊［1］。现代临床医学尚缺乏特效诊断技术，并且预后效果不理想。由于珠蛋白生成障碍性贫血多导致甲状腺、肾上腺等功能下降，严重者多因继发感染、心力衰竭而死亡。因此，及早进行地中海贫血筛查，并且融合一系列的有效方式进行诊断，以此控制地中海贫血新生儿发生率是目前临床上研究的重点［2］。但关于血红蛋白电泳联合地贫基因检测在地中海贫血诊断中的应用研究鲜见相关报道。本研究旨在深入探讨血红蛋白电泳联合地贫基因检测在地中海贫血诊断中的应用疗效，进一步为地中海贫血患者提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

随机收集2017年3月—2019年2月在韶关市第一人民医院诊治的210例地中海贫血，按随机数字表法分为两组，每组为105例，同期入院体检患者210例为（阴性对照组）。其中观察组：男63例，女42例；年龄22～58岁，平均年龄（32.93±8.11）岁；病程1～53年，平均病程（27.32±8.57）年。对照组：男63例，女43例；年龄25～58岁，平均年龄（31.23±8.43）岁；病程1～51年，平均病程（26.64±8.29）年。两组患者的基本情况相较差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：（1）结合临床特点及实验室检查（血常规检查、血涂片检查、地贫基因诊断等）已被证实为地中海贫血［3］；（2）年龄20～59岁，性别不限；（3）经院伦理委员会审核同意研究，所有患者均知晓，愿意积极配合检查。排除标准：（1）患有精神意识障碍疾病；（2）伴有语言意识障碍及恶性肿瘤者（3）临床资料不完整者。

1.3 治疗方法

（1）对照组：只采用血红蛋白电泳方法，在患者早晨空腹的状态下抽取其外周静脉血2 ml，作为检测标本，添加至EDTA抗凝管中。采用离心机（白洋）按照4 000 r/min的速度离心5 min，去除上层血浆采取0.9%氯化纳注射液对10μL红细胞洗涤3次，将洗涤的红细胞取出后与130 μL溶血液混合均匀。在室温环境下予以培育5 min待测，用全自动血红蛋白血泳仪（海伦娜Spife-3000）相关技术检测HbA2、HbA及HbF的血红蛋白指标。（2）观察组：则在血红蛋白电泳基础上加用地贫基因检测治疗，抽取外周血2～3 ml，添加至EDTA抗凝管中。对全血标本中的DNA主要使用多重聚合酶链式反应（PCR）技术予以检测，主要检测α-地中海贫血缺失型基因（3种）和β-地中海贫血基因突变点（17种）。

1.4 试剂及仪器

全血DNA提取和地中海贫血基因检测选取深圳亚能生物技术有限公司生产的试剂盒，操作严格按照说明书。PCR扩增仪（广东珠海黑马，Hema9600）,恒温杂交仪（深圳亚能生物技术有限公司，型号：YN-H16)。

1.5 观察指标

（1）观察α-地中海贫血、β-地中海贫血患者的总有效检测率；（2）比较三组不同标本中血红蛋白指标HbA2、HbA及HbF。

1.6 统计学方法

通过SPSS 23.0对所有数据进行分析，其血红蛋白指标等以均数±标准差（±s）表示计量资料，行t检验，α-地中海贫血、β-地中海贫血等以例数和百分比（%）表示计数资料，行χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组不同地贫基因诊断

观察组α-地中海贫血、β-地中海贫血的总有效检测率（96.19%）明显高于对照组（47.61%），差异有统计学意义（χ2=61.310,P＜0.001）。

2.2 不同标本中血红蛋白指标

α-地中海贫血组和β-地中海贫血组HbF的含量明显高于阴性对照组（P＜0.05）；β-地中海贫血组HbA2的含量高于阴性对照组（P＜0.05），并且阴性对照组HbA的含量均明显高于α-地中海贫血组和β-地中海贫血组（P＜0.05），见表1。

3 讨论

地中海贫血广泛分布于我国南方地区，人群发生率高达10%以上，以广东、广西为主。地贫主要分为α-地中海贫血和β-地中海贫血两种，以α-地中海贫血较常见。本病的发生是由于某一种或几种珠蛋白肽链合成障碍，以致珠蛋白肽链合成失平衡而导致的溶血性贫血，本组疾病的临床症状轻重不一，大多表现为慢性进行性溶血性贫血。据流行病学调查显示，地贫在我国南方具有较高的发病率，严重影响患者的生活质量，甚至危及生命安全［4］。因此，找寻合适的检测方法对疾病诊断十分关键。

表1 各组不同标本中血红蛋白指标的对比（±s） %

表1 各组不同标本中血红蛋白指标的对比（±s） %

注：与阴性对照组比较，a P＜0.05

组别α-地中海贫血组(n=105)β-地中海贫血组(n=105)阴性对照组(n=105)HbA2 2.56±0.42 6.55±1.29a 3.75±0.76 HbA 95.04±25.48a 92.49±22.15a 97.15±23.15 HbF 2.45±0.42a 6.89±1.58a 2.15±0.29

随着医疗水平的提高及医疗技术的发展，地中海贫血的检测技术不断完善，使用简单、方便的血液学方法中的血红蛋白电泳进行地中海贫血的筛查，但单独使用对于轻度地中海贫血会出现漏诊的情况。随着多重PCR技术逐渐走向成熟，所以采用联合地贫基因明确诊断，其效率较高，且准确率高，筛查范围广，有利于临床中地中海贫血基因的筛查，国内外现已广泛应用于各级医院。众多研究指出［5］，在筛查实施过程中，血红蛋白电泳联合地贫基因检测在地中海贫血诊断中至关重要。故本次研究笔者选取血红蛋白电泳联合地贫基因检测治疗结果中显示，观察组患者的α-地中海贫血、β-地中海贫血的总有效检测率比对照组更显著，并且α-地中海贫血者、β-地中海贫血者及阴性对照组患者的HbA2、HbF及HbA浓度差异均具有显著性差异，由此可知，使用血红蛋白电泳联合地贫基因检测对地中海贫血患者检出率作用显著，与夏六和等［6］研究结果一致。

综上所述，地中海贫血患者诊断中，实施血红蛋白电泳联合地贫基因检测诊断效果确切，特别是早期诊断地贫具有重大临床意义，具有一定的临床应用推广价值。