金银花炒制的质量标准研究

杨红燕 李兆奎 李玲燕

1 台州市中医院 浙江 台州 318000

2 台州市食品药品检验研究院 浙江 台州 318000

金银花为一种常用的中药，临床使用十分广泛，目前约500多种中药制剂使用了金银花，其中超过70%的感冒中成药和抗感染中成药中都含有金银花[1]。研究发现，金银花具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗癌、保护肝脏、抗氧化和镇痛等各种作用[2]。炒金银花为金银花的炒黄炮制品。《中国药典》2015版一部中只有金银花生品的质量标准，研究发现金银花不同炮制方式其绿原酸、木犀草苷等有效化学成分的含量及溶出率会不相同，同时也会影响到金银花的功能主治和临床应用[3]，可见不能以金银花的质量标准来评价炒金银花的质量情况。本文收集了10批次的炒金银花，测定其绿原酸和木犀草苷含量，建立金银花炒黄炮制品的质量控制方法和标准，以便为炒金银花药材的质量控制提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器：Waters e2695液相色谱仪（美国沃特世公司，2998 PDA检测器和Empower2色谱工作站），BP221S型电子天平（德国赛多利斯），恒温水浴锅（江苏金坛市江南仪器厂）。

1.2 试剂与材料：绿原酸对照品、木犀草苷对照品(购自中国药品生物制品检定所，含量测定用)；乙腈为色谱纯，磷酸、甲醇、乙醇、乙酸丁酯、甲酸、冰醋酸均为分析纯，水为去离子水。10批炒金银花样品由台州御济中药饮片有限公司提供，经台州市药品检验研究院中药检验所鉴定均符合《浙江省中药炮制规范》2015版规定。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别：取炒金银花粉末（过四号筛）0.2g，加入50%的甲醇5ml，室温下放置12小时后滤过，将所得续滤液在水浴上蒸发掉甲醇，残渣再另加甲醇2ml，所得溶液作为供试品溶液。在绿原酸对照品中加入50%的甲醇适量，制成每1ml含1mg的溶液，将其作为对照品溶液。按照《中国药典》2015版薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，然后分别点于同一硅胶H薄层板上，使用的展开剂为乙酸丁酯-甲酸-水（7∶2.5∶2.5）的上层溶液，展开后将其取出晾干，然后置紫外光灯（365nm）下检视。比较供试品与对照品的色谱图，发现在同一位置显相同颜色的荧光斑点，详见图1。

图1 炒金银花薄层色谱图

2.2 HPLC测定绿原酸的含量：具体如下。

2.2.1 供试品溶液的制备：取炒金银花粉末（过四号筛）0.5g，精密称定后放入具塞锥形瓶中，加入50%的甲醇50ml，精密称重后进行超声处理，超声功率、频率、时间分别为250W、40kHz、30min。放冷后再称重，减少的重量用50%的甲醇补足，摇匀后滤过，精密吸取续滤液5ml，转移到25ml的棕色量瓶中，往其再加入50%的甲醇到刻度线，摇匀后即得供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备：精密称定绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加入50%的甲醇进行超声溶解，将其配置成每1ml含40μg的溶液，即为对照品溶液。

2.2.3 色谱条件：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为乙腈与0.4%的磷酸水溶液以13∶87的比例混合液；检测波长为327nm；进样量为10μl，流速为1.0ml/min；按照绿原酸峰值来计算理论塔板数应不低于1000。

2.2.4 测定法：按2.2.3色谱条件，在室温下精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，分别注入高效液相色谱仪，测定各样品的绿原酸含量。

2.2.5 绿原酸稳定性试验：在室温下精密吸取各供试品溶液5～10μl，按2.2.3色谱条件，在放置0、1、3、7、10、14、18、24小时后各进样1针，测得TZ-CJYH-MB-01峰面积分别是 1863951、1852074、1843521、1868757、1856508、1839885、1819742、1860612，得出 RSD 值 为0.9%。表明本品在室温下放置24小时内稳定。

2.2.6 测定结果：十批样品的测定结果详见表1，按干燥品计算，将含量限度定为含绿原酸（C16H18O9）不得少于1.5%，这与《中国药典》金银花限度相一致。

表1 炒金银花绿原酸含量测定结果信息表

2.3 HPLC测定木犀草苷的含量：具体如下。

2.3.1 供试品溶液的制备：取炒金银花粉末（过四号筛）2g，精密称定后放入具塞锥形瓶中，精密加入70%的乙醇50ml，称重后超声处理，超声功率、频率、时间分别为250W、35kHz、60min。放冷后再称重，减少的重量用70%的乙醇补足，摇匀后滤过。精密吸取续滤液10ml，蒸干回收乙醇，残渣用70%的乙醇溶解，置5ml棕色量瓶中，再加入70%的乙醇到刻度线，即为供试品溶液。

2.3.2 对照品溶液的制备：精密称定木犀草苷对照品适量，置棕色量瓶中，加入70%的乙醇进行超声溶解，将其配置成每1ml含40μg的溶液，即为对照品溶液。

2.3.3 色谱条件与系统适用性试验：用苯基硅烷键合硅胶为填充剂（Aglient ZORBAX SB-phenyl 4.6mm×250mm，5μm）；检测波长为350nm；进样量为10μl；选用两个流动相，流动相A为乙腈，流动相B为0.5%的冰醋酸溶液，流速1.0ml·min-1，按表2中的规定进行梯度洗脱。按照木犀草苷峰值来计算理论塔板数不低于20000。

表2 高效液相测木犀草苷的梯度洗脱表

2.3.4 测定法：按2.3.3色谱条件，在室温下精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，分别注入高效液相色谱仪，测定各样品的木犀草苷含量。

2.3.5 木犀草苷稳定性试验：在室温下精密吸取供试品溶液适量，按2.3.3色谱条件，在放置0、1、3、7、10、16、19、24小时后各进样1针，测得TZ-CJYH-MB-01峰面积分 别是 919901、923523、923999、915329、921906、933428、925938、937147，得出RSD值为0.8%。表明本品在室温下放置24小时内稳定。

2.3.6 测定结果：10批样品的测定结果详见表3，根据制定限度的一般原则，10批样品的含量限度是0.028。十批中就有两批不在限度内，限度有点严，按干燥品计算，将含量限度定为含木犀草苷（C21H20O11）不得少于0.025%。一批不在限度内，属于正常。

表3 炒金银花木犀草苷含量测定结果信息表

3 讨论

炒金银花炮制过程未添加辅料，没有成分改变，因没有现成的方法可以参考，所以参照《中国药典》2015版一部金银花项下的薄层色谱鉴别法，进行炒金银花样品的TLC测定。在测定绿原酸、木犀草苷含量时，只做稳定性试验和含量测定。金银花中木犀草苷含量在《中国药典》2015版一部中规定不小于0.050%，本实验发现炒金银花中木犀草苷含量限度为0.025%，含量下降了很多。可能金银花经过高温炒制后某些化学成分变得不稳定，甚至结构发生改变，所以导致木犀草苷含量的改变。由此表明，有效成分的改变使得炒金银花与金银花的功效有所不同，临床应用也有所区别。