东莞地区高毒力肺炎克雷伯菌耐药基因研究

谢小燕，张拔山，李丽娟，张荣华

（1.东莞市人民医院检验科，广东 东莞 523000；2.东莞市妇幼保健院检验科，广东 东莞 523000）

现阶段，高毒力肺炎克雷伯菌（hvKP）成为临床上着重关注的病菌。自上世纪80年代首次在台湾地区检出，随后感染病例数量呈现逐年增加的趋势[1]。目前，通过对高毒力肺炎克雷伯菌的耐药基因研究可以选择适宜且有效的治疗药物，增强患者的临床治疗效果和缩短治疗时间，减少对机体的伤害[2]。本文研究分析了东莞地区高毒力肺炎克雷伯菌耐药基因，其报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年6月～2018年12月东莞地区医院检验科采集的住院患者中255株菌株，均为从患者的血液中分离出来的菌株，每菌株经VITEK -2型全自动细菌检测分析系统和配套的细菌鉴定卡GNI实施检测和鉴定，16SrRNA基因PCR及其产物实施测序鉴定，上述两种检测方法检测结果具有一致性。全部患者的一般资料具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 仪器、试剂

全自动微生物分析仪（生产厂家：法国梅里埃生物公司；型号：VITEK-2）；PCR 扩增仪（生产厂家：美国ABI公司；型号：Veriti Dx）；GSG-2000凝胶成像分析系统（生产厂家：珠海黑马医学仪器有限公司/Hema）；电泳仪（生产厂家：上海天能科技有限公司；型号：EPS-300）。2×Taq Master Mix、D2000 DNA Marker等生化试剂（生产厂家：北京百泰克生物技术有有限公司）；引物均由上海生工生物工程公司合成。

1.2.2 筛选hvKP 菌株

拉丝试验（黏液表型检测）：将所分离等待检测的菌接种在血平板上，在37℃恒温条件下培养16-18小时后，利用接种环将菌落挑取，如重复3次均未能将黏液丝挑起或黏液丝长度短于5 mm，则拉丝试验结果呈阴性（cKP），如果黏液丝长度不低于5 m m，则拉丝试验结果呈阳性（hvKP）。

1.2.3 菌株鉴定、药敏试验

主要应用VITEK-2 全自动微生物分析仪，对菌株肺炎克雷伯菌实施药敏试验，判断药敏呈现的结果均依照临床CLSI标准实施。

1.2.4 ESBLs基因检测

利用煮沸法对细菌总DNA进行提取。利用PCR法对blaTEM和blaCTX-M以及blaSHV等耐药基因进行检测。

1.3 观察指标

对比东莞地区高毒力肺炎克雷伯菌中的hvKP 菌株和cKP菌株中blaTEM、blaSHV 和 blaCTX-M 3 种ESBLs 基因对药物的耐药性。

1.4 统计学方法

使用SPSS 22.0进行分析，所有数据当中，（%）类计数数据，行x2检验检测；“±s”类计量数据，行t检验检测；P＜0.05时，提示差异显著。

2 结 果

hvKP 菌株的blaTEM、blaSHV 和 blaCTX-M 3 种ESBLs 基因耐药性在不同抗生素中与cKP菌株相比较具有差异性（P＜0.05），见表1。

表1 blaTEM、blaSHV 和 blaCTX-M 3 种ESBLs 基因耐药性[n（%）]

3 讨 论

自上个世纪80年代由德国第一次报道 hvKP菌株以来，世界上大许多国家均对高毒力肺炎克雷伯菌中的hvKP菌株进行了相关报道[3]。有大量临床研究及实践结果表明，hvKP菌株的标本主要来源于所采集的痰液、血液、尿液和各种分泌物及脓汁等标本，同时hvKP菌株与cKP菌株在标本来源上并未存在明显不同，均以痰液标本居多，其主要是因为cKP菌株普遍存在于机体的呼吸道、肠道内[4]。

现阶段，hvKP作为一种具有高侵袭性和高毒力特征的cKP在临床上得到重点关注，其是机体出现血液、泌尿系统等部位感染的重要因素。目前因为抗生素的滥用情况的发生，临床上的ckP在耐抗菌药物性持续提高。临床上对hvKP的耐药基因进行检测和研究具有重要意义，能够有效预防感染症状，进一步为临床用药进行合理和适当的指导。hvKP和ckP菌株具有较大的差异，经本研究表明，hvKP 菌株的血清分型情况明显区别于cKP菌株，体内不同的血清分型能够为判断菌株类型提供重要依据[5]。ESBLs 是由TEM、SHV和OXA及CTX-M和其他型β-内酰胺酶发生突变形成的，其形成的基因型数量至少存在400多种。本研究结果表明，hvKP 菌株的blaTEM、blaSHV 和 blaCTX-M 3 种ESBLs 基因耐药性在不同抗生素中与cKP菌株相比较具有差异性（P＜0.05），说明hvKP 菌株与ckP菌株相比较ESBLs存在数量较少，且三种不同基因在抗生素中具有不同的耐药性。ckP 本质上属于一类致病菌，药物滥用情况的发生造成其耐药性和抗感染性降低。不同的基因型一定程度上影响了抗菌药物的耐药性，对hvKP进行控制 的同时重视cKP的临床症状，依据具体情况对药物用量进行合理指导。

综上所述，通过对东莞地区高毒力肺炎克雷伯菌耐药基因的研究分析，能够清晰反映出不同基因型的耐药情况，从而为随后的用药进行合理的指导。