HPLC 法测定特医食品基畅中谷氨酰胺的含量

柳 俊 李汉西 黄琪评 曾德猷 卢韵君

（广州纽健生物科技有限公司，广东广州 510663）

在各类营养补充剂中，除市面上常见的“小蓝帽”保健食品外，特殊医学用途配方食品（简称特医食品） 也逐渐受到重视。特医食品是指为满足进食受限、消化吸收障碍、代谢紊乱或者特定疾病状态人群对营养素或者膳食的特殊需求，专门加工配制而成的配方食品，其主要针对的人群是临床患者。

特医食品（基畅） 是广州纽健生物科技有限公司自主研发的肠内营养产品，主要用于放化疗引起的肠道黏膜损伤，肠外营养导致的肠道黏膜萎缩以及一般性腹泻、便秘等。产品配方主要由小麦低聚肽、聚葡萄糖及低聚果糖等营养素组成，其中小麦低聚肽富含谷氨酰胺。谷氨酰胺是一种特殊的氨基酸，由于多一个酰胺基，使其成为体内氮的运载体。谷氨酰胺是人体必需氨基酸，具有促进机体蛋白质合成、保持小肠黏膜正常结构和功能，增强免疫反应等作用。体外试验表明谷氨酰胺对胃肠黏膜损伤具有保护和修复作用。

目前，对于特医食品中谷氨酰胺的含量检测鲜有报道，为了更好地控制和提升产品质量，本试验针对特医食品基畅，建立了高效液相色谱法测定特医食品基畅中谷氨酰胺含量的分析方法，以期为该产品的质量控制提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

L-谷氨酰胺标准品，批号140705-201403，中国食品药品检定研究院；乙腈，色谱纯；辛烷磺酸钠、磷酸，分析纯；蒸馏水，双蒸水；肠内营养食品基畅，广州纽健生物科技有限公司。

1.2 主要仪器

UltiMate3000 系列高效液相色谱仪，赛默飞世尔科技公司；BSA223S 电子分析天平；UV-250 分光光度计，日本岛津。

1.3 方法

1.3.1 色谱测定条件

Hypersil C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流动相：辛烷磺酸钠溶液∶乙腈（95∶5）；流速：1.0 mL/min；检测波长：210 nm；柱温：27 ℃；进样量：20 μL。

1.3.2 对照品溶液的制备

精确称取适量对照品L-谷氨酰胺，置于10 mL容量瓶中，用流动相溶解并定容。

1.3.3 供试品溶液的制备

精确称取供试品约0.2 g，置于100 mL 容量瓶中，用流动相溶解并定容，摇匀，过滤，取滤液，即得供试品溶液。临用前，用孔径0.45 μm 微孔滤膜过滤。

1.3.4 阴性供试品溶液的制备

按产品工艺过程制备不含小麦低聚肽的产品，参照“1.3.3”方法制备阴性供试品溶液。

2 结果与分析

2.1 色谱测定方法的选择

取L-谷氨酰胺对照品溶液进行紫外波长扫描，结果显示L-谷氨酰胺在波长210 nm 处有强吸收峰，因此选定210 nm 为检测波长。通过参考文献调研，以及试验验证对多种流动相条件进行对比，最后选定辛烷磺酸钠溶液（取辛烷磺酸钠0.865 g，加1 000 mL 水溶解，再加0.5 mL 磷酸，混匀） ∶乙腈=95∶5 为流动相，流速为1.0 mL/min。

2.2 专属性试验

在上述色谱条件下对阴性供试品溶液进行分析，结果表明，在谷氨酰胺相同的保留时间处基本无色谱峰，说明阴性样品对所测组分无干扰。HPLC 色谱图见图1～图3。

2.3 线性试验

分别对不同质量浓度谷氨酰胺对照品溶液（0.1 mg/mL，0.3 mg/mL，0.5 mg/mL，0.7 mg/mL，1.0 mg/mL） 进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积积分值，并以峰面积积分值（Y） 对谷氨酰胺含量（X） 进行回归，得标准曲线。标准曲线为Y=29.178 3x+0.308 6，R2=0.999 9。

图1 谷氨酰胺对照品色谱图

图2 供试品色谱图

图3 阴性供试品色谱图

表明谷氨酰胺在2.0 μg～20.0 μg 质量范围内呈线性关系，结果见表1。

表1 谷氨酰胺对照品测定结果

2.4 精密度试验

精密吸取对照品溶液（0.7 mg/mL） 20 μL 重复进样6 次，测得峰面积积分值RSD 为0.04%，表明精密度良好。

2.5 重复度试验

取同一批号的供试品，按“1.3.3”方法操作，平行制备6 份供试品溶液，按色谱条件测定，测得谷氨酰胺平均含量为199.78 mg/g，RSD 为1.14%，表明分析方法的重复性良好。

2.6 稳定性试验

称取供试品约0.2 g，按“1.3.3”方法操作制备供试品溶液，取同一供试品溶液各20 μL，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h 按上述色谱条件测定，测得峰面积积分值RSD 为0.05%，表明供试品溶液在8 h 内稳定。

2.7 加标回收率试验

精确称取已知含量供试品（谷氨酰胺含量200 mg/g） 约1 g，按“1.3.3”方法操作制备供试品溶液。吸取供试品溶液9 份，每份4 mL，分别置于100 mL 容量瓶中，1～3 号容量瓶中各添加谷氨酰胺对照品6.4 mg，4～6 号容量瓶中各添加谷氨酰胺对照品8.0 mg，7～9 号容量瓶中各添加谷氨酰胺对照品9.6 mg，然后按“1.3.3”中供试品溶液的制备方法处理，按上述色谱条件测定，结果见表2。结果显示平均回收率为99.22%，RSD 为1.06%，证明该方法回收率较好，准确度较高。

表2 回收率试验结果

2.8 耐用性试验

本试验考察波长、流速、温度、流动相比例发生微小变化时对谷氨酰胺含量测定的影响。

波长：考察208 nm、212 nm 检测波长变化对谷氨酰胺含量检测的影响。

流速：考察0.8 mL/min、1.2 mL/min 流速对谷氨酰胺含量检测的影响。

温度：考察26.5 ℃、27.5 ℃温度对谷氨酰胺含量检测的影响。

流动相比例变化：考察流动相比例（辛烷磺酸钠溶液∶乙腈=98∶2、92∶8） 对检测的影响程度。

试验结果显示，不同色谱条件下，谷氨酰胺含量检测值RSD 为0.39%，表明当色谱条件发生微小变化时，对本品含量测定结果无明显影响。因此，认为本方法耐用性良好，满足含量测定要求。

3 结论

特医食品（基畅） 主要用于放化疗引起的肠道黏膜损伤，肠外营养导致的肠道黏膜萎缩以及一般性腹泻、便秘等。谷氨酰胺是基畅中主要功效营养成分之一，其对胃肠黏膜损伤具有保护和修复作用。因此，利用HPLC 法准确测定基畅中谷氨酰胺的含量，有利于进一步确保产品质量的可靠性。经试验验证，谷氨酰胺在2.0 μg～20.0 μg 质量范围内呈良好线性关系，R2=0.999 9；该方法的精密度RSD 为0.04%；重复性RSD 为1.14%；稳定性RSD为0.05%；加样回收率RSD 为1.06%，耐用性RSD为0.39%。试验结果表明高效液相法测定特医食品基畅中谷氨酰胺含量的方法科学可行。