DAT试验微柱凝胶法与试管法结果一致性分析

李凤侠，何娉婷

（江苏省新沂市人民医院，江苏 徐州 221400）

直接抗球蛋白试验（direct antiglobulin test,DAT）主要用于检测在患者体内致敏的不完全抗体和（或）补体，对于胎母血型不合新生儿溶血病（HDN）的诊断，免疫溶血性输血反应的调查，自身免疫性溶血性贫血（AIHA）的诊断等方面均具有很重要的临床意义[1]。DAT阳性的标本往往会导致血型鉴定困难，影响意外抗体检测，导致交叉配血不合，给输血工作带来困扰。目前DAT的检测方法主要有微柱凝胶法和试管法，试管法洗涤红细胞相对繁琐，结果判定受人为影响因素较多，临床应用有所减少。微柱凝胶法由于具有易于操作标准化、自动化、判读客观和可靠，结果可以长期保存，临床应用越来越多，本院自2013年开始采用微柱凝胶法进行DAT检测，近几年阳性结果偏高，笔者对本院近几年遇到的DAT阳性的标本同时采用两种方法进行检测，比较两种方法的结果是否一致，现总结如下。

1 材料与方法

1.1 材料

2017年1月～2019年10月，本院及所属辖区的卫生院来我院输血科取血的患者中共有76例患者微柱凝胶法DAT阳性，其中男性37例。女性39例，年龄32～94岁。

1.2 试剂与仪器

微柱凝胶检测卡、FYQ型免疫微柱孵育器、TD-A血型血清学用离心机（长春博研），抗人球蛋白检测试剂（抗IgG+C3d ，上海血液生物医药有限责任公司），离心机KA-2200型（日本久保田），光学显微镜（olynpus）。

1.3 方法

1.3.1 微柱凝胶法

患者红细胞用生理盐水洗涤后配成0.5～0.8%的红细胞悬液，加入微柱凝胶待检孔中，即可使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）取出肉眼判断结果，并根据标准对照谱判断凝集强度。

1.3.2 试管法

按照《输血免疫血液学实验技术》中的操作，、同时设置阴性、阳性及自身对照，试验结果以阴性、阳性结果判定，对于试验结果阴性的应加入IgG致敏的红细胞50 ul再次1000 g离心15 s，以确认阴性结果可靠性。

1.4 统计学处理

对76例微柱凝胶法DAT阳性标本按照凝集强度强度进行分类，并与试管法检测结果进行比较，同时统计这些患者性别、年龄、各种疾病分布等情况。

2 结 果

（1）从表1可以看出76例微柱凝胶法DAT阳性结果凝集强度（3+～4+）的标本共22例，其中与试管法有1例不相符，该患者IgM结果99.5g/L ，凝集强度（±～2+）的标本共54例，所占比例相对较高，与试管法

表1 76例微柱凝胶法DAT阳性结果凝集强度分布及与试管法结果比较

有1 5例 不 相 符，其 中 有8例 患 者W B C结 果≥36.0×109，1例患者是巨幼红细胞性贫血，6例患者血清IgG结果在17.2～21.0 g/L。

（2）微柱凝胶法76例DAT阳性患者的基本情况如表2，男女比例相差不多，患者年龄＞70的较多，疾病分布大多是血液病和肿瘤患者，其中无输血史者29例，有输血史者47例，对于多次反复输血的患者，体内产生同种抗体导致DAT阳性较多，有输血史的患者若输注血浆含有同种抗体也会使红细胞致敏。

表2 76例微柱凝胶法DAT阳性患者的基本情况

3 讨 论

微柱凝胶法检测的原理是利用凝胶颗粒之间的间隙形成的分子筛作用，在微柱凝胶介质中红细胞与相应抗原结合经低速离心凝集成块的红细胞体积大被凝胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的上层或中间。若存在巨红细胞、白细胞数量过多、纤维蛋白未完全清除的等均可引起假阳性。本院的76例患者中有8例是由于白细胞过高引起的，由于患者大多严重贫血，有些患者的白细胞计数甚至达到红细胞计数的十分之一，有些患者还存在幼稚细胞，体积是红细胞的几倍，在洗涤的过程中不可能完全去除白细胞，导致微柱凝胶法DAT结果在±～2+左右的凝集强度，还有1例存在巨红细胞，对于这些标本的凝集强度不高的标本，可以采用试管法复核，或者对未加样之前标本在显微镜下仔细观察，可以避免假阳性。

另外7例患者两种方法不相符与患者体内的异常蛋白的种类及数量有一定相关性，其中1例患者是巨球蛋白血症患者，IgM值为99.5 g/L（参考值0.6～2.63 g/L），微柱凝胶法DAT结果3+，试管法阴性，因为试管法采用的抗人球蛋白是IgG+C3d型，对于非特异性吸附于红细胞上的IgM不能检测出来，由此说明微柱凝胶法可以同时检测IgG和IgM。6例患者IgG结果在17.2～21.0 g/L（参考值6.94～16.2g/L），微柱凝胶法阳性但试管法阴性，这76例患者中有2例IgG结果≥44.5 g/L微柱凝胶法和试管法均阳性，由此可见微柱凝胶法灵敏度比试管法高很多，试管法有可能存在假阴性，具体IgG结果达到多少时试管法DAT结果阳性还有待进一步研究。这些异常蛋白往往干扰血型鉴定和交叉配血，但单纯由异常蛋白引起凝集往往是一种假凝集，试管法抗人球蛋白或聚凝胺配血时，加入生理盐水可以明显减弱或消失，不会对输血造成影响[2]，在临床输血中应掌握异常蛋白引起的蛋白凝集的辨别和处理技术，避免延误患者输血。

就交叉配血而言，DAT试验和不规则抗体筛查具有同等重要的意义，红细胞输注无效与DAT阳性有一定相关性。微柱凝胶法能对微弱的抗原或抗体进行反应，大大提高了试验的灵敏性，便于自动化、标准化，为了提高输血安全，我们提倡灵敏度高的检测方法，但是灵敏度高更容易检出无临床意义的抗体或者引起假阳性，这样也增加我们的工作量，在实际工作中带来一定的困扰。试管法DAT试验时由于敏感性相对较低可能会引起假阴性，因此在实际工作中不能完全依赖于一种方法，遇到可疑标本时要两种方法相结合，并了解患者的病史及相关实验室检查结果综合分析，使DAT结果更加可靠。