HPLC法测定愈创甘油醚片中有效成分

庞春洁，张 林

（马应龙药业集团股份有限公司，湖北 武汉 430064）

愈创甘油醚片作为一种祛痰药类非处方药药品，其主要有效成分为愈创甘油醚，临床应用已有几十年之久，其化学成分性质较稳定[2]。国外很多国家也将该药作为非处方产品销售，说明该药安全性良好。该药物在临床中不良反应一般较轻，不影响血压，血压维持平稳，患者耐受性比较理想，而且用药方便，市场应用价值较高[2]。在愈创甘油醚片生产过程中，为了保证产品质量，就需要对愈创甘油醚片的有效成分进行测定。愈创甘油醚片目前已收载于国家药品标准中[3]，过往一般选择滴定与萃取相结合的方式对愈创甘油醚片的有效成分进行测定，但是该方法的重现性并不理想，而且操作比较繁琐[4]。本研究选择高效液相色谱法（HPLC）对愈创甘油醚片有效成分进行测定，操作比较简单方便，结果准确，具体试验报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

选择安捷伦1260型液相色谱仪。北京赛多利斯仪器有限公司的1/10000电子分析天平；昆山超声仪器有限公司的KQ-500DE型超声波清洗器。

1.2 试药

选择中国药生物制品鉴定所的愈创甘油醚对照品；乙腈、磷酸、三乙胺分别选择HPLC级、优级纯、分析纯。

2 方法与结果

2.1 方法

①色谱条件：采用Agilent C18色谱柱，5 μm，150*4.6 mm；流动相选择磷酸溶液（1%）-三乙胺溶液（1%）-乙腈，35:35:30比例；进样量设置为10 μl，流速设置为每分钟1.0 ml，检测波长设置为273 nm。

②选择波长：准确称取愈创甘油醚对照品，并将其加入到流动相内进行溶解，稀释成每1 ml含25 μg愈创甘油醚的溶液，以分光光度法进行测定，于273 nm波长处出现最大吸收，故将测验检测波长定为273 nm。

③考察线性关系：准确称取0.0105 g愈创甘油醚对照品（经105℃干燥恒重），并将其放置在100 ml量瓶内，通过流动相将其溶解、稀释到刻度，摇匀并准确取2 μl、4 μl、6 μl、8 μl、10 μl、15 μl、20 μl、30 μl，分别注入到液相色谱仪。纵坐标、横坐标分别为峰面积、愈创甘油醚量，获回归方程A=0.6891C+688.02，r=0.9999，结果显示愈创甘油醚在0.2～3.0 μg范围内同色谱色谱面积线性关系比较理想。

④辅料干扰试验：根据处方量准确称取0.6 g辅料，放置在50 ml量瓶内，通过流动相将其溶解、稀释到刻度，然后将其摇匀，进行滤过处理后准确量取2.0 ml续滤液，放置在50 ml量瓶内，通过流动相将其稀释到刻度，进样10 μl，光谱图分析结果显示辅料不存在干扰。说明该可方可准确的进行有效成分测定。

⑤稳定性测试：选择试品溶液，放置于室温下，分别于0、1、2、4、8小时后进行测定，结果显示峰面积基本未变，RSD为0.22%，结果提示在8小时内样品均较稳定。

⑥精密度试验：选取线性关系范围内的溶液，持续进样5次，每次10 μl，愈创甘油醚峰面积的RSD为0.25%。结果提示该方法精密度较好，可满足定量分析的要求。

⑦重复性试验：称取6份同一样品，按上述方法对其含量进行测定，各样品含量的RSD为0.2%，结果显示该试验方式重复性良好。

⑧回收率试验：根据处方比例对样品进行配制，分别加入标示量80%、100%、120%的愈创甘油醚，根据上述样品含量测定方法进行处理，然后对回收率进行计算。

⑨测定样品含量：选取10片样品，将其研细，准确称取相当于0.1 g的愈创甘油醚，放置在50 ml量瓶内，通过流动相将其溶解、稀释到刻度，摇匀、滤过后准确量取2 ml续滤液，放置在50 ml量瓶内，选择流动相将其稀释到刻度，进样10 μl，选择外标法对其含量进行测定。

2.2 结果

2.2.1 回收率结果观察

经过9次测定，加样平均回收率为100.03%，RSD为0.39%，具体结果如表1所示。

表1 加样回收率结果观察

2.2.2 样品含量测定结果观察

采用外标法对样品含量进行测定，2次测定结果分别为99.7%，99.2%。

3 讨 论

游离愈创木酚是愈创甘油醚片常见的一种已知杂质，正常情况均能检测出该杂质[5-6]。愈创甘油醚同分异构体则是另外一种杂质，但是选择梯度洗脱，测定所需时间较长。本研究采用HPLC法，Agilent C18色谱柱，流动相选择磷酸溶液-三乙胺-乙腈溶液，波长273 nm，通过等度洗脱就能有效分开同分异构体，进而明显缩短测定时间，测定效率明显提升。除此之外，当所选择的色谱柱更换厂家品牌后，分离效果依然比较理想。同时在辅料干扰试验中发现该测定方法不存在辅料干扰的情况，不影响试验准确度。由此可以发现，该方法能对难分离物质进行有效分离，检测准确，具有较强的可重复性，稳定性也比较理想，具有比较显著的优越性。

本研究中结果显示，该试验方法加样回收率达100.03%，RSD:0.39%，愈创甘油醚片有效成份含量测定结果显示均达99%以上。

综上所述，选择HPLC法测定愈创甘油醚片的有效成分稳定可靠，准确度高，而且操作简单方便，在生产过程中可对产品质量进行有效控制。