大豆异黄酮对免疫力低下小鼠的影响

柴发永

（山东省食品药品审评认证中心，山东 济南 250014）

大豆异黄酮是大豆中一种类雌激素结构的天然活性成分，具有多方面的保健功效。研究显示，大豆异黄酮具有预防骨质疏松、抑制肿瘤及抗衰老等生物学作用[1]。本文主要研究其促进免疫力的功效作用。

1 材料与方法

1.1 受试物

大豆异黄酮胶囊，0.3 g/粒（每粒含大豆异黄酮50mg），每日1粒。

1.2 实验动物

SPF级昆明种雌性小鼠[选用北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证号：SCXK（京）2014-0004]，平均体重20g，每组10只。

1.3 剂量及给药：

实验设计人体推荐剂量的5倍，10倍，30倍，设置为低、中、高剂量组，即每日25 mg/kg、50 mg/kg和150 mgkg（即大豆异黄酮4.16 mg、8.33和25.14 mg/kg）。用5%羧甲基纤维素钠溶液配制成相应浓度的受试物溶液，每日经口给予一次，灌胃体积为10 ml/kg。同时设置模型组和对照组，用5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃，灌胃体积与受试物组相同，连续31 d。各组均给与维持饲料。除空白对照组，其余各组小鼠于灌胃第25、27、29 d腹腔注射环磷酰胺制造免疫力低下模型[2]。

1.4 实验方法：

1.4.1 脏器指数的测定

实验结束后，小鼠称重，脱臼处死，取脾脏和胸腺称重，计算脏器指数。脾脏指数=脾脏/体重；胸腺指数=胸腺/体重。

1.4.2 迟发型变态反应实验

取羊血，生理盐水洗涤三次，每只鼠腹腔注射2%绵阳红细胞溶液（V/V）0.2ml，致敏后4 d，测量左后足趾部厚度。

1.4.3 碳粒廓清能力的测定

小鼠称重后，根据体重尾静脉注射印度墨汁（稀释至浓度为0.05 mL/10gBW）。墨汁注入后，立即计时。从注射墨汁2 min、10 min两个时间点分别眼眶静脉取血20 μL，然后加到3.0 mL 0.1%碳酸钠溶液中。在600 nm波长处测定光密度值（OD），以0.1%碳酸钠溶液作为空白对照。完后将小鼠处死，取肝脏和脾脏，称重，小鼠碳粒廓清能力以吞噬指数（α）表示。按下式计算：K=（lgOD1-lgOD2）/（t2-t1） α=体重÷（肝重＋脾重）×K1/3

1.4.4 腹腔注射巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验

给小鼠腹腔注射1 mL 20%鸡红细胞悬液，30 min后脱臼处死，仰位固定后经腹腔注射生理盐水，轻轻按腹部20次。取腹腔巨噬细胞洗液1 mL，分别滴于2片载玻片上，于37℃孵箱温育30 min。孵毕，于生理盐水中漂洗，除去未贴片细胞。固定后染色，油镜下计数。每片计数100个巨噬细胞，计算公式为：吞噬百分率（%）=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞/计数的巨噬细胞×100% 吞噬指数=被吞噬鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数

1.5 统计学处理

2 结 果

2.1 对小鼠脏器指数的影响

与对照组相比，模型组脾脏指数和胸腺指数明显降低，提示造模成功（P＜0.05）。中剂量组脾脏指数与对照组相比明显升高，高剂量组脾脏指数、胸腺指数比值与对照组相比明显升高，均有显著性差异（P＜0.05）。

表1 大豆异黄酮对小鼠脏器指数的影响（±s）

表1 大豆异黄酮对小鼠脏器指数的影响（±s）

注：与模型组相比，*P＜0.05；#与对照组相比，P＜0.05

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2.2 对小鼠迟发型变态反应的影响

结果显示，模型组的足趾肿胀程度明显低于对照组，提示造模成功（P＜0.05）。中剂量组与高剂量组的足趾肿胀程度明显增加，与对照组相比有显著性差异（P＜0.05）。

表2 大豆异黄酮对小鼠迟发型变态反应的影响（±s）

表2 大豆异黄酮对小鼠迟发型变态反应的影响（±s）

注：与模型组相比，*P＜0.05 ；#与对照组相比，P＜0.05

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2.3 对小鼠单核-巨噬细胞吞噬能力的影响

结果显示，模型组吞噬指数α及吞噬率明显低于对照组，提示造模成功（P＜0.05）；中、高剂量组吞噬指数α与鸡红细胞吞噬率与对照组相比明显增加，有显著性差异（P＜0.05，0.01）。

3 讨 论

脾脏是人体最大的免疫器官，含有多种免疫活性细胞和细胞因子，巨噬细胞是脾脏内主要非特异免疫细胞，激活后可主动吞噬、杀伤或消化病原微生物。巨噬细胞还是特异性免疫的辅助细胞，可通过提供抗原、启动免疫应答（如分泌活性因子白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子等）等激活免疫细胞，增强免疫作用。胸腺是机体重要的淋巴器官，T淋巴细胞在胸腺内发育成熟，并释放免疫因子等，参与细胞免疫[3-4]。

环磷酰胺为常用的烷化类免疫抑制剂，主要用于癌症的化疗，通过DNA烷基化破坏DNA的合成、抑制核蛋白质的合成，致使免疫功能低下[4]。本研究通过环磷酰胺制造免疫力低下模型，探讨大豆异黄酮对免疫力的促进作用。结果显示，中剂量组脾脏/体重比值显著升高，高剂量组脾脏/体重与胸腺比值显著升高；中、高剂量组的足趾肿胀程度显著增加；中、高剂量组吞噬指数与鸡红细胞吞噬率均显著提高（均P＜0.05，0.01）。大豆异黄酮能提高小鼠碳粒廓清能力及单核-巨噬细胞吞噬功能，对免疫力低下小鼠免疫功能有促进作用。