多壁碳纳米管小柱-液质联用法测定猪肉中地美硝唑的不确定度评定

杨俊 管彬彬 何薛纯 周楠 陈煜

摘要：猪肉样品经酸化乙腈提取、多壁碳纳米管小柱净化，采用液质联用法测定猪肉中地美硝唑含量，并根据建立的数学模型对各分量进行不确定度评定。结果表明，利用多壁碳纳米管小柱-液质联用法测定猪肉中地美硝唑，其不确定度的主要来源为标准曲线的配制及曲线拟合。当猪肉中地美硝唑含量为4.87 μg/kg时，扩展不确定度为0.36 μg/kg（k = 2）。

关键词：多壁碳纳米管；液质联用法；地美硝唑；不确定度

中图分类号：TS251.7 文献标识码：A DOI：10.16465/j.gste.cn431252ts.20210524

基金项目：南通市科技项目基础科学研究（JC2020113）。

地美硝唑是硝基咪唑类药物，对滴虫、原虫病和厌氧菌有良好的预防和治疗作用，同时还具有抗结核、抗病毒、抗病毒肿瘤等作用[1-4]，常作为兽药用于畜禽类疾病的预防和治疗。但是，地美硝唑作为药物在动物体内会有一定的残留，会引起人体致突变和致癌等副作用，对人体的健康造成影响[5-7]。因此准确测定猪肉中的地美硝唑含量，了解测定地美硝唑的不确定度及来源，对提高分析的准确性有十分重要的意义。

目前测定猪肉中地美硝唑含量的净化方法有液-液萃取法、分散液液微萃取法、固相萃取法、分子印迹法、QuEChERS法等[8-11]，而多壁碳纳米管滤过型（m-PFC）净化小柱的方法鲜见报道，该方法操作简单、快捷、准确度高。

本研究采用多壁碳纳米管小柱-液质联用法测定猪肉中地美硝唑含量，根据JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》[12]建立实验方法的数学模型，并对实验过程中引入的各不确定度分量进行评定，以期为采用该法测定猪肉中地美硝唑含量的质量控制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要仪器

Vanquish/Altis型超高压液相色谱-串联质谱仪：美国赛默飞世尔公司；SECURA225D-1CN型电子天平（精度0.01 mg）、BSA224S型电子天平（精度0.1 mg）：德国赛多利斯公司；VM-2500型多管旋涡混合仪：广东安胜仪器有限公司；TGL-16M型台式高速冷冻离心机：上海卢湘仪离心机仪器有限公司；Xcelvap型氮吹浓缩仪：美国Horizon公司；Milli-Q Reference型实验室超纯水仪：美国Millipore公司。

1.2 耗材与试剂

乙腈（色谱纯）：德国Merck公司；正己烷（色谱纯）、98%无水甲酸（分析纯）：上海阿拉丁生化科技股份有限公司；无水硫酸镁、氯化钠（分析纯）：国药集团化学试剂有限公司；QuickProQuEChERS-VD净化柱：河南华仁健康科技有限公司；0.22 μm微孔滤膜：上海安谱实验科技股份有限公司；地美硝唑（纯度99.46%）：英国LGC公司。

1.3 前处理方法

称取5 g试样于50 mL离心管中，加入3 mL水，5 mL 1%的甲酸乙腈，涡旋提取5 min，加入4 g无水硫酸镁、1 g氯化钠，快速振荡混匀，涡旋3 min，6 000 r/min离心5 min。上清液转移到15 mL离心管中，加入5 mL正己烷，涡旋2 min，6 000 r/min离心5 min，弃去上层液体。吸取下层澄清液经多壁碳纳米管小柱净化，氮吹浓缩至近干，加入1 mL含0.1%甲酸的水+甲醇（70+30）振荡溶解残渣后，滤液再经0.22 μm微孔滤膜过滤，上机。

1.4 仪器条件

1.4.1 色谱条件

色谱柱为Accucore RP-MS柱（150 mm×2.1 mm，2.6 μm）；柱温为30 ℃；进样量为2 μL；流动相为0.1%甲酸水（A）和0.1%甲酸乙腈（B），流速0.3 mL/min；采用梯度洗脱程序：0.0～6.0 min，95% A～5% A；6.0～8.0 min，5% A；8.0～8.1 min，5% A～95% A；8.1～10.0 min，95% A。

1.4.2 质谱条件

采用电喷雾电离（ESI）正离子扫描；喷雾电压3 500 V；鞘气流量4.1 L/min；辅助气流量5.1 L/min；吹扫挡锥气流量1.5 L/min；蒸发温度450 ℃；离子传输管温度200 ℃；碰撞气压0.2 Pa。检测方式为选择反应监测（SRM）。SRM条件见表1。

1.5 标准溶液的配制

标准储备溶液：称取10.1 mg地美硝唑，用甲醇定容至100 mL，质量浓度为100 μg/mL；标准中间溶液：吸取0.1 mL标准储备液定容至10 mL容量瓶，质量浓度为1 μg/mL；吸取1 mL标准中间溶液定容至10 mL，质量浓度为0.1 μg/mL；标准工作曲线系列溶液：分别准确吸取地美硝唑标准中间液0.01、0.05、0.100、0.250、0.500 mL，用基質提取液定容至1 mL，质量浓度为1、5、10、25、50 ng/mL。

2 结果与分析

2.1 数学模型的建立

3 測量结果及其不确定度报告

多壁碳纳米管小柱-液质联用法测定猪肉中地美硝唑含量，当称样量为5 g时，k = 2（置信度为95%），测定结果为（4.87±0.36） μg/kg。

4 结 论

本研究采用多壁碳纳米管小柱-液质联用法测定猪肉中地美硝唑含量，建立实验方法的数学模型，通过对实验过程中引入的各不确定度分量进行不确定度评定。结果表明，标准溶液配制、曲线拟合对不确定度的影响最大。在实验过程中，标准溶液配制涉及的计量器具和配制步骤多，各个步骤的不确定度累计，导致该分量的不确定度较大。实验中选择合适的标准溶液，在定量准确的前提下减少中间配制的步骤，降低测定的不确定度；曲线的拟合对结果的不确定度也有很大的影响，因此，在实验中标准曲线的范围要与样品中的浓度匹配，尽可能提高曲线拟合相关系数。

参 考 文 献

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Evaluation of Uncertainty in the Determination of Desenidazole in Pork by Multi-walled Carbon Nanotube Column-liquid Mass Spectrometry

Yang Jun， Guan Binbin， He Xuechun， Zhou Nan， Chen Yu

（ Nantong Food and Drug Supervision and Inspection Center， Nantong， Jiangsu 226006 ）

Abstract： Pork samples were extracted by acidified acetonitrile and purified by multi-wall carbon nanotube column. The content of temenidazole in pork was determined by liquid mass spectrometry. The uncertainty of each component was evaluated according to the established mathematical model. Results： The main source of uncertainty is the preparation of standard curve and curve fitting. When the content of desenidazole in pork was 4.87 μg/kg， the extended uncertainty was 0.36 μg/kg （k=2）.

Key words： multi-walled carbon nanotubes， liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry， desenidazole， uncertainty