顶空气相色谱法测定左卡尼汀原料药中三甲胺的含量

宋文姬，刘印，扈长青，王东岳，吴宁

(山东齐都药业有限公司，山东省脑神经保护类药物重点实验室，山东 淄博 255400)

1 仪器与试剂

1.1 仪器 岛津GC-2010Plus气相色谱仪(岛津公司)，配HS-10顶空进样器，检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，岛津化学工作站，20 mL带有密闭塞的顶空瓶；电子天平(CPA225D，赛多利斯)。所用仪器和量具均经检定和校正。

1.2 试剂 左卡尼汀(山东齐都药业有限公司，批号：181002、180701、180702、180703)；45%的三甲胺水溶液(分析纯，Sigma-Aldrich)；甲醇(色谱级，TEDIA)；乙醇(色谱级，天津科密欧化学试剂有限公司)；丙酮(分析纯，莱阳康德化工有限公司)；氢氧化钠(分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司)；试验用水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Pora PLOT Amines毛细管色谱柱(25 m×0.32 mm×10 μm)；程序升温过程：初始温度110 ℃保持2 min，以15 ℃·min-1升到210 ℃，保持10 min；进样口温度：230 ℃；检测器温度：250 ℃；载气为N2；分流比为5∶1；进样体积：1 mL；柱流速：3.0 mL·min-1；氢火焰离子化检测器(FID)；顶空进样器条件：顶空瓶平衡温度80 ℃，定量环温度95 ℃，传输管线温度：110 ℃，顶空瓶平衡时间30 min，进样时间1.0 min，瓶压150 kPa。

2.2 溶液配制 三甲胺标准储备液：精密称定45%的三甲胺水溶液约44.5 mg，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取1 mL至20 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

三甲胺标准溶液：精密量取三甲胺标准贮备液1 mL 至10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

样品溶液：称取左卡尼汀约200 mg，精密称定，置20 mL顶空瓶中，加水5 mL，密封，振摇，使样品充分溶解，即得。

2.3 专属性试验 左卡尼汀原料药合成工艺中使用了甲醇、乙醇和丙酮这3种溶剂。为了防止甲醇、乙醇和丙酮干扰，因此专属性中增加这3种溶剂的定位。

各对照品储备液：精密称取甲醇24 mg、乙醇40 mg和丙酮40 mg，分别置20 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

混合标准溶液：分别精密量取各对照品储备液和三甲胺标准储备液各1 mL，置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

寻找强烈的色彩，比如拍摄色彩明艳的墙壁，生锈的波纹栅栏，或者颜色高调的商品，可以轻松获得具有强大视觉冲击的照片。

各对照品溶液：精密量取各对照品储备液各1 mL，分别置于10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

分别精密量取空白溶液、各对照品溶液、三甲胺标准溶液和混合标准溶液各5 mL，置20 mL顶空瓶中，密封。在上述检测条件下分别进样分析，空白溶液不干扰三甲胺出峰，各对照品溶液中甲醇的保留时间为9.064 min、丙酮的保留时间为10.673、乙醇的保留时间为11.406 min，三甲胺标准溶液中三甲胺保留时间为7.857 min，混合标准溶液(见图1)中各组分分离度良好，专属性符合可接受标准。

2.4 定量限和检测限测定 取三甲胺标准溶液逐步稀释，进样测定，按S/N≥10及S/N≥3分别计算定量限及检测限。通过试验确定三甲胺定量限浓度为0.083 4 μg·mL-1，检测限浓度为0.025 0 μg·mL-1。符合可接受标准。

2.5 线性关系测定 精密量取三甲胺标准溶液2 mL到50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，制成1#线性溶液。分别精密量取三甲胺标准储备液1、2、3 mL到40 mL量瓶中，加水稀释至刻度，制成2#～4#线性溶液。分别精密量取三甲胺标准储备液2、3 mL到20 mL量瓶中，加水稀释至刻度，制成5#和6#线性溶液。精密量取三甲胺标准储备液2 mL到10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，制成7#线性溶液。精密量取1#～7#线性溶液各5.0 mL，置20 mL顶空瓶中密封，分别进样。线性关系见表1。三甲胺在0.081 6～4.079 7 μg·mL-1，线性关系良好，相关系数为0.999 1，符合可接受标准。

表1 三甲胺的线性关系

2.6 回收率试验 精密称取供试品(批号：181002)12份，每份0.2 g，分别置12个20 mL顶空瓶中，其中3份加入5 mL水溶解，密封，作为空白供试品溶液，进样测定。空白供试品溶液中检出三甲胺，平均峰面积为620。其余的9份样品分3组各3份，分别加入线性项下的3#、5#、6#线性溶液5.0 mL，密封，溶解，依次进样测定，计算加样回收率。结果见表2，回收率均在80%～115%之间，符合可接受标准。

表2 三甲胺加样回收率试验结果(n=9)

2.7 精密度测定 精密称取供试品(批号：181002)9份，每份0.2 g，分别置9个20 mL顶空瓶中，其中3份加入5 mL水溶解，密封，作为空白供试品溶液，进样测定。其余的6份样品加入线性项下的5#线性溶液5.0 mL，密封，溶解，作为加标供试品溶液，依次进样测定，计算加样回收率。

为考察随机变动因素对精密度的影响，另一名分析人员于不同的日期单独建立系统，按重复性溶液配制方式重新配制中间精密度测试溶液，进行检测。通过考察重复性试验与中间精密度试验共12次测定结果，三甲胺回收率的RSD应不大于10%。结果见表3，三甲胺回收率的RSD为1.7%，符合可接受标准。

表3 三甲胺精密度试验结果(n=12)

2.8 耐用性试验

2.8.1 改变顶空条件 分别改变顶空瓶平衡温度±5 ℃；平衡时间±5 min，其他产地条件不变，将三甲胺标准溶液、供试品溶液和加标供试品溶液分别进样测定，三甲胺回收率的RSD应不大于10%。见表4，三甲胺回收率的RSD为3.5%，符合规定。

表4 顶空条件耐用性试验结果

2.8.2 改变GC测定条件 分别改变柱流速±0.1 mL·min-1；改变进样口温度及检测器温度±5 ℃，其他测定条件及顶空条件不变，将三甲胺标准溶液、供试品溶液和加标供试品溶液分别进样测定，三甲胺回收率的RSD应不大于10%。三甲胺回收率的RSD为1.7%(见表5)，符合规定。

表5 顶空条件耐用性试验结果

综上，测定条件耐用性较好。

2.9 左卡尼汀中三甲胺含量测定 精密称取供试品(批号:181002、180701、180702、180703)0.2 g，分别置20 mL顶空瓶中，分别精密量取5.0 mL水，密封溶解后进样测定，按外标法计算供试品中三甲胺含量。结果见表6。

3 讨论

左卡尼汀原料药在《中国药典》及国外药典(EP10、BP2020、USP43-NF38)中均有收载，但未见对三甲胺进行控制。我们根据三甲胺特性，选择适用于胺类化合物和氨气分析的高保留Pora PLOT Amines气相专用柱，通过优化升温程序，从而获得较好峰型。本文建立的顶空气相色谱法准确度高，耐用性好，适合左卡尼汀原料药中三甲胺测定。在标准中增加对三甲胺的控制，可更加有效地控制药品质量。

表6 左卡尼汀中三甲胺含量测定结果