全自动核酸检测分析系统在无偿献血者病毒检测中的应用

刘永霞, 刘 欢, 刘 燕, 赵 妮

(延安大学附属医院 输血科, 陕西 延安, 716000)

保证血液及血液制品的安全性和提高输血相关传染病的防控能力等是目前临床广泛关注的焦点[1]。中国常用的血液筛查方法是以检测血液中病毒抗原或抗体滴度为原理的酶联免疫吸附试验(ELISA)法，但该方法具有较长的病毒感染检测窗口期，使得窗口期病毒检测结果呈假阴性，降低了对血液病毒的有效防控能力[2-3]。核酸检测法是一种利用核酸扩增技术直接检测病原体核酸的新型血液病毒筛查检测技术，该方法敏感度高，可检测出微量病毒，并将乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)感染窗口期分别缩短9～36 d、25～60 d和7～15 d, 大大降低了血液传播病毒的感染风险[4-6]。2010年起中国将核酸检测法应用于血液病毒筛查工作中，为加强临床输血安全和降低输血相关传染病发生率提供了可能[7]。为了探讨核酸检测法在血液筛查中的临床应用价值，本研究将全自动核酸检测分析系统应用于无偿献血者血液HBV、HCV和HIV检测中，并与ELISA法检测结果进行比较，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1—5月在延安市中心血站献血的1 229例无偿献血者作为研究对象，其中男658例、女571例，年龄20～55岁，平均(41.14±6.49)岁。每位献血者均采集2管静脉血, 1管(7 mL真空抗凝管)用于ELISA检测，另外1管(5 mL EDTA-K2抗凝带分离胶真空采血管)用于核酸检测。

1.2 检测方法

1.2.1 ELISA检测: 收集7 mL静脉血转移至真空抗凝管中，室温条件下，离心20 min后保存于2～8 ℃冰箱中备用。采用全自动加样仪自动加样，全自动酶免分析仪分析血液，详细记录检测结果。

1.2.2 核酸检测: 将经离心处理的5 mL血样应用全自动核酸提取仪进行处理。汇集管中样本总量为1 440 μL加入1 000 μL裂解液和40 μL磁珠，加100 μL去抑制剂裂解血液样本，注意防止血样污染。分别加950 μL的A、B、C洗液洗脱后，加入120 μL结合液，核酸提取仪从96孔深孔板中提取核酸，同时配备扩增核酸的反应液。核酸扩增步骤为加入核酸提取液及新配制的核酸扩增液反应液，随后置于ABI7500 PCR仪进行扩增分析，详细记录结果，并根据阳性血液样本数目计算血液样本阳性率。

1.3 统计学处理

采用SPSS 19.0统计学软件分析本研究数据，计数资料的比较使用McNemar检验，检验水准α=0.05, 以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 2种方法的HBV检测结果比较

核酸检测的HBV阳性率为2.03%(25/1 229), 高于ELISA检测的HBV阳性率0.98%(12/1 229), 差异有统计学意义(P<0.05), 见表1。

表1 核酸检测与ELISA检测的HBV检测结果比较

2.2 2种方法的HCV检测结果比较

核酸检测的HCV阳性率为1.22%(15/1 229), 高于ELISA检测的HCV阳性率1.14%(14/1 229), 但差异无统计学意义(P>0.05), 见表2。

表2 核酸检测与ELISA检测的HCV检测结果比较

2.3 2种方法的HIV检测结果比较

核酸检测的HIV阳性率为0.24%(3/1 229), 低于ELISA检测的HIV阳性率1.06%(13/1 229), 差异有统计学意义(P<0.05), 见表3。

表3 核酸检测与ELISA检测的HIV检测结果比较

3 讨 论

目前，经血液传播疾病有20多种，其中包括艾滋病、乙型肝炎、丙型肝炎等传染性较强的疾病。无偿献血者血液中存在HBV、HCV、HIV的概率不断升高[8], 因此做好血液病毒筛查工作对于保证血液及血液制品的质量至关重要。临床上常选用特异性较高的ELISA法进行血液病毒筛查，但该方法的影响因素较多[9-11]: ① 血样污染。非一次性全自动酶免分析仪使用自动加样针，若加样针被阳性血样污染后未彻底清洗，会导致下一次血样检查出现假阳性。② 抗原试剂质量不达标也可能影响检测结果。国产抗原试剂一般纯度较低，易造成假阳性，而进口试剂纯度较高，假阳性率相对较低, 2种试剂联合检测可提升血样结果的真阳性概率。相关研究[12]显示，应用国产抗原试剂进行ELISA检测时，由于试剂质量不高，检测结果假阳性率可高达0.18%。③ 样本溶血、自身免疫性抗体和有交叉反应的物质等也会影响检测结果。病毒进入体内至能够被检测到的时间为病毒感染的窗口期，ELISA检测窗口期较长，可使窗口期血液病毒的检查结果呈假阴性，但实际上此时已存在病毒感染，且病毒具有一定复制能力，传染能力较强。

病原体核酸检测技术简称核酸检测技术，利用生物、物理、化学技术对微量靶核酸及其附带的信号进行扩增并转化成光电和可视信号来反映病毒阳性情况。本研究结果显示，核酸检测技术对HBV的检测阳性率高于ELISA检测，差异有统计学意义(P<0.05), 与何培元等[13]研究结论一致。李天驹等[14]报道，核酸检测技术能检测极微量病毒感染几天后的感染情况，灵敏度较高。相关研究[15]显示，核酸检测法不仅能使HBV检测窗口期缩短25 d, 还能避免ELISA法的HBV筛查假阳性率高现象。虽然核酸检测法并不能完全消除窗口期的影响，但未能被此法检测到时的HBV传染能力较弱，故采用核酸检测法筛查HBV可大大降低HBV输血传播风险。本研究结果显示，相较于核酸检测技术, ELISA法对血液HIV具有更高的筛查阳性率，说明ELISA法更适用于血液HIV筛查，这可能与病毒载量低、未能达到核酸检测水平有关。但当机体长期处于病毒感染状态时，血液中抗原和抗体滴度较高，不影响ELISA检测。尽管如此，本研究中ELISA法的HIV检测阳性率仅1.06%, 出现漏诊现象的原因主要是窗口期的影响，且HIV属于RNA病毒，结构不稳定，故采用ELISA法检测易出现假阴性。核酸检测法是检测病毒核酸，ELISA法则是检测抗原或抗体, 2种检测方法的应用原理不同，联合应用时可有效提高血液病毒筛查的灵敏性和特异性，进而提升血液筛查的准确性。相较于ELISA法，核酸检测法需要更高的样本处理和操作技术，实验室条件要求和检测成本更高，且检测载量低的病毒时易出现假阴性，此时采用ELISA法检测血液中抗原或抗体滴度可提高血液病毒筛查阳性率。

综上所述，全自动核酸检测分析系统在无偿献血者血液HBV、HCV、HIV检测中具有重要作用，与ELISA法比较各具优势, 2种方法联合应用可提高病毒检测结果的准确性，进而提升血液筛查的安全性。