肉鸡马立克氏病荧光PCR诊断

陈忠琼，骆璐，凌洪权，董春霞，姚璐，蒋佳利，欧阳吴莉，李泰，曾政

（重庆市动物疫病预防控制中心，重庆渝北 401120）

马立克氏病（MD）是由马立克氏病病毒（MDV）引起的一种常见的禽类淋巴组织增生性传染病，病禽以外周神经、虹膜、脏器及皮肤等组织器官发生单核细胞浸润并形成肿瘤为特征。依据生物学特性将MDV分成3个血清型，MDV-1型为致瘤MDV，MDV-2 型为不致瘤MDV，MDV-3 型为HVT，其中只有MDV-1 型才具有致病性。不同品种或品系的鸡均可感染该病，母鸡比公鸡更易感。该病一般发生于1 月龄以上的鸡，2～7月龄为发病高峰。

1 发病情况

某肉鸡场（存栏量约16 000 羽）90 日龄左右的鸡陆续出现发病、死亡，1 个月内发病约3 000羽，死亡约2 000羽。

患鸡精神沉郁、羽毛松乱、食欲不振、极度消瘦，最终衰竭而亡，有些病鸡出现肢体麻痹，步态不稳等症状。病鸡经抗菌药物治疗，无明显效果。

2 实验室检查

采集10份患鸡肾脏、肝脏、脾脏、心脏病料应用荧光PCR方法进行检测。

2.1 检测材料

2.1.1 样品 剪取待检组织病料约1 g 研磨后加入1.5 mL PBS 液继续缓慢研磨成匀浆，取匀浆液转移到2 mL 无DNA、RNA 酶污染的离心管中，8 000 r/min 离心5 min 后，取上清液备用。

2.1.2 试剂 病毒RNA/DNA 提取试剂盒；禽马立克氏病毒单重荧光PCR检测试剂盒。

2.2 检测方法 参照病毒RNA/DNA提取试剂盒使用说明书，提取组织病料中的马立克氏病毒DNA。操作如下：在每个PCR 反应管中先加入荧光PCR 反应液15 μL，之后再分别向每个PCR反应管中加入模板DNA 5 μL。在荧光PCR 仪上进行50 ℃2 min，95 ℃10 min，循环95 ℃15 s，60℃60s，共40次，在每次循环第二步（60℃60s）收集荧光FAM信号的扩增反应。

3 检测结果

10 份病料均出现马立克氏病病毒核酸特异性荧光曲线，结果均为阳性。

4 小结

马立克氏病是家禽常见的免疫抑制性传染病，MDV一旦感染，不论鸡群免疫状态如何，都会在鸡群中快速传播，并长期存在，这也是MD难以控制的原因。

及时、准确、高效地对MD进行诊断有重要的防控意义。MD 实验室诊断方法较多，包括病毒分离、琼脂扩散试验、ELISA、PCR 法、荧光PCR法、间接免疫荧光法等，其中荧光PCR 是定量检测方法，具有灵敏性高、特异性强、速度快等优点。■