四君子汤对大肠癌术后化疗患者肠道菌群及免疫功能影响的临床研究

章斐然，谢澳斯，张金海，蔡晓敏，陈君填，李 威

(汕头大学医学院第一附属医院 1.胃肠外科，2.中医科，广东 汕头 515041)

大肠癌为我国常见肿瘤，居我国癌症发病及死亡的第4位[1]，严重威胁人民健康。大肠癌患者行外科手术是获得治愈机会的必要选择。大肠癌手术对肠道造成不同程度损伤，干扰肠道微生态，且手术作为应激源，可进一步破坏肠道屏障，导致肠道微生态变化[2]。术后辅以化疗成为大多数大肠癌患者的必经途径。术后化疗会进一步导致肠道菌群失调[3]。化疗细胞毒性药物直接或间接杀死免疫效应细胞，可导致免疫系统功能低下或免疫无能[4]。四君子汤为祖国医学经典药方，出自宋代《太平惠民合剂局方》，由白术、茯苓、人参、炙甘草等组成，具有健脾益气功效，临床主要用于脾虚证治疗[5]。临床上恶性肿瘤患者化疗后往往存在脾虚证[6]。动物研究[7-8]显示健脾益气类方药能通过调节肠道菌群，改善患者免疫功能。然而对四君子汤对大肠癌术后化疗患者作用研究的报道较少。本研究采用健脾益气方药配合化疗，观察四君子汤加减对大肠癌术后化疗患者肠道菌群及机体免疫功能的影响，探讨该方对化疗患者的肠道菌群调节及免疫作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017年10月—2018年10月在汕头大学医学院第一附属医院胃肠外科行大肠癌根治手术患者60例，其中男性32例，女性28例，平均年龄(56.4±10.2)岁。采用病例随机对照研究方法，将入选患者分成中药加化疗组(30例)和单独化疗组(30例)。纳入标准：术后病理结果确诊大肠癌，肿瘤分期Ⅰ～Ⅲ期，术后恢复良好，术后1个月内行mFOLFOX6方案化疗；年龄在18～60岁之间；无重大基础疾病，化疗用药前后2周无使用相关抗生素。排除标准：肠造口患者；有严重内分泌、心血管、血液、肝、肾等系统疾病以及骨髓抑制患者；孕妇及哺乳期妇女；明确表示拒绝中医药相关治疗患者。本研究经汕头大学医学院第一附属医院伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 治疗组口服健脾益气方药(四君子汤制剂加减)联合大肠癌一线标准化疗mFOLFOX6方案(奥沙利铂135 mg/m2，静滴3 h；亚叶酸钙200 mg/m2，静滴2 h，5-氟尿嘧啶400 mg/m2，静脉注射；5-氟尿嘧啶3 000 mg/m2，持续泵注48 h，在推注5-氟尿嘧啶后执行)，2周为1个周期，术后第1次化疗；对照组单纯化疗，方案同治疗组。四君子汤制剂组方：黄芪30 g，当归6 g，西洋参5 g，白术12 g，败酱草30 g，白花蛇舌草30 g，茯苓30 g，山药30 g，薏苡仁30 g，甘草6 g。100 mL/次，2次/d，10 d为1个疗程，化疗前10 d开始服用，连续服用10 d。

1.2.2 肠道菌群检测 取新鲜粪便3～5 g于无菌瓶内并0.5 h内送检。取0.5 g粪便，加入无菌稀释液稀释，根据不同菌种要求，选择不同稀释度，分别接种于相应培养基上。需氧菌(肠杆菌、肠球菌)置37℃培养箱培养，24 h后进行菌落计数。厌氧菌(双歧杆菌、乳杆菌)采用Gas Pak厌氧培养，48～72 h后进行菌落计数。结果以每克粪便中菌落形成单位(colony forming unit，CFU)的常用对数值(lg CFU/g)表示。

1.2.3 其他观察指标 免疫功能：分别于化疗前10 d及化疗后4 d抽取静脉血1 mL，用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8、CD4/CD8)和NK细胞百分比。生活质量：采用卡氏功能状态(Karnofsky performance status，KPS)评分评估患者的生活质量，治疗前后KPS评分提高≥10分为改善；减少≥10分为降低；增加或减少＜10分为稳定。骨髓抑制程度评价：采用世界卫生组织抗癌药物急性及亚急性毒性反应分度标准，0～Ⅰ度为轻微，Ⅱ度为中等，Ⅲ～Ⅳ度为严重。

1.3 统计学方法

应用SPSS 25.0统计软件进行分析。符合正态分布的计量资料以±s表示，组间比较用t检验；计数资料以例数或百分率表示，组间比较用卡方检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料

2组患者一般资料比较，差异无统计学意义(均P＜0.05)。见表1。

表1 2组一般资料比较 (n=30)

2.2 2组治疗前后肠道菌群变化比较

大肠癌术后化疗患者的肠道菌群失衡，中药加化疗组双歧杆菌及乳杆菌较单纯化疗组增多(均P＜0.05)，肠杆菌及肠球菌无明显变化(P＞0.05)，说明四君子汤可促进益生菌生长，见表2。

2.3 2组治疗前后免疫功能比较

中药加化疗组CD3、CD4、CD4/CD8水平较单独化疗组高(均P＜0.05)，两组NK细胞百分比差异无统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表2 2组治疗前后肠道菌群变化比较 (n=30，±s，lg CFU/g)

表2 2组治疗前后肠道菌群变化比较 (n=30，±s，lg CFU/g)

1)：与单纯化疗组相比，P＜0.05。

治疗后5.94±0.30 5.84±0.25组别中药加化疗组单纯化疗组双歧杆菌治疗前6.18±0.26 6.02±0.25治疗后8.12±0.311)5.83±0.36乳杆菌治疗前7.52±0.29 7.22±0.41治疗后8.62±0.361)6.94±0.21肠杆菌治疗前7.02±0.23 6.82±0.34治疗后7.01±0.15 6.92±0.21肠球菌治疗前5.82±0.27 5.62±0.36

表3 2组治疗前后免疫功能比较 (n=30，±s，%)

表3 2组治疗前后免疫功能比较 (n=30，±s，%)

1)：与单纯化疗组相比，P＜0.05。

组别中药加化疗组单纯化疗组CD3治疗前60.28±10.06 59.42±10.35治疗后66.02±11.311)58.23±11.26 CD4治疗前32.12±8.29 30.22±8.41治疗后37.68±9.361)29.96±0.31 CD8治疗前24.02±7.23 23.82±8.04治疗后23.31±8.15 22.92±7.81 CD4/CD8治疗前1.52±0.57 1.44±0.66治疗后1.90±0.601)1.31±0.75 NK细胞治疗前23.45±10.87 20.16±9.97治疗后22.96±11.87 20.86±11.07

2.4 2组治疗后KPS评分及骨髓抑制程度比较

中药加化疗组患者治疗后KPS评分高于单纯化疗组(P＜0.05)，见表4；2组患者骨髓抑制程度差异无统计学意义(P＞0.05)，见表5。

表4 2组治疗后KPS评分对比 (n=30)

表5 2组治疗后骨髓抑制程度对比 (n=30)

3 讨论

越来越多的临床及实验证实中医药与肠道微生态关系密切，中草药作为微生态调节剂，对人体的生理代谢功能发挥重要作用[9-10]。马祥雪等[10]假定中医的“证”或“症”就是人体肠道微生态变化产生的某些继发反应导致的“表观现象”，通过药物调理肠内菌群的平衡，对“证”施以影响，对证下药，达到治疗疾病的目的，因此肠道微生态的微小变化都可以对“证”产生深远的影响。本研究结果显示，中药加化疗组患者在服用四君子汤后，肠道内双歧杆菌及乳杆菌较单纯化疗组增多，说明四君子汤可促进肠道正常菌群生长。免疫功能指标CD3、CD4、CD4/CD8水平较单纯化疗组高，提示四君子汤能增强大肠癌术后化疗患者的免疫功能，其具体机制是单独作用还是通过调节肠道微生态来协同作用，尚需进一步研究。

综上所述，以四君子汤为代表的健脾益气方药能调节肠道微生态，减少肠道菌群紊乱，并能增强患者机体免疫力，给肿瘤患者的综合治疗提供了有利条件，值得临床推广应用。本研究拓宽了中医方药在肿瘤化疗领域的有效应用。