牛白血病的流行病学及常用诊断方法

刘伟彬/内蒙古锡林郭勒盟阿巴嘎旗吉尔嘎郎图苏木综合保障和技术推广中心 011499

牛白血病病毒是牛地方流行性白血病（又称牛白血病）的病原，是制约我国乃至全世界牛品种选育和牛养殖经济健康持续发展的重要影响病原体之一。牛白血病在世界大部分国家的牛群中均有存在，在我国北京、上海、新疆等省市也报道过牛白血病病例存在。牛白血病病毒感染可导致多种临床结果，大多数牛白血病病毒感染的牛是病毒的无症状携带动物，既没有任何临床症状，也没有任何血液淋巴细胞生化变化。大量研究报道表明牛白血病病毒感染但临床上表现正常的牛可能表现出一定程度的免疫失调、牛奶产量减少、传染病高发和生殖效率低下从而导致经济损失。大约1/3 的受感染牛会出现未转化B 淋巴细胞的良性非恶性增殖形式，称为持续性淋巴细胞增多症。不到5%的受感染牛在相对较长的潜伏期后发展为恶性 B 细胞淋巴瘤，这种恶性 B 细胞淋巴瘤主要在4～5岁以上的牛中检测到，恶性肿瘤会导致脾脏破裂和淋巴结显着增大，这些病变可在皮肤下见的。牛白血病的肿瘤细胞可以渗透到胃、心脏、肠和子宫等器官，从而导致牛白血病的临床症状多种多样，主要常见症状包括消化障碍、病牛体重减轻、产奶量减少等。

1 牛白血病的流行病学

牛白血病病毒可感染多种反刍动物，但主要的易感宿主和产生经济损失的动物为牛，包括奶牛、肉牛和牦牛，但相对比，奶牛受牛白血病病毒的影响更大。牛白血病可在各日龄的牛中出现，但以低日龄牛的易感性和临床症状程度更为严重。目前，无人感染牛白血病病毒发病的有力证据。牛白血病病毒可通过水平和垂直两种传播途径在牛群中传播，对于犊牛来说，两种途径均可感染，一方面犊牛可通过带毒牛垂直感染牛白血病病毒，另一方面，犊牛也可通过带有牛白血病的牛乳、呼吸道吸入病毒或直接接触带毒牛水平感染。由于牛白血病病毒感染后可出现无症状携带者，该种带毒牛对牛群的威胁更大。此外，输液、疫苗接种等操作也可导致牛白血病的传播，使用未消毒的输液等相关医疗器械，导致易感染接触带毒牛的血液造成感染。此外，蚊、蝇等吸血性昆虫在牛白血病的传播过程中也具有重要作用。

2 牛白血病在中国的流行情况

牛白血病病毒已经通过种畜贸易传播到各大洲，并且在全世界的牛中很普遍。牛白血病病毒的感染水平在国家之间和国家内部地区之间有所不同。牛白血病在中国奶牛场中的流行率较高，牛白血病病毒感染率最高可达49.1%，而肉牛场的牛白血病病毒阳性率甚至不到1.6%。此外，血清学检测显示，中国20.1%的牦牛为 BLV 阳性。

3 牛白血病的诊断

目前，已有多种牛白血病病毒的检测方法可供选择，这些方法可分为两种，一种是基于牛白血病病毒特异性抗体的血清学检测方法，另一种为基于病毒核酸的分子生物学检测方法。

3.1 血清学检测牛白血病病毒的血清学检测方法是临床上较为常见的检测方法之一，这些检测方法基于牛白血病病毒特异性抗体，牛白血病病毒p24衣壳蛋白和细胞外gp51 蛋白的抗体是血清学检测的目标。大多数血清学方法旨在检测牛血清和牛奶中的抗体，以及牛白血病病毒感染细胞培养物的上清液。琼脂免疫扩散试验是一种相对于其他血清学检测方法检测成本更低，可用于同时筛查多个血清样本的方法，但该检测方法存在不够灵敏并且不适合分析牛奶样品的缺点。ELISA 是一种高度灵敏且易于实施的牛白血病病毒的血清学检查方法，可用于分析血清和牛奶样品，但是ELISA 需要许多对照，并且部分血清样本中可能会产生假阴性结果。总的来说，这些基于抗体的血清学检测方法不能用于检测小于6个月大的小牛，因为小牛样品中可存在母体抗体，这可能会引发假阳性结果。

3.2 基于病毒基因组的分子生物学检测方法牛白血病病毒可以整合到宿主基因组内并可保留在宿主细胞基因组中，因此即使没有检测的牛白血病病毒抗体但仍可以检测到病毒核酸。事实上，传统检测技术几乎无法检测到来自感染动物的新鲜肿瘤或外周血单核细胞样本中牛白血病病毒基因组，但随着分子生物学技术的发展使得从上述样品中检测牛白血病病毒基因组成为可可能。因此，除了使用上述常规血清学检测技术对牛白血病病毒感染进行常规诊断外，基于核酸的 PCR 方法可以大大加速牛白血病流行的检测进程。包括标准的PCR，巢式PCR，实时定量PCR（qPCR）和基于血液的直接PCR在内的多种PCR 检测方法已在世界范围内广泛应用于牛白血病病毒检测。然而，PCR 检测方法需要昂贵PCR 仪器和试剂，并且样品制作过程复杂且要求操作人员具有一定的科学背景和试验基础。最近，研发了一种新的基于血液的 PCR 检测系统，该系统无需 DNA分离和纯化即可扩增目标 DNA。该检测方法可以以高特异性和低检测牛白血病病毒的成本，有助于及时检测出牛白血病病毒感染的牛。

如上所述，基于 PCR 的基因组筛选方法诊断牛白血病病毒对多种类型的样品均可以进行检测，并提高了检测的灵敏度、特异性和效率，耗时更少。PCR 还可检测出抗体前几周内检测易感牛的感染情况。然而，基于 PCR 的病毒筛查涉及复杂的样品制备过程，可能会导致假阳性结果。此外，基于 PCR的牛白血病病毒检测方法需要特定的实验室设施，包括 PCR 仪，并且还需要设计特定的引物和探针。

4 结语

目前，仍无市售商品化的牛白血病病毒疫苗和特效治疗药物，大部分牛场对牛白血病病毒控制主要通过检测、淘汰等方法。在牛白血病病毒的防控工作中，牛白血病病毒的诊断是防控工作的基础。由于大部分感染牛白血病病毒的牛不表现任何临床症状，这对临床诊断造成可严重的障碍，但高度特异和灵敏的实验室检测方法可以解决该问题。由于对牛白血病病毒的知识上的欠缺，目前虽然已经有多种可用于牛白血病病毒的检测方法，但仍存在技术上的欠缺。因此，在未来的研究中，一方面要应用现有的检测技术了解牛群中牛白血病病毒的流行情况，定期监测牛群的抗原或抗体水平，尤其是在奶牛场。另一方面，应进一步加快对牛白血病病毒的致病机理、传播方式等方面的基础研究，从而针对性的开发牛白血病病毒的诊断方法和特效疫苗药物等，进一步改进牛白血病病毒的防控方法，提高防控效果。