一例鸭瘟与鸭疫里默氏杆菌混合感染的诊断报告

祖立闯，曹文学，吴春霞

（1.山东绿都生物科技有限公司 山东滨州 256600；2.邹平市农业农村局 山东滨州 256200；3.滨州市沾化区农业农村综合服务中心 山东滨州 256800）

鸭瘟又名鸭病毒性肠炎，是由鸭疱疹病毒I 型引起的一种急性、热性、败血性传染病，鸭、鹅及多种雁形目禽类均易感，其临床特征主要表现为肿头流泪、两腿麻痹、实质器官退行性病变等[1,2]。鸭疫里默氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎，是由鸭疫里默氏杆菌引起的一种败血性、接触性传染病，雏鸭、雏鹅、雏火鸡等禽类均易感，其临床特征主要表现为纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎和关节炎等[3,4]。鸭瘟和鸭疫里默氏杆菌病均是当前危害我国养鸭业的主要疫病，2020 年3 月，山东省高青县某鸭场发生了疑似鸭瘟和鸭疫里默氏杆菌病混合感染病例，通过临床和实验室诊断对该病例进行了确诊，现将整个诊断过程报告如下。

1 发病情况

该鸭场共饲养肉鸭10,000 余羽，2020 年3 月中旬饲养的29日龄肉鸭率先发病，发病鸭精神委顿、食欲下降、流泪、咳嗽、腹泻，一般发病后2～3d 死亡，发病初期死亡率较低，但发病4d 后死亡率迅速增加。经询问，该场进行了新城疫、禽流感等疫苗的免疫接种，但未进行鸭瘟、鸭疫里默氏杆菌疫苗的免疫接种。

2 临床症状

发病鸭精神委顿，采食量下降甚至废绝，体温升高，羽毛松乱，翅膀下垂，两腿麻痹无力，伏地不愿行走，呼吸困难，咳嗽，头颈部明显肿胀，眼睑水肿，流泪，流鼻涕，具有下痢症状，排黄绿色或绿色稀粪，消瘦，衰竭至死亡。

3 病理变化

解剖病死鸭可见心包膜混浊、增厚，心外膜有纤维素性渗出物，肝脏肿大、出血、表面具有黄白色黏膜，脾脏肿大、坏死、呈暗褐色，腺胃黏膜和肌胃出血，整个肠黏膜充血、出血，气囊内具有干酪性渗出物，眼结膜出血，鼻孔和鼻窦内具有大量分泌物。

4 实验室病毒学PCR检测

4.1 临床病料样品的处理与核酸提取

采集病死鸭的肝脏、脾脏、肠黏膜等组织病料，将其溶解于5倍体积灭菌生理盐水中，经研磨、冻融后，以12,000r/min 离心5min，吸取0.2mL上清液即为处理后的临床病料样品。利用病毒基因组DNA 提取试剂盒提取处理后的临床病料样品的核酸DNA。

4.2 引物合成

参照万春和等[5]建立的鸭瘟病毒PCR 检测方法，设计合成1对鸭瘟病毒特异性检测引物（上游引物：5'-TAACGTCGTTTATACTGTTCCAC-3'；下游引物：5'-AGACCCAAATGACAGAACCT-3'），该特异性引物对鸭瘟病毒强毒株的预期扩增片段大小为1,019b p。

4.3 PCR扩增

利用合成的鸭瘟检测引物对临床病料核酸DNA 进行PCR 扩增，PCR 扩增反应体系为：Premix Ta q 25μL、上下游引物各1.0μL、核酸DNA 5μL、水18μL。PCR 扩增反应程序为：95℃5min；95℃45s，55℃45s，72℃45s，30 个循环；72℃10min。PCR 扩增结束后，取5μLPCR 扩增产物进行1.0%琼脂糖核酸电泳，结果显示扩增产物在1,019b p 处具有一条特异性扩增条带（如图1 所示），与预期大小一致，表明临床病料样品存在鸭瘟病毒核酸。

图1 PCR 扩增结果

5 实验室细菌学检验

5.1 细菌分离培养

无菌采集病死鸡的脑组织，将其划线接种含5%鸡血清营养琼脂平板，37℃厌氧培养24h 后，平板上生长出直径大小为1～2mm 的单菌落，单菌落呈半透明、边缘整齐和奶油状，符合鸭疫里默氏杆菌的菌落特征。

5.2 形态特征观察

挑取分离菌株单菌落进行涂片、革兰氏染色和镜检，结果如图2 所示，显微镜下可见大量革兰氏阴性小杆菌，单个或成双存在，部分可见长丝状，不形成芽孢，符合鸭疫里默氏杆菌的形态特征。

图2 染色镜检观察结果

5.3 生化鉴定试验

将培养的分离菌株依次接种常规生化发酵管进行生化鉴定试验，结果如表1 所示，分离菌株对糖的分解活性较弱，具有明显的糖发酵惰性，符合鸭疫里默氏杆菌的生化特性。

5.4 药敏试验

采用K-B涂布法测定分离菌株对常见药物的敏感性，结果表明分离菌株对氟苯尼考、阿莫西林、左氧氟沙星、强力霉素和头孢噻肟等药物敏感，对磷霉素和链霉素耐药。

6 综合诊断结果

综合发病情况、临床特征和病理变化等临床诊断结果以及病毒学PCR 检测、细菌学检验等实验室诊断结果，综合判定致病原为鸭瘟和鸭疫里默氏杆菌混合感染。

7 讨论

近年来，随着我国水禽养殖产业的快速发展，鸭群异地流通加剧，鸭病流行情况日益复杂，疫病混合感染情况时常发生，疫病的混合感染或并发感染不仅增加了疫病的危害程度和养殖经济损失，也使临床诊断和治疗难上加难。对于混合感染的病例，仅通过临床特征很难进行确诊，需要借助实验室检测方法进行鉴别诊断。在病毒学的实验室检测方法方面，PCR 方法具有操作简单、检测快速、灵敏度高和特异性强等优点，且能够检测到致病原特异性的核苷酸序列，是目前基层兽医实验室进行疫病确诊的常用分子生物学检测方法，故在本病例中，利用万春和等[5]建立的鸭瘟病毒PCR检测方法对临床病料进行了检测，增加了诊断结果的准确性。在细菌学的实验室检测方法方面，细菌的培养特征、形态特征和生化特性等基本特征能够鉴别不同菌群，也是基层兽医实验室进行细菌检验的常用检测方法，故本病例通过培养特征和形态特征观察、生化鉴定试验等对临床病料进行了检测，确定致病原中存在鸭疫里默氏杆菌。由于抗生素在养殖生产中的大量滥用，导致细菌耐药性逐步增加，本病例通过药敏试验证实该鸭场的鸭疫里默氏杆菌已经对磷霉素、链霉素产生了耐药性，应加强重视。同时，本病例中通过药敏试验筛选到了氟苯尼考、阿莫西林、盐酸多西环素以及头孢噻呋等敏感性药物，为及时准确的选择治疗药物提供了参考依据，也避免了抗生素的进一步滥用。总之，本研究结合临床诊断和实验室检测方法对此次疫病进行了确诊，准确诊断致病原为鸭瘟和鸭疫里默氏杆菌混合感染，使养殖场能够及时快速采取针对性治疗措施，并有效降低了经济损失，同时也提醒基层兽医同仁在临床诊断时要慎之又慎，不能确诊的病例要及时送实验室进行检测，争取最佳治疗时机，避免误诊。

表1 生化试验结果