绵羊链球菌病病例的诊治

沈辰峰， 陈世军， 夏 俊， 王 杰， 韩 涛， 参都哈西， 哈力旦木， 樊 华， 楚高洁

(1.新疆畜牧科学院兽医研究所， 新疆乌鲁木齐830000 ； 2. 新疆农业大学动物医学学院， 新疆乌鲁木齐830000)

羊链球菌病，即羊败血性链球菌病[1]，以败血症、颌下淋巴结肿大、咽喉肿胀、大叶性肺炎、脏器出血、胆囊肿大为主要临床特征。绵羊易感性高，山羊次之，一年四季均可发生，冬春季多发。新发病区常呈地方性流行，老疫区则多为散发[2]。本病主要经呼吸道、消化道和损伤的皮肤感染，病羊和病死羊是本病的主要传染源[3]。本文介绍了一起羊链球菌病病例，对其发病情况、临床症状、病理剖检、实验室诊断以及防治结果进行了总结，供同行参考。

1 发病情况

新疆呼图壁雀儿沟邻近的3家养殖户，共有小尾寒羊成年母羊150只，羔羊130只。2018年3月20日，3家养殖户的羔羊陆续发病，主要表现为高热、精神不振、急性死亡，3 d左右发病羔羊达80只，发病率61.5%，病死羔羊30只，病死率37.5%。成年羊发病13只，但未见死亡，主要病症为发热，咳嗽，下颌淋巴结肿大，表现出肺炎症状。

2 症状

病初体温高达41 ℃，精神沉郁、呼吸困难、咳嗽、不愿行走；饮食欲减退或废绝；眼部有少量分泌物；口腔流涎，鼻腔流出浆液性或脓性分泌物；咽喉部及下颌淋巴结肿大，部分病例可见眼睑、口唇、面颊肿胀；有的粪便稀软，带有黏液或血液；病死前常有磨牙、呻吟及头颈歪斜或抽搐等现象。病程大多2～3 d，急性死亡病羔无明显临床症状。

3 剖检变化

病死羔羊淋巴结肿大，出血，坏死；鼻腔、咽喉、气管黏膜水肿、充血；心包大量积液，心脏瓣膜出血；肺脏大面积淤血呈暗红色，出现肝变区，有的肺脏与胸膜粘连；肝脏稍肿，表面有少量出血点，胆囊肿大明显，充满墨绿色胆汁；脾脏肿大，有小出血点；肾脏质脆肿胀；有的胃肠黏膜肿胀，充血出血。

4 实验室检验

4.1 血液常规检查 病羊颈静脉无菌采血4份，实验室送检。结果显示：主要变化为白细胞(WBC)、中性粒细胞百分比(Neu%)升高，淋巴细胞百分比(Lym%)下降，核左移(Band.N%/Neu%>0.1)，提示细菌感染性疾病；严重病羊红细胞(RBC)降低，提示发生贫血；血小板(PLT)下降，提示凝血功能降低，机体存在多脏器出血性倾向。病羊血液常规结果见表1。

4.2 染色镜检 取病死羔羊的肺脏、肝脏、脾脏、心血等触片，干燥、固定、瑞氏染色后，显微镜下观察，可见成对排列或个别呈短链状排列的球菌。

4.3 过氧化氢酶试验 挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加30%的双氧水2 mL。结果显示：30 s内没有产生气泡(氧气)，为阴性，说明此菌株不含过氧化氢酶，不是葡萄球菌或微球菌，而是链球菌。

表1 病羊血液常规检测结果

4.4 细菌分离培养 无菌采集血液、肝脏、脾脏、淋巴结等病料，接种在葡萄糖胱氨酸鲜血琼脂培养基上，于37 ℃培养24 h，可见灰白色、圆形、隆起、光滑、半透明、露滴状的小菌落，直径0.5～1.0 mm，多数在菌落周围出现明显β型溶血环。勾取小菌落涂片染色镜检(革兰染色)，可见大部分呈长短链状排列的革兰阳性球菌。该菌不形成芽孢，无鞭毛不运动。

4.5 PCR扩增鉴定

4.5.1 引物设计与合成 细菌鉴定通用引物：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′；5′-ACGGTTACCTTGTTACGACTT-3′。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成[4]。

4.5.2 16S rRNA 基因的PCR扩增 在葡萄糖胱氨酸鲜血琼脂培养基上无菌挑取单个菌落直接加入到反应体系中进行菌落PCR 扩增。反应体系(25 μL)： 2×TaqPCR Master Mix 12.5 μL，引物各1 μL， 超纯水补至25 μL；反应条件：94 ℃预变性5 min； 94 ℃循环变性30 s，56 ℃退火复性30 s，72 ℃延伸40 s，进行30个循环；72 ℃终延伸10 min，最后4 ℃保存。反应结束后产物经1%琼脂糖凝胶电泳，用琼脂凝胶回收试剂盒。将PCR产物回收后，送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。

4.5.3 PCR扩增结果 对测序结果进行BLAST分析， 显示该菌16S rRNA基因序列与链球菌16S rRNA 基因序列的同源性为99%，确定分离菌为链球菌。

图1 分离株16S rRNA的PCR电泳M：DL-2 000 DNA marker； 1～5：分离株； 4、5：4号病例的分离株； 6：阴性对照

5 诊断

该病通过病菌分离、菌体形态特征(革兰阳性、呈长短链排列的球菌)及细菌PCR鉴定，最终确诊为绵羊链球菌病。

6 防治

6.1 预防 (1)加强饲养管理，重视环境卫生，做好圈舍及场地、用具的消毒工作。(2)做好夏、秋抓膘，冬、春保膘防寒、保暖工作[5]。(3)坚持自繁自养，禁止从疫区引进羊只以及购入羊肉及皮毛产品。需引种时，应按照畜禽检疫规范进行检疫，并隔离21 d，检疫合格后方可混群。(4)在疫区，用羊败血性链球菌病活疫苗(按瓶签注明头份)进行普遍预防注射，经尾根皮下(不得在其他部位)注射接种[6]。

6.2 治疗

6.2.1 抗菌治疗 静脉滴注：(1)0.9%氯化钠50 mL +头孢噻呋钠50 mg；(2)0.9%氯化钠50 mL+维生素B625 mg+维生素C 0.25 g；(3)5%葡萄糖50 mL+乳糖酸红霉素50 mg[剂量以红霉素计5 mg/(kg·bw)]， 连用3～5 d。

6.2.2 辅助治疗 肌内注射：(1)抗炎：地塞米松0.1～0.2 mg/(kg·bw)，1 次/d，连用3～5 d；(2)解 热镇痛：选用对乙酰氨基酚注射液10～15 mg/(kg·bw)； 注意：病羊体温不高于40 ℃，可不用解热药；(3)减轻脏器出血：维生素K3。

6.2.3 增强免疫的特殊方法 全群口服：盐酸左旋咪唑 2.5 mg/(kg·bw)，1次/d，连用5～7 d。

7 讨论

羊链球菌病是近年来庭院养殖过程中的常见病和多发病，属于条件致病菌。在农区，养殖户防疫意识淡薄，基本不采取消毒措施，因此尽快改善饲养环境和强化饲养条件，改变防疫意识是减少发病的重要手段。

链球菌病严重威胁羊群的生命，所以初期选药尤为重要，很容易错过最佳治疗及时机，通过采取上述治疗及防治措施，病情会得到有效控制。

链球菌极易形成生物被膜(为细菌提供一种保护性生活方式)产生耐药性，一般抗生素对该菌治疗效果不佳。在该病的治疗过程中，选择了一个药理拮抗的用药组合(头孢噻呋配合乳糖酸红霉素)，虽然从药理学分类上讲，头孢菌素类(繁殖期杀菌剂)与大环内酯类(快效抑菌剂)联用时存在拮抗作用，但是通过时间差给药，头孢菌素类可以先破坏细菌细胞壁功能和结构的完整性，起踹门作用，而大环内酯类药物可顺势大量进入细菌细胞内，形成较高的胞浆药物浓度，从而产生更好的临床效果。人医中大量的临床试验证明，大环内酯类抗生素可以抑制细菌生物被膜的形成，有利于β-内酰胺类抗生素直接作用于细菌菌体，既可提高治愈率，又能缩短疗程[7-10]。

左旋咪唑属于咪唑并噻唑类抗线虫药，除了具有驱虫活性外，还能明显提高机体免疫反应，它能够恢复外周T淋巴细胞介导的免疫功能，兴奋单核细胞的吞噬作用。所以在治疗的同时应用盐酸左旋咪唑全群口服，对提高羔羊整体的机体免疫力有促进作用，降低了发病率和死亡率。

现阶段，PCR检测在基层兽医临床的应用率极低，但随着PCR检测技术的发展，其高度的灵敏性和特异性，将被广泛应用于畜禽疾病诊断，目的是简便快速的获得诊断结果，确定病原，为临床合理用药提供科学依据。