高尔基体蛋白73与肝癌诊疗相关研究进展

曾 灏 翚 缨 张林芝

广西壮族自治区贵港市人民医院检验科，广西贵港 537100

[关键字]肝癌；GP73；诊疗；研究进展

血清甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）的出现，使得AFP一度被认为是肝癌诊断的首选肿瘤标志物，但其在早期诊断中存在一定的局限性，有部分肝癌患者其血清AFP呈现出较高的假阴性率（可高达40%）或者低值，在明确确诊为肝癌后却多为肝癌晚期，此时已经错过了最有效的治疗时间，限制了AFP在肝癌诊断中的普遍应用[1]。因此，国内外临床方面一直致力于寻求一种能早期发现肝细胞肝癌更有效的肿瘤标志物。过去几十年，临床研究从单个蛋白到组合蛋白，再到蛋白组学及肿瘤自身抗体等，其研究结果均未能尽如人意。

1 GP73的发现

直到2000年，研究成人巨细胞肝炎的美国学者Kladney等[2]在构建患者的肝脏cDNA文库时，应用正常肝细胞cDNA文库的32P标记探针进行差异显示杂交，从中发现在成人巨大细胞肝炎患者的肝脏内，其cDNA可与新城疫病毒发生反应，后利用5’cDNA快速扩增技术和双向测序，得出该cDNA为编码相对分子量为73 kD糖蛋白的基因，即高尔基体蛋 白73（golgi transmembrane glycoprotein73，GP73）基因。经进一步研究发现，GP73基因位于9号染色体，全长3042 bp，根据其基因序列推测其编码的蛋白质分子约为4.5×104个，但由于GP73基因在体内经过大量糖基化处理后，含有较多的酸性氨基酸，使其实际分子量只有73 kD。在一般情况下，GP73能通过多种上皮细胞表现出来，肺部是通过纤毛柱状上皮细胞将GP73表达出来，肾脏是通过远曲小管和集合管上皮细胞表达GP73，前列腺是通过前列腺上皮细胞表达，而肝脏则是由胆管上皮细胞表达，但特殊的是，正常的肝细胞是不表达或者表达量极少的。

2 GP73在肝癌诊断中的临床价值

Kladney等[3]在研究慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、自身免疫性肝炎、酒精性肝硬化以及正常肝组织GP73表达时发现，肝病患者肝组织中GP73表达量与正常受检组相比较高，且是正常受检组的70倍左右，而对各组肝病患者进行GP73表达量之间对比时，发现无明显差异。在2004年，Maitra等[4]研究发现，可以在血清中检测到GP73，并认为GP73可以作为肝脏疾病的标志物。在2005年，英国Block[5]在对美洲旱獭HCC血清GP73含量进行检测时发现，GP73水平与HCC之间关系密切；在同年，Marerero等[6]对352名患者进行研究的时候，发现肝癌患者血清GP73含量与肝硬化患者相比明显升高，并以10个相对单位为临界值，GP73诊断HCC的敏感性和特异性分别为69%和75%，其诊断效果明显优于AFP。Schwegler等[7]的研究结果与Marerero研究结果相似，但其结果显示GP73诊断肝癌的敏感性和特异性都比Marerero的研究结果高，由此认为，GP73可作为早期诊断肝癌的肿瘤标志物之一。

近几年来，我国有较多的学者对GP73在肝癌诊断中的应用进行了研究。崔琦等[8]通过对血清中的AFP、GP73、血清铁蛋白（serum ferritin，SF）及异常凝血酶原（des-gamma-carboxy prothrombin，DCP）单独和联合检测来探讨这四个标志物在原发性肝癌诊断中的临床价值，研究结果显示，四个标志物联合检测均优于各指标单独检测，可提高原发性肝癌的阳性诊断率，对原发性肝癌的早期诊断具有重要的临床价值。国世星[9]通过回顾性分析研究AFP、DCP、甲胎蛋白异质体（alpha-fetoprotein variant-L3，AFP-L3）和GP73在早期原发性肝癌组、肝硬化组、肝炎组、健康对照组中的血清浓度水平时，也证实了GP73联合检测在早期原发性肝癌诊断中具有诊断意义，同时还发现其可用于评估肝脏受损程度。此外，研究表明，在对原发性肝癌的早期诊断中，血清GP73与SF、AFP联合应用能够提高诊断敏感性[10]。

黄风玲等[11]对肝癌患者的肝癌组织及配对癌旁组织进行研究，发现GP73在肝癌组织中多呈阳性表达，在不同分化程度、不同TNM分期、有无血管侵犯患者的肝癌组织中，GP73表达水平差异均有统计学意义，揭示其可能参与肝癌的发生与发展。刘丽萍等[12]通过细胞转染、基因敲除等实验也发现GP73的表达可能与肝肿瘤侵袭、增殖和转移有关。Liu等[13]通过对29例健康受检者和69例经导管动脉化疗栓塞术（TACE）治疗的肝癌患者进行血清GP73的ELISA检测与对比，结果显示，GP73可作为肝癌标志物来评价经导管动脉化疗栓塞治疗后的预后情况。赵睿等[13]与Ai等[14]的研究结果相似，同时发现血清GP73可以作为原发性肝癌患者TACE术疗效判断的指标，尤其是在AFP较低或AFP阴性时，GP73作为疗效的评价指标比AFP更有优势。唐辉等[15]研究发现GP73联合诊断除了对原发性肝癌具有一定诊断价值外，同时也对TACE术后预后具有评估价值。

GP73临床价值的研究，也存在争议。MAO等[16]的研究显示，肝细胞癌患者血清中GP73水平远高于无肝硬化或者慢性肝病患者，但与肝硬化患者相比，差异无统计学意义，提示血清GP73检测无法鉴别肝硬化和肝癌，因此血清GP73对肝癌的诊断无价值，同时血清GP73用作HCC诊断的ROC曲线下面积过小，诊断效能不足。区别于血清AFP水平在术后的立即明显下降，血清GP73水平却在肝癌组织切除后浓度基本一致，进一步提示血清GP73水平与肝癌是否存在没有相关性[17]，并且血清GP73水平与肿瘤细胞的GP73表达水平无相关性[18]。肝癌临床相关资料的分析结果也证实了肿瘤大小、分化程度、TNM分期等临床特征与血清GP73水平无关。故不推荐血清GP73用于原发性肝癌的实验室诊断。与此相反的是，血清GP73在肝纤维化、肝硬化的诊断及预后评估中，表现出值得预期的诊断价值。随着肝纤维化程度加深以及肝硬化逐步进展，血清GP73水平也随之提高，从而将进展期肝纤维化、早期肝硬化与慢性肝病区分开来，提示其对肝硬化的诊断有较高的价值。

综上，GP73在肝癌的临床诊断价值还有待通过进一步大量临床数据地验证和研究，方可下定论，但血清GP73在肝纤维化、肝硬化的临床诊断价值已得到拓展。

3 GP73与肝癌的临床治疗

3.1 GP73与索拉菲尼

索拉菲尼是一种新型多靶向性的治疗肿瘤的口服药物，用于治疗对标准疗法无响应或不能耐受的胃肠道基质肿瘤和转移性肾细胞癌，能选择性地靶向某些蛋白的受体。近几年来，临床方面对索拉菲尼的研究主要集中在肿瘤缺氧微环境、炎症纤维化、转运蛋白以及索拉菲尼的药物动力学等方面，但索拉菲尼对肝癌治疗中的耐药性尚且无明确的结论。杨欢等[19]通过研究发现GP73在肝癌索拉菲尼耐药细胞株中呈高表达，HepG2细胞通过表达GP73能够降低细胞对索拉菲尼的敏感性，耐药细胞株中降低GP73之后能够升高细胞对索拉菲尼的敏感性，从而得到GP73的高表达能够降低HepG2细胞对索拉菲尼的敏感性的结论。杨颖等[20]的研究证实了杨欢的结论，在进一步的研究中，还发现耐药细胞中，GP73、PI3K及p-Akt蛋白表达增加，从而得知PI3K/Akt信号通路的激活以及GP73表达上调，促进上皮细胞-间充质转化可能是肝癌细胞对索拉非尼的耐药机制。因此对GP73做进一步深入研究，能为肝癌靶向药物的耐药研究提供更多的思路。

3.2 GP73与雷帕霉素

雷帕霉素是新型大环内酯的抗排斥药物，同时也是一种哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）的特异性抑制剂，能通过不同的细胞因子受体阻断信号的传导，阻断T淋巴细胞及其他细胞由G1期至S期的进程，从而发挥免疫抑制效应[21]。雷帕霉素是目前世界上最新的强效免疫抑制剂，临床上用于器官移植的抗排斥反应和自身免疫性疾病的治疗，在抗肿瘤治疗中也具有明显疗效。但目前，临床上对于雷帕霉素在肝癌临床治疗中机制尚且不太明确，Wang等[22]通过对细胞水平与动物水平的相关研究发现，mTORC1通路能促使GP73上调，并进一步促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭，而在应用雷帕霉素之后，GP73表达水平能够大幅度降低，从而对肝癌的发生及发展形成抑制作用，由此可表明，mTOR抑制剂雷帕霉素或将成为肝癌治疗的新靶点。

4 结语

自2000年GP73被首次发现以来，就被认为是最具有潜力的肝癌肿瘤标志物，关于GP73的研究一直没有停止。对GP73血清学的检查技术，已由最初手工的酶联免疫检测技术，发展到现在自动化的化学发光检测技术，其检测的可靠性得到进一步地提升，所以越来越多的实验室将GP73检测纳入其检测范围。众所周知，GP73在肝癌诊断中的临床效能还需要更多的临床数据来支持才能得出结论，特别是其对肝癌的早期诊断价值。而GP73检测的临床应用，不应该局限于肝癌，在其他疾病方面的应用，也应该是广大医学工作者关注方向，如GP73对肝纤维化和肝硬化的诊断效能，在此研究方向，已经有一定的研究数据来支持。还要特别注意的是，目前检测的肿瘤标志物只是相关抗原，不仅在某些肿瘤人群中有所表达，在某些非肿瘤患者中也会存在有一定的假阳性率，这会使得单项指标检测的诊断准确率较低，因此，肝癌的检测不应该局限于GP73单项检测，联合其他血清标志物的检测，也是一个重要的发展方向，这样能提高诊断的准确率。

目前针对GP73与肝癌临床治疗的相关研究数据量较少，主要停留在基础研究方面，仍需大数据支持才能应用于临床。但GP73与治疗相关的潜力已得到展现，如上述未提到的GP73中和抗体，其在动物水平上的应用，能够抑制肝脏肿瘤的生长，从而延长了动物的存活期。相信以后会有更多研究发现GP73在治疗方面的价值。

综上所述，随着更多、更深层次研究地进行，GP73的临床价值和治疗作用会得到更广阔的发展和体现。