陶秀林,范 夫,姜 明
(平湖市农业综合行政执法队,浙江 平湖 314200)
BALB/c Nude 小鼠是进行肿瘤学新疗法研究的最常用品种。它是一种无被毛,胸腺和T细胞缺失,B细胞和NK细胞正常,可以结合补体的近交系免疫缺陷鼠,由Charles River Japan公司用BALB/cABom-nu和BALB/cAnNCrj-nu进行交配和回交获得,由于是免疫系统的不完善和近交系的先天生育能力较低,饲养和繁殖的营养条件显得尤为严格,不仅饲料的营养配方要全面,面对不同周龄的小鼠饲养方式也需要进行相应改变,湿饲料、粉饲料和颗粒饲料对其纯合子(nu/nu)乳鼠存活率和体重增长会有较大的影响。因此针对不同周龄的乳鼠用不同性状的饲料,以提高仔鼠的生存率和体重。
1.1实验动物与饲料
1.1.1实验动物 SPF/ELITE级BALB/c Nude妊娠20日的杂合子孕鼠,240只,由浙江维通利华实验动物技术有限公司提供,生产许可证号:SCXK(浙)2018-0001。
1.1.2颗粒饲料 由北京科澳协力饲料有限公司生产的颗粒饲料,选择SPF大小鼠生长繁殖饲料,饲料配方为:玉米、豆粕、鱼粉、面粉、麸皮、食盐、磷酸氢钙、石粉;其中蛋白质24.02%、脂肪12.95%、碳水化合物63.03%;颗粒直径为12 mm,长度为200~400 mm,放入饲料盒中自由摄取。
1.1.3湿饲料 采用以上固体颗粒饲料,以固体饲料(kg):水(L)比1∶1方式配置浸泡20 min后使用,放入饲料盒中自由摄取。
1.1.4粉饲料 采用以上固体颗粒饲料,用打粉机打碎,过3号50目筛,滤除颗粒饲料,放入饲料盒中自由摄取。
1.1.5固、湿饲料搭配饲养 采用以上固体颗粒饲料和湿饲料质量比为1:1配置,放入饲料盒中,固、湿饲料用隔板隔开,自由摄取。
1.2分组和实验方法
1.2.1分组 将240只SPF/ELITE级BALB/c Nude妊娠20日的杂合子孕鼠进行饲养1 d,选取21日分娩的初生乳鼠,选取带乳鼠的母鼠120只,雌雄各半,分为4组,雌雄均匀,分别为颗粒饲料组、湿饲料组、粉饲料组、固湿饲料搭配组。
1.2.2方法 在乳鼠出生3 d后鉴别出纯合子(nu/nu)和杂合子(nu/-),仅保留纯合子(nu/nu),21 d精确离乳后对其首次称重,以后每周称重一次,直至第70 d,共8次称重。
1.2.3乳鼠存活率 剔除全部杂合乳鼠的最佳时间应该在新生乳鼠出生24 h内,超过3 d则会极大地影响纯合裸小鼠的正常生长发育[1],由于24 h内很难分辨出纯合子,所以在第3 d进行。分出的纯合子(nu/nu)乳鼠每日记录存活情况。
1.2.4饲养环境 动物饲养于SPF隔离器环境中,温度控制在20~24℃,相对湿度40%~70%,明暗交替12 h,换气次数20~50次/h。垫料和饲料均经过钴60辐射灭菌。采用自动饮水系统,饮水自由,饲料营养成分符合国家标准[2];饲料置于开放式饲料盒内,自由觅食。
2.1体重生长 BALB/c Nude乳鼠离乳后,每组雄性和雌性乳鼠在3周龄至10周龄体重变化见表1和表2。
表1 不同饲养方式饲养雄性BALB/c nude乳鼠在各周龄的体重(g)
表2 不同饲养方式饲养雌性BALB/c nude乳鼠在各周龄的体重(g)
根据表1显示,雄性BALB/c nude乳鼠颗粒饲料组与湿饲料组在6周龄时体重有比较显著性差异(P<0.05),与固、湿饲料搭配组在3周龄、4周龄和6周龄,体重比较上均有显著性差异(P<0.05)。
根据表2显示,雌性BALB/c nude乳鼠颗粒饲料组与湿饲料组3周龄、4周龄、5周龄、9周龄体重比较上有显著性差异(P<0.05),与粉饲料组3周龄、4周龄、7周龄、9周龄,与固、湿饲料搭配组3周龄、4周龄、5周龄、7周龄、9周龄的体重比较亦存在显著性差异(P<0.05)。
2.2存活率 BALB/c Nude乳鼠分娩后第3天,从乳鼠中分出纯合子(nu/nu)的乳鼠每日记录存活情况,结果见表3,未见明显差异。
表3 不同饲养方式的仔鼠存活率
BALB/c Nude鼠属于啮齿类动物,门牙生长较快,需经常啃咬坚硬物品磨牙,故饲料经常做成颗粒状,软硬适度,以符合啃咬特性[3]。市场上的实验动物饲料大体分为繁殖饲料和维持饲料,BALB/c Nude鼠的离乳周期为3周,对于这一阶段的动物进行特殊的饲养方式,会对后期的体重和存活率产生一些影响。
从结果上看,对于BALB/c Nude雄性鼠,用固湿饲料混合饲养对3周龄至4周龄的体重增加相对于颗粒饲料饲养有显著性差异(P<0.05);对于BALB/c Nude雌性鼠,用湿饲料和粉饲料饲养,在3周龄至4周龄的体重增加上与颗粒饲料组比较有显著性差异(P<0.05),用固湿饲料搭配对3周龄至5周龄的体重增加相对于颗粒饲料组有显著性差异(P<0.05),7周龄和9周龄也有统计学差异(P<0.05);而在存活率上,虽然固湿饲料混合饲养在存活率上有一定上升趋势,但未有统计学意义。通过以上结论,可以判断在BALB/c Nude母鼠妊娠期,通过固湿饲料混合饲养方式,可以有效提高3周龄-5周龄内的小鼠体重。
BALB/c Nude鼠销售最佳时间是4周龄至6周龄,往往客户对于这一阶段周龄的动物体重要求也很高,通过固湿饲料搭配饲养方式可以有效提高这一阶段动物的体重,也有提升动物存活率的趋势,降低了BALB/c Nude鼠淘汰率,从而增加企业的利润空间。