牛结节性皮肤病诊断

周莉媛 ，陈斌，裴超信，邵靓，王强，车从成，丁梦蝶

（1.四川省动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041；2.四川省绵阳市动物疫病预防控制中心，四川 绵阳 621000；3.四川省三台县动物疫病预防控制中心，四川 三台 621100）

牛结节性皮肤病又称牛结节疹、牛结节性皮炎，是由痘病毒科、脊椎动物痘病毒亚科、山羊痘病毒属的牛结节性皮肤病病毒（LSDV）引起的一种急性、亚急性传染病。牛是LSDV的天然宿主，各年龄和品种的牛均易感，发病率在2%～45%，死亡率一般在10%以下。节肢动物的机械性间接传播被认为是LSDV传播的主要途径。病牛临床特征是发热、消瘦，淋巴结肿大，皮肤水肿，局部形成坚硬的结节或溃疡，其皮张鞣制后具有凹陷或孔洞，利用价值大大降低。

1 临床症状

患牛头、颈、躯干、四肢皮肤有散在的直径约1～2 cm的硬结节，结节处皮温较高，触之牛痛感明显。病牛精神、食欲无明显变化。

2 实验室诊断

2.1 实验材料 采集病牛血样及口、鼻拭子和结节创口拭子。

检测试剂：牛结节性皮肤病病毒实时荧光PCR检测试剂盒。

2.2 病毒DNA提取 样品处理后使用核酸提取试剂盒（磁珠法）和核酸自动提取仪进行核酸提取。

2.3 实时荧光PCR反应 严格按照检测试剂说明书操作。反应体系：无菌无核酸酶水5.9 μL，PCR 反应液10 μL，荧光探针2.1 μL，模板DNA 2 μL，总反应体积20 μL。反应条件：95 ℃2 min，循环95 ℃5 s，60 ℃35 s，共40次，每次循环的第二步（60 ℃ 35 s）收集荧光信号（报告基团“FAM”，淬灭基团“None”）。

2.4 结果判定 阳性对照Ct 值≤30 并出现特定的扩增曲线，阴性对照无Ct值并且无特定扩增曲线，实验结果成立。被检样品Ct值≤36并出现特定的扩增曲线，为牛结节性皮肤病病毒阳性。被检样品均呈阳性。

3 小结

牛结节性皮肤病病毒与山羊痘病毒、绵羊痘病毒同属山羊痘病毒属，三者基因组的同源性高，羊痘病毒属的病毒可产生共同的中和抗体，故依赖血清学方法较难鉴别该属病毒，常规检测方法不能对早期发病动物进行快速准确的诊断。采用实时荧光PCR 方法检测牛结节性皮肤病病毒是既快速又准确的检测方法。

为防止该病扩散，应严格按照《牛结节性皮肤病防治技术规范》的要求扑杀病牛并做好无害化处理，同群牛进行隔离，限制牛只、牛产品和饲料及相关用具的移动，圈舍和隔离环境彻底消毒，做好蚊虫的消杀工作，同时对周边养牛场（户）开展排查，限制周边牛只移动交易。必要时，牛可采用山羊痘疫苗（按照山羊的5 倍剂量）紧急免疫。