对血型血清学检查中疑难血型进行判断及处理的方法

战振宇，李晓阳

（吉林通化市第二人民医院 检验科，吉林 通化）

0 引言

ABO 血型系统是最早的血型系统，发现时间早于1900年，是对临床输血有重要意义的血型系统。在ABO 血型检测中，常受多种因素干扰，使判断和处理变得复杂化和不合理化，影响临床输血的安全，而一般干扰因素限于年龄、性别、遗传或者疾病类型和治疗方式方法等，以至于显示出血型正反定型不一致的情况。正确的血型鉴定不仅是保证输血安全性的前提，也是避免出现错误血型定型导致溶血性输血异常反应，造成受血者生命安全受到威胁的关键[1-2]。血型是一个庞大而复杂的系统，也正因为血型定型和检查的复杂性，从而加大了判断和处理的难度，因此需要不断找寻和更新血型判断和处理方法，持续保证临床输血的安全性。本次研究主要探究血型血清学检查中疑难血型进行判断及处理的方法，依据疑难血型（ABO）产生原因整理分析正确有效的疑难血型鉴别和处理方法，保证血型鉴别准确性。

1 资料与方法

1.1 临床资料

经过伦理委员会批准，同意抽取我院55 例疑难血型标本进行研究调查，研究时间为2018 年10 月至2019 年11 月。其中男25 例，女30 例，年龄在23～56 岁，平均（41.84±4.59）岁，其中疑难血型标本中存在的疾病类型或健康者科室种类包括5 例健康体检者、4 例孕产妇、2 例肺癌患者、2 例甲状腺功能亢进患者、6 例外科手术患者、7 例自身免疫性溶血性贫血患、12 例白血病患者、13 例胃肠道恶性肿瘤患者、4 例多发性骨髓瘤患者。

1.2 仪器与试剂

检查与鉴别仪器与试剂包括ABO、RhD 血型定型检测卡（长春博迅生物试剂有限公司生产）；抗人球蛋白检测卡（长春博迅生物试剂有限公司生产—用于抗人球蛋白交叉配血）；抗人球蛋白检测卡（长春博迅生物试剂有限公司—用于不规则抗体筛查）；血型血清学用离心机（长春博迅生物试剂有限公司）；免疫微柱孵育器（长春博迅生物试剂有限公司）；单克隆抗A、抗B 血型定型试剂（长春博讯生物医药有限责任公司）等[3-4]。

1.3 标本

所有采集标本均为无凝块、无溶血的ED-TA-K2抗凝血（输血前72 h 内抽取）。

1.4 方法

1.4.1 定型前准备

首先严格核对采集标本的标签，仔细核查试剂最佳使用期和保质期（杜绝使用过期试剂），复检ABO 血型。了解采集标本患者的身份、疾病史（输血史、家族史等）、过敏史、病程、临床诊断及治疗情况；排除判断和处理方法不当或试剂操作手法等影响ABO 血型定型的不确定因素。

1.4.2 规范化采集血样

二次采集血液样本（规范化），凝胶卡采用不同批号区分，包括反定红细胞。二次检测疑难血型（ABO 血型）正反定型。

1.4.3 实验步骤

采用ABO、RhD 血型定型检测卡（长春博迅生物试剂有限公司生产），同时标注好序号。将血型标本离心后，取红细胞悬液0.8%（压积红细胞片配成）；依次加入凝胶卡（各50 μL）第1～4 孔中；待检者血浆（各50 μL）加入第5～6 孔中；将反定A1、B 型红细胞配制成0.8%的浓度，依次加入（各50 μL）第5～6 孔中。采用血型血清学用离心机（长春博迅生物试剂有限公司—用于离心血型标本）离心5 min，速度依次为2 min，900 r/min 和3 min，1500 r/min。离心后取出卡片判定结果（肉眼判读）。

1.4.4 结果判读标准

阳性：血型标本离心后，红细胞抗原和血清抗体形成的抗原抗体复合物，在微柱凝胶表面有浮现或少许复合物悬浮在胶中。

阴性：被检红细胞抗原没有相应抗体可以结合，未显现出特异性复合物（抗原和抗体结合物），凝胶微孔可通过红细胞（被检的单个红细胞），沉于凝胶底部[5-6]。

2 结果判读及分析处理

24 例血型标本的血清抗体水平下降、10 例红细胞抗原减弱、4 例冷凝集素、4 例人为因素、4 例血浆因素、7 例不规则抗体、1 例亚型、1 例弱D 血型。

2.1 血清抗体水平下降、冷凝集素

离心后，凝胶中悬浮状态呈分散状或沉于底部（反定型实验中的红细胞）。处理方法：增加血浆用量；延长反应时间，将凝胶卡在室温下放置15 min 后再离心。

冷凝集素呈阳性或弱阳性。处理方法：将凝胶卡在37 ℃的免疫微柱孵育器放置15 min 后，离心后若正反定型相符则为冷凝集素。

2.2 红细胞抗原减弱、不规则抗体

离心后，正定型实验中的红细胞分散在凝胶中间，逐渐趋于底部（抗原变弱）。处理方法：增加红细胞悬液浓度。

反定型实验微柱凝胶卡均呈阳性或弱阳性。处理方法：将凝胶卡在37 ℃的免疫微柱孵育器放置15 min 后，排除冷凝集素后再行不规则抗体检查。

2.3 血浆因素、人为因素、弱D 血型、亚型

异常免疫球蛋白可造成正反定型实验凝胶卡均呈阳性或弱阳性。处理方法：采用生理盐水洗涤三遍，再配制成红细胞悬液进行实验。

配制红细胞浓度不合适；标本放置时间过久被细菌污染。处理方法：按照操作程序重新进行实验。

凝胶卡第3 孔（抗D）瀑布状分布于凝胶中（红细胞）。处理方法：依照《全国临床检验技术规范》中的方法进行确认。

正定型实验中，分散于凝胶中间（红细胞），或呈拖尾状或呈混合外观。处理方法：依照《全国临床检验技术规范》中的方法再行确认。

3 讨论

本次研究的55 例血型标本中，存在例数最多的是由于血清抗体水平下降造成的，而此类标本中，有超过半数的都是50 岁以上的老年人（老年人免疫力下降、抗体减弱）。在鉴定老年病例时，可加大血清量，保持4 ℃以下的温度保存抗原抗体，或者延长其反应时间等来保证血型正反定型的一致性。疑难血型（ABO 血型）是复杂的血型系统，本次研究检测的结果显示，55 例血型标本（ABO），经过正确定型试验操作可得，24 例血型标本的血清抗体水平下降、10 例红细胞抗原减弱、4 例冷凝集素、4 例人为因素、4 例血浆因素、7 例不规则抗体、1 例亚型、1 例弱D 血型[7-8]。而影响ABO 血型鉴定的因素有很多，但是血型鉴定是临床输血的基础和关键，也是患者的基本保证，因此血型鉴定是临床中非常重要的临床诊断基础，如何有效避免血型鉴定干扰因素影响，提高血型鉴定准确性和可靠性是临床界一直探究和关注的话题。保证临床输血安全性的首要条件就是正确鉴定红细胞血型，减少个体差异影响和相关疾病或年龄、免疫力影响等因素的干扰，尽力规范血型鉴定操作方法，避免造成正反定型差异。综上所述，微柱凝胶技术检查血型血清的结果更加具有特异性和直观性、清晰性，能将常规仪器和试剂检查未发现的问题清楚展示出来，并结合正确有效的处理方法鉴定疑难血型，找出合理分析方法，使复定血型操作变得规范化，以保证临床输血的安全性和可靠性，具有一定的临床价值。